本文關(guān)鍵詞： 有機陰離子轉(zhuǎn)運多肽B 多藥耐藥相關(guān)蛋白 MDCKⅡ 普伐他汀 -甲基色氨酸 轉(zhuǎn)運　出處：《復(fù)旦學(xué)報(醫(yī)學(xué)版)》2017年02期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的構(gòu)建人源有機陰離子轉(zhuǎn)運多肽1B1(human organic anion transporting polypeptide 1B1,hOATP1B1)和多藥耐藥相關(guān)蛋白2(multidrug resistance-associated protein2,hMRP2)雙轉(zhuǎn)MDCKⅡ細胞株,驗證其功能,并應(yīng)用其考察創(chuàng)新藥物2,3-雙加氧化酶(indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO)抑制劑1-甲基色氨酸(1-methyl-tryptophan,1-MT)的轉(zhuǎn)運特性。方法采用基因工程手段獲得hOATP1B1和hMRP2表達真核載體pVITRO2-SLCO1B1-ABCC2,轉(zhuǎn)染MDCKⅡ細胞,通過遺傳霉素G418篩選得到穩(wěn)定表達的細胞株;通過Realtime PCR、Western blot、免疫熒光共聚焦顯微鏡確認(rèn)目的蛋白特異性;利用該雙轉(zhuǎn)模型考察普伐他汀(不同pH環(huán)境和不同底物濃度)和1-MT的轉(zhuǎn)運。結(jié)果經(jīng)電泳分析、雙酶切、DNA測序鑒定表明重組質(zhì)粒構(gòu)建成功;通過Real-time PCR、Western blot、免疫熒光共聚焦顯微鏡證明經(jīng)遺傳霉素篩選的MDCK-OATP1B1/MRP2細胞構(gòu)建成功;pH=6.5時,普伐他汀在所構(gòu)建雙轉(zhuǎn)細胞模型上轉(zhuǎn)運最佳;在0~500μmol/L的濃度范圍內(nèi),普伐他汀在該模型上的轉(zhuǎn)運呈現(xiàn)濃度依賴性。1-MT在該細胞模型上無明顯轉(zhuǎn)運。結(jié)論成功構(gòu)建人源MDCKOATP1B1/MRP2雙轉(zhuǎn)細胞株,發(fā)現(xiàn)1-MT既不是OATP1B1蛋白也不是MRP2蛋白的底物,該細胞株可用于OATP1B1/MRP2介導(dǎo)的外源性物質(zhì)(如藥物)和內(nèi)源性物質(zhì)(如膽紅素)的轉(zhuǎn)運研究。
[Abstract]:Objective to construct a human organic anion transporting polypeptide 1B1B1B1 and multidrug resistance-associated protein 2drug resistance-associated protein 2hMRP2into MDCK 鈪，

本文編號：1533164