本文關(guān)鍵詞： 雙重猝滅 分子信標(biāo) 凝血酶 熒光 定量檢測(cè)　出處：《分析化學(xué)》2017年10期 　論文類(lèi)型：期刊論文

【摘要】：利用G堿基和有機(jī)猝滅基團(tuán)對(duì)熒光基團(tuán)的雙重猝滅作用構(gòu)建了分子信標(biāo),建立了一種基于雙重猝滅原理的檢測(cè)凝血酶的簡(jiǎn)單方法。此分子信標(biāo)中熒光基團(tuán)設(shè)計(jì)為羧基熒光素(FAM),有機(jī)猝滅基團(tuán)設(shè)計(jì)為Black Hole Quencher 1(BHQ-1),BHQ-1連接3個(gè)含有G堿基的核苷酸,分子信標(biāo)的環(huán)設(shè)計(jì)為凝血酶的核酸適配體。體系中沒(méi)有凝血酶時(shí),分子信標(biāo)呈莖環(huán)結(jié)構(gòu),熒光基團(tuán)FAM與有機(jī)猝滅基團(tuán)BHQ-1及G堿基相互靠近,FAM的熒光在BHQ-1及G堿基的雙重猝滅下,其熒光信號(hào)很弱;當(dāng)體系中有凝血酶存在時(shí),分子信標(biāo)與凝血酶特異性結(jié)合,形成G-四聯(lián)體結(jié)構(gòu),莖-環(huán)結(jié)構(gòu)被破壞,FAM遠(yuǎn)離猝滅基團(tuán)BHQ-1及G堿基,其熒光得到恢復(fù)。在最適條件下,體系的熒光強(qiáng)度(ΔI)與凝血酶的濃度(C)在0.4~40 nmol/L范圍內(nèi)具有良好的線(xiàn)性關(guān)系,線(xiàn)性回歸方程為ΔI=24.63C(nmol/L)+13.06(R~2=0.9972),檢出限為0.18 nmol/L(3σ,n=9)。實(shí)際血樣加標(biāo)回收率為96.3%~98.7%。
[Abstract]:Molecular beacons were constructed by double quenching of fluorescent groups by G base and organic quenching groups. A simple method for the detection of thrombin was established based on the principle of double quenching. The fluorescence group in the molecular beacon was designed as carboxyl fluorescein, and the organic quenching group was designed as Black Hole Quencher 1 BHQ-1BHQ-1 to bind three nucleotides containing G base. The ring of molecular beacon was designed as the aptamer of nucleic acid of thrombin. When there was no thrombin in the system, the molecular beacon showed stem ring structure. The fluorescence of fluorescence group FAM, organic quench group BHQ-1 and G base group were close to each other under the double quenching of BHQ-1 and G base. When there is thrombin in the system, the molecular beacons bind to thrombin specifically to form a G-quadruplex structure, and the stem-loop structure is destroyed away from the quenched groups BHQ-1 and G bases. Under the optimum conditions, the fluorescence intensity (螖 I) of the system has a good linear relationship with the concentration of thrombin in the range of 0.4 ~ 40 nmol/L. The linear regression equation is 螖 I ~ (24. 63) C ~ (mol / L) ~ (13. 06) ~ (2) ~ 0.9972 ~ (2), and the detection limit is 0. 18 nmol/L(3.
【作者單位】： 湖北民族學(xué)院生物資源保護(hù)與利用湖北省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;湖北民族學(xué)院化學(xué)與環(huán)境工程學(xué)院;湖北民族學(xué)院醫(yī)學(xué)院;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(Nos.21465010,31460172) 生物資源保護(hù)與利用湖北省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開(kāi)放基金(No.PKLHB1532) 湖北民族學(xué)院博士啟動(dòng)基金(No.MY2015B015) 湖北省林學(xué)一級(jí)學(xué)科資助~~
【分類(lèi)號(hào)】：O657.3;R446.1

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 周海清,沈鶴柏,陳新斌,巢強(qiáng)國(guó);分子信標(biāo)的原理、應(yīng)用及其研究進(jìn)展[J];光譜實(shí)驗(yàn)室;2004年03期

2 向東山;翟琨;;分子信標(biāo)的構(gòu)建及其應(yīng)用研究進(jìn)展[J];應(yīng)用化學(xué);2014年01期

3 王怡瑾,王宏,聶立波,何農(nóng)躍;分子信標(biāo)技術(shù)[J];化學(xué)通報(bào);2004年12期

4 廖曉磊;張旋;杭樂(lè);高鳳;高飛;汪慶祥;;基于分子信標(biāo)末端現(xiàn)場(chǎng)標(biāo)記三聚氰胺-Cu~(2+)電活性分子的高靈敏電化學(xué)傳感器[J];中國(guó)科學(xué):化學(xué);2014年03期

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前9條

1 馬佳;水環(huán)境Hg~(2+)的超痕量分子信標(biāo)熒光檢測(cè)技術(shù)及相互作用研究[D];天津大學(xué);2015年

2 李超;新型催化比色信標(biāo)及其應(yīng)用研究[D];華東師范大學(xué);2015年

3 劉婷;新型電化學(xué)活性及催化活性分子信標(biāo)開(kāi)關(guān)的研制及其應(yīng)用研究[D];華東師范大學(xué);2014年

4 杜婷娥;基于棉線(xiàn)為載體的快速生物分析方法的研究[D];西北大學(xué);2015年

5 李朋;蛋白質(zhì)、生物小分子熒光傳感新方法研究[D];青島科技大學(xué);2013年

6 張旋;基于分子信標(biāo)現(xiàn)場(chǎng)標(biāo)記電活性分子的電化學(xué)DNA傳感器[D];閩南師范大學(xué);2013年

7 王翠萍;基于分子信標(biāo)熒光法檢測(cè)DNA單堿基變異新方法的研究[D];陜西師范大學(xué);2014年

8 代佩卿;基于主客體識(shí)別的新型電化學(xué)活性開(kāi)關(guān)分子信標(biāo)CB[7]/Fc-MB的研制及應(yīng)用研究[D];華東師范大學(xué);2015年

9 李向玲;基于分子信標(biāo)及生物條碼技術(shù)的生物傳感器檢測(cè)端粒酶及腫瘤細(xì)胞[D];青島科技大學(xué);2011年

，

本文編號(hào)：1518377