本文關(guān)鍵詞： 膿毒癥 組蛋白 急性腎損傷 腎小管上皮細(xì)胞 凋亡　出處：《南方醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：研究背景急性腎損傷(acute kidney injury,AKI)是膿毒癥發(fā)展過(guò)程中最常見(jiàn)且最嚴(yán)重的并發(fā)癥之一。與非膿毒癥AKI不同,膿毒癥AKI最主要的致病因素是腎小管上皮細(xì)胞凋亡。有研究指出細(xì)胞外組蛋白參與了 AKI的發(fā)病過(guò)程,而關(guān)于膿毒癥的研究則指出細(xì)胞外組蛋白是導(dǎo)致膿毒癥患者死亡的主要因素。因此,本研究將在前期實(shí)驗(yàn)和文獻(xiàn)分析的基礎(chǔ)上探索細(xì)胞外組蛋白在膿毒癥過(guò)程中引起AKI的機(jī)制。研究目的1.細(xì)胞外組蛋白是否可以誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞凋亡;2.細(xì)胞外組蛋白是否通過(guò)線粒體途徑誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞凋亡。研究方法體外實(shí)驗(yàn):1.細(xì)胞外組蛋白對(duì)HK-2細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作用將50μg/ml組蛋白以等體積培養(yǎng)基作為對(duì)照(下同)與人腎小管上皮細(xì)胞(human kidney-2 cell,HK-2)細(xì)胞株共培養(yǎng),分別在培養(yǎng)2h、4h和6h時(shí)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)HK-2細(xì)胞的凋亡率,明確細(xì)胞外組蛋白的最佳培養(yǎng)時(shí)間(本實(shí)驗(yàn)為4h)后換不同濃度(25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml)的組蛋白與HK-2細(xì)胞共培養(yǎng),用流式細(xì)胞儀檢測(cè)凋亡率并明確細(xì)胞外組蛋白作用是否存在濃度依賴性。2.細(xì)胞外組蛋白通過(guò)線粒體途徑誘導(dǎo)HK-2細(xì)胞凋亡將不同濃度的組蛋白(25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml)與HK-2細(xì)胞共培養(yǎng),4h后進(jìn)行羅丹明123(Rhodamine 123,Rho 123)染色、提取細(xì)胞蛋白,流式細(xì)胞儀檢測(cè)線粒體膜電位變化情況;Western Blot法檢測(cè)線粒體膜蛋白Bcl-2、MAPK p38磷酸化蛋白(p-p38)、Caspase-9及Caspase-3蛋白的表達(dá)量。體內(nèi)實(shí)驗(yàn):將不同濃度(50mg/kg、100mg/kg)的組蛋白以等量生理鹽水作為對(duì)照,經(jīng)尾靜脈注射至BALB/c小鼠體內(nèi),觀察6h,眼眶取血后處死,取出小鼠腎臟并去除腎蒂及包膜。部分腎組織研磨后制成細(xì)胞懸液用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡;部分腎組織留作病理標(biāo)本,行TUNEL染色;部分腎組織用于提取蛋白,Western Blot法檢測(cè)Bcl-2、MAPK p38磷酸化蛋白的表達(dá)情況。分離小鼠血清用于檢測(cè)血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)及胱抑素C(Cys C)等腎功能指標(biāo)。數(shù)據(jù)分析方法采用SPSS 20.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析,分析結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(X±S)表示。各組間均數(shù)差異顯著性的比較用單因素方差分析(one-way ANOVA)表示;各組間兩兩比較用2-tailed student's t檢驗(yàn)表示,P0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。用Kaplan-Meier法進(jìn)行生存分析,P0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。研究結(jié)果1.體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果與對(duì)照組相比,各組蛋白濃度組HK-2細(xì)胞凋亡率明顯增高,存在顯著性差異(P0.01);MAPK p38磷酸化蛋白、Caspase-9及Caspase-3蛋白表達(dá)量增高,Bcl-2蛋白表達(dá)量降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);各組蛋白濃度組線粒體膜電位較對(duì)照組明顯下降(P0.01)。2.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果與對(duì)照組相比,組蛋白100mg/kg組小鼠累計(jì)生存率明顯降低(P=0.001),50mg/kg組小鼠生存率無(wú)顯著差異(P=0.055);各組蛋白濃度組小鼠與對(duì)照組相比,腎臟細(xì)胞凋亡率增高、MAPK p38磷酸化蛋白表達(dá)量增高、Bcl-2蛋白表達(dá)量下降,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);組蛋白100mg/kg組小鼠血清肌酐值較對(duì)照組明顯升高(P0.01);此外,小鼠腎臟病理切片TUNEL染色細(xì)胞凋亡數(shù)量也明顯增多。實(shí)驗(yàn)結(jié)論體內(nèi)與體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明膿毒癥過(guò)程中細(xì)胞外組蛋白可以激活MAPK p38通路并作用于線粒體途徑誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞凋亡,進(jìn)而造成急性腎損傷。
[Abstract]:The apoptosis of human renal tubular epithelial cells was studied by flow cytometry . Compared with the control group , there was no significant difference in the expression of MAPK p38 phosphorylated protein , Caspase - 9 and Caspase - 3 protein ( P = 0 . 05 ) .

【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R459.7

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 Yong-zhi Ji;Long Geng;Hong-bo Zhou;Hua-chen Wei;Hong-duo Chen;;Chinese herbal medicine Yougui Pill reduces exogenous glucocorticoid-induced apoptosis in anterior pituitary cells[J];Neural Regeneration Research;2016年12期

2 岳磊;張W，

本文編號(hào)：1542712