本文關(guān)鍵詞： 銅綠假單胞菌 生物膜 群體感應(yīng)系統(tǒng) 調(diào)節(jié)性T細(xì)胞　出處：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:探討銅綠假單胞菌的群體感應(yīng)系統(tǒng)在生物膜感染中對宿主的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的影響。方法:選取銅綠假單胞菌的三個(gè)菌株即野生株P(guān)AO1和兩個(gè)QS系統(tǒng)的基因缺陷株△lasI△rhlI,△lasR△rhlR采用體外靜態(tài)模型培養(yǎng)3天獲得成熟生物膜,收集生物膜上清液(BCM)。三個(gè)細(xì)菌菌株的BCM分別與人外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMCs)共通過培養(yǎng)16 h,用CCK-8法檢測BCM的細(xì)胞毒性。細(xì)胞懸液離心,其中的細(xì)胞提取總RNA,定量PCR檢測Foxp3的mRNA水平,而上清液用ELISA法檢測TGF-β1,IL-10以及IL-6的蛋白水平。另外,采用流式細(xì)胞術(shù)檢測調(diào)節(jié)性T細(xì)胞。建立大鼠生物膜感染模型,檢測Tregs相關(guān)因子Foxp3和TGF-β1,動物實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證QS系統(tǒng)和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞相關(guān)性。結(jié)果:PBMCs經(jīng)BCM處理后,PAO1-BCM,△lasR△rhlR-BCM及△lasI△rhlI-BCM三個(gè)處理組均表現(xiàn)出明顯的細(xì)胞毒性。PAO1-BCM處理組Foxp3 mRNA表達(dá)量(1.15±0.16)較△lasI△rhlI-BCM及△lasR△rhlR-BCM處理組(0.97±0.110.93±0.12)明顯升高(P0.05),但是兩個(gè)QS系統(tǒng)缺陷菌株BCM處理組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。而且PAO1-BCM組TGF-β1的蛋白表達(dá)水平(844.49±40.97 pg/ml)較△lasI△rhlI-BCM及△lasR△rhlR-BCM組的表達(dá)水平(725.69±129.16pg/ml740.29±35.86 pg/ml)明顯升高(P0.05),類似的兩QS系統(tǒng)缺陷菌株的BCM處理組之間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。但是值得注意的是,PAO1-BCM組IL-10的表達(dá)水平(2.46±1.22 pg/ml)較△lasI△rhlI-BCM及△lasR△rhlR-BCM組的表達(dá)水平(33.29±6.11 pg/ml35.11±7.72pg/ml)卻明顯減低(P0.05)。而△lasI△rhlI-BCM及△lasR△rhlR-BCM兩個(gè)處理組(799.27±75.66 pg/ml,1305.42±198.48 pg/ml)的IL-6的蛋白表達(dá)量較PAO1-BCM處理組(12.63±8.31 pg/ml)明顯升高。動物實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)Foxp3,TGF-β1的變化與體外實(shí)驗(yàn)的結(jié)果一致。結(jié)論:銅綠假單胞菌QS系統(tǒng)lasI/rhlI基因和lasR/rhlR基因在銅綠假單胞菌生物膜感染中可促進(jìn)宿主的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的活化,這可能是最終導(dǎo)致臨床上生物膜感染持續(xù)性和慢性化的一個(gè)機(jī)制。
[Abstract]:Objective: to investigate the effect of colony sensing system of Pseudomonas aeruginosa on host regulatory T cells in biofilm infection. Three strains of Pseudomonas aeruginosa, that is, wild strain PAO1 and two QS gene-deficient strains, lasI rhlI were selected. The mature biofilm was obtained by lasR rhlR culture in vitro static model for 3 days. The BCM of three bacterial strains were co-cultured with human peripheral blood mononuclear cells (PBMC) for 16 h. The cytotoxicity of BCM was detected by CCK-8 method. The cell suspension was centrifuged. The total RNAs were extracted from the cells and the mRNA level of Foxp3 was detected by quantitative PCR. The protein levels of TGF- 尾 1 IL-10 and IL-6 in supernatant were detected by ELISA method. In addition, the regulatory T cells were detected by flow cytometry, and the model of biofilm infection in rats was established. Tregs related factors Foxp3 and TGF- 尾 1 were detected, and the correlation between QS system and regulatory T cells was verified by animal experiments. LasR rhlR-BCM and lasI rhlI-BCM showed obvious cytotoxicity. PAO1-BCM treatment group Foxp3. MRNA expression (. 1.15 鹵0.16) was significantly higher than that of lasI rhlI-BCM and lasR rhlR-BCM (0.97 鹵0.110.93 鹵0.12) (P < 0.05). P0.05). However, there was no significant difference between the two QS system-deficient strains treated with BCM, and the protein expression level of TGF- 尾 1 in PAO1-BCM group (. The expression level of 844.49 鹵40.97 PG / ml was higher than that of lasI rhlI-BCM and lasR rhlR-BCM (P < 0.05). 725.69 鹵129.16 PG / ml 740.29 鹵35.86 PG / ml increased significantly (P 0.05). There was no statistical difference between the BCM treatment groups of similar QS system deficient strains, but it was worth noting. Expression of IL-10 in PAO1-BCM group: 2.46 鹵1.22 PG / ml). The expression level of lasI rhlI-BCM and lasR rhlR-BCM was 33.29 鹵6.11 pg/ml35.11 鹵7.72 PG / ml. However, the P0. 05 pg/ml was significantly decreased in lasI rhlI-BCM and lasR rhlR-BCM treatment groups (799.27 鹵75.66 pg/ml). The protein expression of IL-6 in 1305.42 鹵198.48 PG / ml group was higher than that in PAO1-BCM treatment group (12.63 鹵8.31 PG / ml). Foxp3 was found in animal experiments. The changes of TGF- 尾 1 were consistent with the results of in vitro experiments. The QS system lasI/rhlI gene and lasR/rhlR gene of Pseudomonas aeruginosa can promote the activation of host regulatory T cells in biofilm infection of Pseudomonas aeruginosa. This may be a mechanism that ultimately leads to the persistence and chronicity of biofilm infection in clinic.
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R446.5

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本文編號：1492590