本文關(guān)鍵詞：microRNA-449b對膿毒癥小鼠高遷移率族蛋白B1介導(dǎo)樹突狀細(xì)胞免疫功能障礙的影響

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【摘要】：目的:探討miR-449b在高遷移率族蛋白B1(high mobility group box-1 protein,HMGB1)調(diào)控樹突狀細(xì)胞(dendritic cell,DC)免疫效應(yīng)中的作用及其對膿毒癥小鼠免疫功能障礙的影響。方法:1 HMGB1分別以10、100、1000 ng/ml劑量刺激正常小鼠脾臟來源的CD11c+DC,并分別于24 h、48 h及72 h檢測DC表面標(biāo)志物及共刺激分子(CD80、CD86、MHC-II)、細(xì)胞因子分泌(IL-12、IL-10)以及DC凋亡的改變;并用QPCR檢測12 h、24 h、48 h細(xì)胞內(nèi)miR-449b改變。2 DC轉(zhuǎn)染miR-449b模擬物(miR-449b)、抑制物(In-miR-449b)及相應(yīng)對照(miR-NC、In-miR-NC)后,HMGB1(100 ng/ml)刺激48h收取細(xì)胞,檢測DC表面分子、細(xì)胞因子(IL-12、IL-10)、凋亡改變以及與T細(xì)胞混合培養(yǎng)后T細(xì)胞增殖、分化功能的變化;進(jìn)一步應(yīng)用miRNA相關(guān)預(yù)測軟件及結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)確定miR-449b介導(dǎo)這一過程中的潛在靶蛋白Notch1和Sirt1,并用western blot研究miR-449b對靶蛋白的影響。3復(fù)制小鼠CLP模型,術(shù)后48h及120h分別通過尾靜脈注射miR-449b antagomir及對照(8mg/kg,300ul),觀測膿毒癥小鼠10天生存率。此外于術(shù)后第7天通過腹腔注射LPS(10ug/只)給予二次打擊,在6h后檢測各組小鼠血清中IL-12及IL-10水平、脾臟中成熟DC所占比例以及脾臟DC表面分子表達(dá)、凋亡率及其對CD4+T細(xì)胞增殖分化的影響。結(jié)果:1 HMGB1刺激DC后,其表面分子及細(xì)胞因子IL-12隨著時(shí)間及劑量的增加表達(dá)上調(diào),其中以48 h、100 ng/ml組上調(diào)最為明顯,而大劑量(1000 ng/ml)時(shí)及72 h組表達(dá)有所下調(diào);隨著HMGB1劑量及刺激時(shí)間的增加,DC凋亡率升高,細(xì)胞因子IL-10分泌增加(P0.05);miR-449b在12 h及24 h組表達(dá)下調(diào),100及1000 ng/ml組在48 h表達(dá)明顯上調(diào)(P0.05)。2轉(zhuǎn)染miR-449b可上調(diào)其在細(xì)胞內(nèi)表達(dá),而抑制物可抑制其表達(dá);上調(diào)miR-449b后HMGB1(100 ng/ml)刺激48 h DC表面分子CD86表達(dá)顯著上調(diào)(P0.05)、凋亡增加(P0.01)、細(xì)胞因子IL-10分泌增多(P0.05),對T細(xì)胞的共刺激增殖效應(yīng)減弱及混合性淋巴細(xì)胞反應(yīng)中IL-4水平增多(P0.01)、IFN-γ水平下降(P0.05);miR-449b的過表達(dá)可抑制靶蛋白Notch1及Sirt1的表達(dá)。3抑制miR-449b能明顯改善晚期膿毒癥小鼠的病死率,進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)抑制miR-449b的表達(dá)能明顯增加晚期膿毒癥小鼠血清中IL-12的水平(P0.05)、樹突狀細(xì)胞在脾臟中的比例(P0.01)和表面分子MHC-II(P0.05)、CD80(P0.05)的表達(dá)以及減少凋亡(P0.05)和血清中IL-10的水平(P0.05),促進(jìn)T細(xì)胞的增殖(P0.05)及向功能性Th1極化;miR-449b antagomir組靶蛋白Notch1及Sirt1有所上調(diào)。結(jié)論:HMGB1介導(dǎo)小鼠脾臟DC成熟分化過程中miR-449b起重要的負(fù)性調(diào)控作用,并明顯促進(jìn)HMGB1刺激誘導(dǎo)的DC凋亡;抑制miR-449b表達(dá)水平可有效改善膿毒癥小鼠病死率及脾臟DC的免疫功能狀態(tài),可能是緩解機(jī)體免疫功能障礙的重要調(diào)控靶點(diǎn)。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R459.7

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前8條

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本文編號：1143474