發(fā)布時(shí)間：2017-11-03 10:05

  本文關(guān)鍵詞：綠色熒光蛋白標(biāo)記的人血管內(nèi)皮生長因子165基因重組腺病毒載體的構(gòu)建與鑒定

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【摘要】：目的構(gòu)建與鑒定攜帶綠色熒光蛋白標(biāo)記的人血管內(nèi)皮生長因子165(hVEGF165)基因的重組腺病毒載體Ad5-hVEGF165-GFP。方法將hVEGF165基因進(jìn)行擴(kuò)增,并同源重組入表達(dá)質(zhì)粒pAV-MCMV-HA-P2A-GFP,轉(zhuǎn)化入DH5a感受態(tài)細(xì)胞,得到的轉(zhuǎn)化子經(jīng)菌落聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)鑒定和測序鑒定后,通過Ad Max腺病毒包裝系統(tǒng)轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞,進(jìn)行病毒的包裝和擴(kuò)增。包裝后鏡下觀察HEK293細(xì)胞,測定腺病毒滴度,Western blot檢測重組腺病毒的表達(dá)。結(jié)果成功構(gòu)建了重組腺病毒載體Ad5-hVEGF165-GFP,重組腺病毒轉(zhuǎn)染的HEK293細(xì)胞出現(xiàn)了明顯的細(xì)胞病變效應(yīng);獲得重組腺病毒的滴度為1.106×10~8 IFU/mL;Western blot檢測重組腺病毒表達(dá)在23 000左右。結(jié)論成功獲得重組腺病毒載體Ad5-hVEGF165-GFP,為進(jìn)一步研究基因治療膿毒癥/感染性休克奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
【作者單位】： 南昌大學(xué)第四臨床醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)系;南昌大學(xué)第四附屬醫(yī)院重癥醫(yī)學(xué)科;
【關(guān)鍵詞】： 人血管內(nèi)皮生長因子 腺病毒 載體構(gòu)建
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81360296) 江西省衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)科技計(jì)劃重大攻關(guān)計(jì)劃(20155361)
【分類號(hào)】：R459.7;Q78
【正文快照】： 血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)是機(jī)體血管生成和促血管形成的重要因子。其中VEGF165是體內(nèi)發(fā)揮作用的主要形式,具有促進(jìn)血管內(nèi)皮增殖和增加血管通透性的作用[1]。腺病毒(adenovirus)是目前最高效可靠的重組病毒表達(dá)系統(tǒng)之一,已被廣泛應(yīng)用于載體

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本文編號(hào)：1135709