本文關(guān)鍵詞：鞘氨醇激酶1（SphK1）在膿毒癥所致急性肝衰竭中的作用機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： 鞘氨醇激酶1 磷酸鞘氨醇受體1 3 膿毒癥 急性肝衰竭

【摘要】：膿毒癥所致急性肝功能衰竭是一種發(fā)病率低(≤1/10萬),但致死率極高的危重病。其主要病理生理為肝糖異生減少、凝血因子合成減少、血乳酸代謝能力降低、血氨清除減少、骨髓造血抑制、腎血管收縮及機(jī)體高分解代謝狀態(tài)。病人表現(xiàn)為易出血、乳酸酸中毒、肝性腦病、腦水腫、易感染、肝腎綜合癥,這將加速膿毒癥的病情進(jìn)展。目前治療多以對癥支持、保肝為主,缺乏有效的治療方法,其發(fā)病機(jī)理還不明確。鞘氨醇激酶1 (SphK1)是一種胞內(nèi)脂質(zhì)酶,調(diào)控細(xì)胞脂質(zhì)代謝生成磷酸鞘氨醇(S1P),胞內(nèi)S1P可直接參與細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。胞內(nèi)S1P也可通過細(xì)胞膜上轉(zhuǎn)運(yùn)體轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞外,與其自身受體結(jié)合間接激活胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。多項(xiàng)研究表明,SphK1-S1P-磷酸鞘氨醇受體(S1PRs)信號通路參與調(diào)控細(xì)胞增殖、死亡、遷移、炎癥反應(yīng)等生命活動,但其在膿毒癥所致急性肝衰竭中的作用還不明確。在膿毒癥所致急性肝衰竭的發(fā)病機(jī)制中,腫瘤壞死因子α(TNF-α)被認(rèn)為是一種關(guān)鍵炎癥介質(zhì),它可激活胞內(nèi)半胱天冬酶(caspase)誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡,激活絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)誘導(dǎo)細(xì)胞表達(dá)多種炎癥因子。MAPK家族蛋白包括應(yīng)激活化蛋白激酶(JNK)、細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶(ERK)和p38,可參與調(diào)控細(xì)胞應(yīng)激、炎癥反應(yīng)、細(xì)胞分化、細(xì)胞增殖凋亡等生命活動。目前研究認(rèn)為,MAPK家族蛋白在膿毒癥所致急性肝衰竭的發(fā)病機(jī)制中起重要作用,但SphK1信號通路在膿毒癥所致急性肝衰竭中的作用是否與MAPK家族蛋白相關(guān)還不明確。本研究試圖通過動物實(shí)驗(yàn),探究SphK1信號通路是否參與膿毒癥所致急性肝衰竭的發(fā)��；抑制SphK1信號通路后對膿毒癥所致肝損害的影響；抑制SphK1后膿毒癥所致急性肝衰竭改善的可能機(jī)制,旨在為膿毒癥所致急性肝衰竭的研究提供可能治療靶點(diǎn)。第一部分鞘氨醇激酶1(SphK1)在膿毒癥所致急性肝衰竭中的作用目的 探究鞘氨醇激酶1(SphK1)信號通路是否參與膿毒癥所致急性肝衰竭的疾病過程。方法 本實(shí)驗(yàn)采用C57BL小鼠,雄性,6-8周。膿毒癥所致急性肝衰竭動物模型采用目前國際公認(rèn)的造模方法：腹腔注射內(nèi)毒素(LPS) 50μg/kg+D-半乳糖胺(GalN)1g/kg。腹腔注射SphK1化學(xué)特異性抑制劑SKI-5c,2mg/kg,以抑制SphK1的表達(dá)；腹腔注射S1PR1化學(xué)特異性抑制劑W146,0.1 mg/kg,以抑制S1PR1的表達(dá)；腹腔注射S1PR3化學(xué)特異性抑制劑CAY10444,0.1 mg/kg,以抑制S1PR3的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)小鼠隨機(jī)分成五組：對照組(n=20只)；肝衰竭組(LPS/GalN, n=20只);SphK1抑制組(LPS/GalN+SKI-5c, n=20只);S1PR1抑制組(LPS/GalN+W146, n=20只)；S1PR3抑制組((LPS/GalN+CAY 10444, n=20只)。造模2h后,每組隨機(jī)處死10只小鼠,取血,用于檢測血清炎癥因子水平；造模6h后取血,用于檢測血清轉(zhuǎn)氨酶水平；造模6h后取肝臟用于檢測SphKK S1PR1.3的表達(dá)、肝病理、肝半胱天冬酶3(caspase-3)活性、肝髓過氧化物酶(MPO)活性。