本文選題：自身免疫性疾病　切入點：自身抗體　出處：《暨南大學》2016年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的:建立一種高效、快速(5~8 min)、簡便的膠體金免疫層析試紙條應用于臨床檢測血清中自身抗體,用來輔助診斷自身免疫性疾病(Autoimmune diseases,AID),實現(xiàn)檢測結果信息快速、及時的反饋。方法:抗SSA/SSB自身抗體免疫層析檢測技術的建立,是利用金黃色葡萄球菌A蛋白(SPA)標記于金納米顆粒(Gold nanoparticles,Au NPs)上,并將金標SPA噴涂在結合墊上,抗原(SSA/SSB)噴涂在硝酸纖維素膜(NC膜)上特定位置作為檢測線(Test line,T line),山羊抗人的多克隆抗體噴涂在NC膜的另一特定位置作為校準線(Calibration line,C line);對試紙條的樣品墊、結合墊、NC膜、血清樣品稀釋緩沖液以及稀釋倍數(shù)等方面的條件進行綜合優(yōu)化并組裝試紙條。利用上述方法建立的膠體金免疫層析試紙條檢測血清樣本并與目前醫(yī)院臨床上常用的檢測方法進行檢測結果符合率的比較。結果:本實驗建立的抗SSA抗體膠體金免疫層析試紙條與目前國內(nèi)臨床常用的LIA方法檢測血清樣本的結果總符合率為95.12%;本實驗建立的抗SSB抗體膠體金免疫層析試紙條與目前臨床常用的LIA方法檢測血清樣本的結果總符合率為97.82%。結論:本研究建立檢測抗SSA抗體、抗SSB抗體的膠體金免疫層析試紙條檢測臨床血清樣本與目前國內(nèi)臨床上使用的主要方法LIA、ELISA的檢測結果均有較高的符合率,該方法操作簡便,檢測結果可在(5~8 min)內(nèi)完成,有良好的市場應用前景。目的:建立一種新的、可裸眼觀察檢測結果的等離子納米傳感器,該方法檢測結果判讀簡單,無需昂貴的儀器,可適用于醫(yī)療資源匱乏的地區(qū)。方法:利用過氧化氫能夠腐蝕三角銀納米片,使得三角銀納米片的尺寸大小和形狀發(fā)生改變,局部等離子共振(LSPR)發(fā)生改變從而表現(xiàn)出特有的光學特征(由藍色變紫色)。根據(jù)這一現(xiàn)象,本研究建立了一種等離子納米傳感器去檢測實際水樣中的三價鉻離子Cr(III)。該方法主要是在競爭ELISA的基礎上(過氧化氫酶標記二抗),利用過氧化氫和三角銀作為底物顯色系統(tǒng),過氧化氫酶消耗過氧化氫來調(diào)控體系中剩余過氧化氫的濃度,進而調(diào)控三角銀納米片受腐蝕的程度。三角銀的這種LSPR變化強度(顏色和吸收光譜)與鉻的濃度呈正相關,我們對該方法進行可行性驗證、靈敏度和特異性評價并用該方法檢測實際水樣中的加標Cr(III)的濃度,檢測結果與ICP-MS的檢測結果進行比較。結果:本研究建立的等離子傳感器檢測Cr(III)可裸眼檢測的靈敏度達到6.25 ng/m L。用銀納米片的LSPR位移分析時,該方法的線性范圍為3.13 ng/m L-50 ng/m L,最低檢測限為3.13 ng/m L,并且顯示了良好的特異性。結論:本研究建立的檢測Cr(III)的等離子納米傳感器,可以用于醫(yī)療資源匱乏的地區(qū),無需使用昂貴的儀器也能對實際水樣中的重金屬濃度做初步檢測。
[Abstract]:Objective: to establish a highly efficient, rapid and rapid colloidal gold immunochromatographic test strip for clinical detection of autoimmune diseases autoimmune diseases (autoimmune diseases) AIDD, and to realize the rapid information of the detection results, and to establish a simple and convenient colloidal gold immunochromatographic test strip for the clinical detection of autoimmune diseases (autoimmune diseases) and autoimmune diseases (AIDD). Methods: the establishment of anti SSA/SSB autoantibody immunochromatographic technique was to use staphylococcus aureus protein A protein (spa) to label gold nanoparticles Gold nanoparticleson au NPs and spray gold labeled SPA on the binding pad. Antigenic SSA-SSBs sprayed on the nitrocellulose membrane / NC membrane) as the test line test line, goat anti-human polyclonal antibody sprayed at another specific location of the NC membrane as calibration line Calibration line line; for the sample pad of the test strip, combined with the pad for the NC film, The conditions of dilution buffer and dilution multiple of serum sample were optimized and the test strip was assembled. The colloidal gold immunochromatographic strip was used to detect the serum sample and it was compared with the current clinical practice in hospital. Results: the total coincidence rate of the test strip established in this experiment with that of the LIA method commonly used in China is 95.12%. The total coincidence rate of the gold immunochromatographic strip established by the experiment for the detection of serum samples by LIA method is 97.82.Conclusion: this study established the method for detection of anti SSA antibody. The detection of serum samples by colloidal gold immunochromatographic test strip of anti-#en0# antibody has a high coincidence rate with that of the main clinical method used in China at present. The method is simple and easy to operate, and the result can be completed within 58 mins. Objective: to establish a new plasma nanosensor which can be observed by naked eyes. Methods: hydrogen peroxide can be used to corrode triangular silver nanoparticles and change their size and shape. Local plasmon resonance (LSPRA) changes to exhibit unique optical characteristics (from blue to purple). According to this phenomenon, In this study, a plasma nanosensor was developed to detect trivalent chromium ions in real water samples. The method was mainly based on competitive ELISA (catalase labeled second antibody, using hydrogen peroxide and silver triangle as substrate color system). Catalase consumes hydrogen peroxide to regulate the concentration of residual hydrogen peroxide in the system, and then to regulate the degree of corrosion of triangular silver nanoparticles. The intensity of LSPR change (color and absorption spectrum) of triangular silver is positively correlated with the concentration of chromium. We verified the feasibility of the method, evaluated the sensitivity and specificity of the method, and used this method to detect the concentration of labeled Cr-III in real water samples. The results were compared with those of ICP-MS. Results: the sensitivity of the plasma sensor developed in this study was 6.25 ng/m / L. when using the LSPR displacement analysis of silver nanoparticles, The linear range of this method is 3.13 ng/m L-50 ng/m / L, and the lowest detection limit is 3.13 ng/m / L, and it shows good specificity. Conclusion: the plasma nanosensor developed in this study can be used in the areas with scarce medical resources. The concentrations of heavy metals in real water samples can be preliminarily detected without the use of expensive instruments.
【學位授予單位】：暨南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R446.6

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本文編號：1617655