本文選題：Tat-LK　切入點(diǎn)：RNA　出處：《解放軍醫(yī)學(xué)雜志》2017年08期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的探討細(xì)胞穿透肽Tat-LK15介導(dǎo)siRNA干擾大鼠脊髓背角神經(jīng)元型一氧化氮合酶(nNOS)表達(dá)對(duì)神經(jīng)病理性疼痛的治療效應(yīng)。方法采用Tat-LK15介導(dǎo)FAM-siRNA轉(zhuǎn)染原代大鼠脊髓背角神經(jīng)元細(xì)胞(RN-dsc),于倒置熒光顯微鏡觀察其轉(zhuǎn)染效果。健康雄性SD大鼠50只,隨機(jī)分為5組(n=10):正常組、假手術(shù)組、神經(jīng)病理性疼痛組(SNL組)、Tat-LK15-nNOS siRNA組(TS組)和Tat-LK15-NC siRNA組(TN組)。采用脊神經(jīng)結(jié)扎法(SNL)制作神經(jīng)病理性疼痛模型,正常組不予任何處理,假手術(shù)組僅暴露脊神經(jīng);SNL組、TS組、TN組構(gòu)建SNL模型同時(shí)鞘內(nèi)置管,于第7天開始每天分別鞘內(nèi)注射10μl生理鹽水、10μl含5μg siRNA的Tat-LK15-nNOS siRNA和Tat-LK15-NCsiRNA,持續(xù)7d。建模前1d及建模后3、7、10、14d測(cè)定各組大鼠機(jī)械縮足反應(yīng)閾值(PWMT)及熱縮足反應(yīng)潛伏期(PWTL)。第14天測(cè)定結(jié)束后取L4-6節(jié)段脊髓,采用q-PCR及Western blotting檢測(cè)脊髓背角nNOS表達(dá)水平。結(jié)果倒置熒光顯微鏡觀察顯示,Tat-LK15可成功介導(dǎo)siRNA轉(zhuǎn)染原代大鼠脊髓背角神經(jīng)元。與假手術(shù)組比較,SNL組建模后第3天起PWMT降低、PWTL縮短,脊髓背角nNOS mRNA及蛋白表達(dá)上調(diào)(P0.01),正常組上述指標(biāo)與假手術(shù)組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與SNL組比較,TS組第10、14天時(shí)PWMT增高、PWTL延長(zhǎng),脊髓背角nNOS mRNA及蛋白表達(dá)降低(P0.01),TN組上述指標(biāo)與SNL組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論 Tat-LK15可成功介導(dǎo)nNOS siRNA轉(zhuǎn)染脊髓背角神經(jīng)元,沉默nNOS基因的過度表達(dá),對(duì)SNL大鼠神經(jīng)病理性疼痛具有一定的治療作用。
[Abstract]:Objective to investigate the therapeutic effect of cellular penetrating peptide (Tat-LK15) mediated by siRNA on the expression of neuronal nitric oxide synthase (NOS) in the spinal dorsal horn of rats. Methods Tat-LK15 mediated FAM-siRNA was used to transfect the primary spinal cord dorsal horn neurons into fine neurons. The transfection effect of RN-dscus was observed by inverted fluorescence microscope. The rats were randomly divided into 5 groups: normal group, sham-operated group, neuropathic pain group, Tat-LK15-nNOS siRNA group (TS group) and Tat-LK15-NC siRNA group (TN group). Spinal nerve ligation was used to make neuropathic pain model. In the sham operation group, only the spinal nerve was exposed to the SNL group. The TS group and the TN group were used to construct the SNL model and to place an intrathecal tube in the sheath at the same time. Tat-LK15-nNOS siRNA and Tat-LK15-NCsiRNAs containing 5 渭 g siRNA were injected intrathecally into the sheath of 10 渭 l saline 10 渭 l daily for 7 days from the 7th day onwards. The threshold of mechanical foot contraction and the latent period of thermal contraction were measured 1 day before modeling and 3 days after modeling. The latency of thermal contraction was measured on the 14th day. L4-6 segments of spinal cord were taken after completion. The expression of nNOS in the dorsal horn of spinal cord was detected by q-PCR and Western blotting. Results the results of inverted fluorescence microscope showed that Tat-LK15 could successfully mediate siRNA transfection into primary spinal dorsal horn neurons of rats. Compared with sham operation group, PWMT decreased the length of PWMT from the 3rd day after modeling. The expression of nNOS mRNA and protein in the dorsal horn of spinal cord was up-regulated (P 0.01). There was no significant difference in the above indexes between the normal group and the sham operation group, and the increase of PWMT in the TS group was longer than that in the SNL group on the 10th and 14th day after operation. The expression of nNOS mRNA and protein in the dorsal horn of spinal cord was decreased. There was no significant difference between the two groups. Conclusion Tat-LK15 can successfully transfect nNOS siRNA into spinal dorsal horn neurons and silence the overexpression of nNOS gene. It has certain therapeutic effect on neuropathic pain in SNL rats.
【作者單位】： 江西省婦幼保健院麻醉科;廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院麻醉科;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81100817,81371233) 廣東省自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(S2012010009271)~~
【分類號(hào)】：R402

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本文編號(hào)：1617426