結(jié)果 與對照組相比,膿毒癥所致急性肝衰竭小鼠肝臟SphK1、S1PR1、S1PR3的蛋白水平上調(diào)(P0.01)；與肝衰竭組小鼠相比,抑制SphK1組肝組織出血情況好轉(zhuǎn)(P0.001),血清谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)水平降低(P0.01),血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)水平下調(diào)(P0.001),血清TNF-α水平降低(P0.001),血清IL-6濃度降低(P0.01),肝組織caspase-3酶活性下調(diào)(P0.01),肝組織MPO活性被抑制(P=0.051)。抑制S1PR1或S1PR3后,對膿毒癥所致肝損害無明顯影響。結(jié)論 膿毒癥所致急性肝衰竭時SphK1-S1PR1,3通路被激活；抑制SphK1后可緩解膿毒癥所致肝組織出血、血清轉(zhuǎn)氨酶水平、血清炎癥因子水平(TNF-α、IL-6)、肝組織caspase-3和MPO酶活性。第二部分抑制鞘氨醇激酶1(SphK1)后膿毒癥所致急性肝衰竭改善的可能機(jī)制目的 絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)家族蛋白包括應(yīng)激活化蛋白激酶(JNK)、細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶(ERK)和p38,在膿毒癥所致急性肝衰竭發(fā)生發(fā)展中起重要作用。本部分實(shí)驗(yàn)旨在探究抑制SphK1后是否通過阻斷MAPK通路來改善膿毒癥所致肝損害。方法 實(shí)驗(yàn)采用C57BL小鼠,雄性,6-8周,動物造模方法見實(shí)驗(yàn)第一部分,隨機(jī)分成五組,對照組(n=10只)；肝衰竭組(LPS/GalN, n=10只)；SphK1抑制組(LPS/GalN+SKI-5c,n=10只);S1PR1抑制組(LPS/Ga1N+W146,n=10只);S1PR3抑制組((LPS/GalN+CAY10444, n=10只)。造模6h后取肝臟,用免疫印跡法(western blotting)檢測各組MAPK家族蛋白的表達(dá)情況結(jié)果 實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),與對照組相比,膿毒癥所致急性肝衰竭時肝臟JNK、ERK、p38蛋白表達(dá)上調(diào)(P0.05)；與肝衰竭組相比,抑制SphK1后可抑制JNK、 ERK、p38蛋白表達(dá)(P0.05)；抑制S1PR1,3后可部分抑制JNK、ERK、p38的表達(dá)。結(jié)論 膿毒癥所致急性肝衰竭時,抑制SphK1可通過阻斷MAPK通路的激活來緩解肝臟出血、血清轉(zhuǎn)氨酶水平、血清TNF-α及IL-6濃度、肝組織caspase-3和MPO酶活性。
【關(guān)鍵詞】：鞘氨醇激酶1 磷酸鞘氨醇受體1 3 膿毒癥 急性肝衰竭
【學(xué)位授予單位】：南京大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R459.7;R575.3
【目錄】：

• 縮略詞表5-6
• 中文摘要6-10
• 英文摘要10-14
• 前言14-17
• 參考文獻(xiàn)16-17
• 第一部分 鞘氨醇激酶1(SphK1)在膿毒癥所致急性肝衰竭中的作用17-42
• 材料和方法18-26
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果26-37
• 討論37-39
• 結(jié)論39-40
• 參考文獻(xiàn)40-42
• 第二部分 抑制鞘氨醇激酶1(SphK1)后膿毒癥所致急性肝衰竭改善的可能機(jī)制42-57
• 材料和方法43-47
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果47-52
• 討論52-54
• 結(jié)論54-55
• 參考文獻(xiàn)55-57
• 全文總結(jié)57-58
• 綜述58-69
• 參考文獻(xiàn)64-69
• 攻讀碩士期間發(fā)表文章69-70
• 致謝70-71

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