本文選題：鮑曼不動桿菌　切入點：亞胺培南　出處：《寧夏醫(yī)科大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的1、通過對OXA、Ade ABC、Car O基因及生物膜形成在臨床分離的亞胺培南耐藥和敏感鮑曼不動桿菌中的分布特性的研究,進一步探討鮑曼不動桿菌對亞胺培南的耐藥機制。2、通過生物膜對苯唑西林酶(OXA)和Ade ABC外排泵基因表達的影響研究,揭示生物膜的形成對OXA和Ade ABC外排泵相關耐藥機制的影響,探討生物膜在鮑曼不動桿菌對亞胺培南耐藥方面的作用機制及作用方式。方法運用多重PCR及PCR技術對2014年11月-2015年4月寧夏醫(yī)科大學總醫(yī)院臨床分離并經鑒定和確認的106株亞胺培南耐藥和102株亞胺培南敏感的鮑曼不動桿菌分別進行OXA、Ade ABC、Car O基因的檢測;采用微量滴定板法模擬生物膜在體內的生長制備生物膜模型及定量實驗;實時熒光定量PCR技術對不同狀態(tài)下OXA-23、Ade B基因表達量進行檢測;E-test方法對產膜與非產膜菌株亞胺培南的最低抑菌濃度(MIC)進行測定。結果1、OXA-23在亞胺培南耐藥和敏感菌株中的檢出率分別為99.1%和2.9%,經卡方檢驗P0.05;在所有檢測菌株中OXA-51基因均被檢出,而OXA-58基因均未被檢出;OXA-24基因僅在一株耐藥菌株中檢出。相反,Ade ABC基因在耐藥和敏感菌株分布具有較大差異,Ade A、Ade B、Ade C基因及三個基因共存在耐藥菌株中的檢出率均為98.1%(104/106),而敏感菌株中Ade A、Ade B、Ade C的檢出率分別為64.7%(66/102)、82.4%(84/102)、66.7%(68/102),三個基因共存的檢出率僅為64.7%(66/102),P0.05。Car O基因的檢出率較高,分別為97.2%(103/106)和99.0%(101/102),P0.05。產生物膜菌株在亞胺培南耐藥和敏感菌株中均具有較高的比重,分別為67.9%和75.5%,P0.05。2、106株亞胺培南耐藥鮑曼不動桿菌中產生物膜和不產生物膜菌株分別占67.9%和32.1%;生物膜狀態(tài)下的菌株OXA-23、Ade B基因的相對表達量明顯高于普通肉湯培養(yǎng)和浮游狀態(tài)下基因的相對表達量(P0.05);產膜比非產膜菌株亞胺培南MIC更高,P0.05結論鮑曼不動桿菌的生物膜形成能夠促進OXA-23和Ade ABC外排泵基因的表達,從而增強鮑曼不動桿菌對亞胺培南的耐藥性。結論1、OXA-51基因是所有亞胺培南耐藥和敏感菌株共有的基因,OXA-23基因是除OXA-51外最流行的基因,是該醫(yī)院耐亞胺培南鮑曼不動桿菌的最主要OXA亞型,提示其在鮑曼不動桿菌對碳青霉烯類抗生素耐藥機制中起到了重要的作用;Ade ABC基因在耐藥和敏感菌株分布具有較大差異,Ade ABC外排泵在降低鮑曼不動桿菌對亞胺培南的敏感性,增強細菌耐藥性方面起著重要作用;Car O基因幾乎在全部菌株中被發(fā)現(xiàn),外膜蛋白Car O的改變對于降低鮑曼不動桿菌對亞胺培南的敏感性的可能性不大;臨床鮑曼不動桿菌所引發(fā)的的感染多數(shù)與生物膜的形成有關。2、鮑曼不動桿菌的生物膜形成能夠促進OXA-23和Ade ABC外排泵基因的表達,從而增強鮑曼不動桿菌對亞胺培南的耐藥性。
[Abstract]:Objective 1. To study the distribution of OXA Ade ABCCAR O gene and biofilm formation in clinical isolates of imipenem resistant and acinetobacter baumannii. In order to explore the drug resistance mechanism of Acinetobacter baumannii to imipenem, the effect of biofilm on the gene expression of oxa and Ade ABC efflux pump was studied to reveal the effect of biofilm formation on the mechanism of drug resistance related to OXA and Ade ABC efflux pump. To explore the mechanism and mechanism of biofilm on the resistance of Acinetobacter baumannii to imipenem. Methods Multiplex PCR and PCR techniques were used to isolate clinical isolates from November 2014 to April 2015 in the General Hospital of Ningxia Medical University. 106 strains of imipenem resistant and 102 strains of Acinetobacter baumannii which were sensitive to imipenem were detected for the gene of Oxa Ade ABCCARO. The biofilm model and quantitative experiment were established by microtitration plate method to simulate the growth of biofilm in vivo. The expression of OXA-23Ade B gene was detected by real-time fluorescence quantitative PCR. The minimum inhibitory concentration of imipenem was determined by E-test method. Results 1 OXA-23 was found to be resistant to imipenem and sensitive to imipenem. The detection rates of OXA-51 gene were 99.1% and 2.9, respectively, and were detected by Chi-square test (P0.05), and the OXA-51 gene was detected in all the tested strains. However, OXA-58 gene was not detected in only one drug-resistant strain. On the contrary, the distribution of Ade ABC gene in resistant and sensitive strains was significantly different. For 98.1 / 104 / 106, the detectable rate of Ade Amo-Ade Ade Ade C in sensitive strains was 64.7 / 102and 82.44 / 102respectively. The positive rate of the coexistence of the three genes was only 64.766 / 102P0.05.Car O. The biofilm producing strains have a high proportion in imipenem resistance and sensitive strains. The percentage of biofilm-producing and non-biofilm-producing strains in acinetobacter baumannii was 67.9% and 32.1respectively, and the relative expression of OXA-23Ade B gene in biofilm was significantly higher than that in broth culture and phytoplankton. The relative expression of P0.05G gene was higher than that of imipenem MIC. Conclusion the biofilm formation of Acinetobacter baumannii can promote the expression of OXA-23 and Ade ABC efflux pump genes. Conclusion the OXA-51 gene is the most popular gene except OXA-51, which is common to all imipenem resistant and sensitive strains, and can enhance the resistance of Acinetobacter baumannii to imipenem. Is the main OXA subtype of Acinetobacter baumannii resistant to imipenem in this hospital. The results suggest that Ade ABC gene plays an important role in the resistance mechanism of Acinetobacter baumannii to carbapenem antibiotics. The Ade ABC efflux pump can reduce the susceptibility of Acinetobacter baumannii to imipenem. The enhancement of bacterial resistance plays an important role in the bacterial resistance. The change of outer membrane protein Car O is not likely to decrease the sensitivity of Acinetobacter baumannii to imipenem. Most of the infections caused by Acinetobacter baumannii are related to biofilm formation. The biofilm formation of Acinetobacter baumannii can promote the expression of OXA-23 and Ade ABC efflux pump genes and enhance the resistance of Acinetobacter baumannii to imipenem.
【學位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R446.5

【參考文獻】

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本文編號：1615469