發(fā)布時(shí)間：2018-03-04 07:33

  本文選題：苛求芽孢桿菌尿酸酶　切入點(diǎn)：簡(jiǎn)并引物PCR　出處：《重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)》2017年02期 　論文類(lèi)型：期刊論文

【摘要】：目的:從頭克隆苛求芽孢桿菌尿酸酶基因的編碼序列。方法:據(jù)Edman降解所得N端氨基酸序列(AERTMFYGKGDV)用BLASTp搜索N端相似性70%細(xì)菌尿酸酶;多序列聯(lián)配比對(duì)發(fā)現(xiàn)靠近N端和C端的2個(gè)保守肽段。據(jù)N端已知序列和2個(gè)保守肽段設(shè)計(jì)簡(jiǎn)并引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增;將所得片段連接到T載體,轉(zhuǎn)化后篩選陽(yáng)性克隆測(cè)序。結(jié)果:據(jù)密碼子偏好性調(diào)整簡(jiǎn)并引物,獲得該尿酸酶從第六位氨基酸到終止密碼子之間的編碼序列;此尿酸酶共含322個(gè)氨基酸殘基,原核尿酸酶靠近N端的保守序列ATDSMKNFI從該尿酸酶第70位氨基酸殘基左右開(kāi)始,另一保守序列GKVYTEPR從該尿酸酶第290位氨基酸殘基開(kāi)始但變?yōu)镚AVFTEPR。結(jié)論:用簡(jiǎn)并引物PCR快速克隆獲得了苛求芽孢桿菌尿酸酶的編碼序列。
[Abstract]:Objective: to clone the coding sequence of urease gene from Bacillus causticus. Methods: according to the N-terminal amino acid sequence of Edman degradation, BLASTp was used to search for the N-terminal similarity of 70% bacterial uric acid enzyme. Two conserved peptides close to N-terminal and C-terminal were found by multisequence matching pair. Degenerate primers were designed for PCR amplification according to N terminal known sequence and 2 conserved peptide segments, and the resulting fragments were ligated to T vector. Results: according to the preference of codon to adjust degenerate primers, the coding sequence from 6th amino acid to stop codon was obtained, and the urease contained 322 amino acid residues. The conserved sequence ATDSMKNFI of prokaryote near N-terminal starts from the 70th amino acid residues of the urease. Another conserved sequence, GKVYTEPR, started from the 290th amino acid residue of the uricase but became GAVFTEPR.Conclusion: the coding sequence of uricase from Bacillus causticus was rapidly cloned by degenerate primer PCR.
【作者單位】： 秦皇島市第一醫(yī)院檢驗(yàn)科;重慶醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室;重慶醫(yī)科大學(xué)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)院臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【分類(lèi)號(hào)】：R440

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1564747