本文選題：RNA恒溫擴增　切入點：鑒定　出處：《中國人獸共患病學(xué)報》2017年09期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的建立RNA恒溫擴增實時檢測技術(shù)快速鑒定偶發(fā)分枝桿菌(RIARD-MF)的方法,評估其在鑒定分枝桿菌臨床分離株中的應(yīng)用效果。方法將偶發(fā)分枝桿菌的16SrRNA特異序列作為目的靶標進行檢測,設(shè)計含T7啟動子逆轉(zhuǎn)錄擴增引物和RNA探針,分別對5種非分枝桿菌細菌、20種分枝桿菌標準株和259株臨床分枝桿菌分離株進行42℃恒溫擴增實時檢測,參考標準為PCR基因測序結(jié)果。結(jié)果RIARD-MF方法學(xué)檢測靈敏度可達60CFU/mL。在25種細菌的RIARD-MF特異性檢測中:只有偶發(fā)分枝桿菌檢測結(jié)果為陽性,其余24種細菌均為陰性,與測序檢測結(jié)果一致。在檢測分枝桿菌臨床分離菌株時,RIARD-MF鑒定偶發(fā)分枝桿菌5株,其余為非偶發(fā)分枝桿菌,與測序結(jié)果一致,檢測靈敏度和特異度均為100%。結(jié)論 RIARD-MF鑒定偶發(fā)分枝桿菌具有較高的特異度、靈敏度和準確性,且檢測快速,有望成為一種新的偶發(fā)分枝桿菌臨床分離菌株鑒定方法。
[Abstract]:Objective to establish a real-time detection of RNA isothermal amplification technique for rapid identification of Mycobacterium fortuitum (RIARD-MF) method, and evaluate the application effect in the identification of mycobacteria in clinical isolates. Methods 16SrRNA specific sequence of Mycobacterium fortuitum as objective target detection, design containing T7 promoter transcription PCR primers and RNA probe respectively to 5 non Mycobacterium bacteria, 20 Mycobacterium standard strains and 259 clinical isolates of Mycobacterium were amplified at 42 C for the real-time detection of the reference standards for PCR gene sequencing. RIARD-MF specific test results RIARD-MF method detection sensitivity to 60CFU/mL. in 25 kinds of bacteria in Mycobacterium fortuitum: only the test result is positive, the rest 24 kinds of bacteria were negative, and the sequencing results were consistent. In the detection of Mycobacterium tuberculosis clinical isolates, RIARD-MF identified 5 strains of Mycobacterium fortuitum, the More than for the non Mycobacterium fortuitum, consistent with the sequencing results, specificity, sensitivity and specificity for detecting 100%. RIARD-MF identification conclusion Mycobacterium fortuitum has high sensitivity and accuracy, and fast detection, is expected to become a new kind of Mycobacterium tuberculosis clinical isolates and identification methods.

【作者單位】： 中國海洋大學(xué)環(huán)境科學(xué)與工程學(xué)院;同濟大學(xué)附屬上海市肺科醫(yī)院/上海市結(jié)核病(肺)重點實驗室;
【基金】：國家十二五傳染病重大專項課題(2013ZX10003001-003) 上海市自然基金課題(17ZR1423400)~~
【分類號】：R440;R516

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本文編號：1651162