發(fā)布時(shí)間：2020-07-19 03:38

【摘要】：沙門(mén)氏菌(Salmonella)是常見(jiàn)的食源性致病菌,對(duì)人類健康有嚴(yán)重的危害,而傳統(tǒng)培養(yǎng)法、免疫學(xué)法和分子生物學(xué)法已經(jīng)無(wú)法滿足人們對(duì)食品中致病菌快速檢測(cè)的需求,故建立高效、快速的檢測(cè)方法具有重要意義。磁性納米顆粒在接近共振的水質(zhì)子時(shí),能有效改變質(zhì)子所處的局部磁場(chǎng),縮短水質(zhì)子的橫向弛豫時(shí)間T_2。同時(shí),納米顆粒表面還有豐富的功能基團(tuán),在偶聯(lián)劑EDC/NHSS的作用下,納米顆粒共價(jià)偶聯(lián)沙門(mén)氏菌特異性抗體從而具備靶向性。本研究擬以修飾有特異性抗體的磁性納米顆粒作為探針和弛豫信號(hào)轉(zhuǎn)換的媒介,同時(shí)結(jié)合NMR技術(shù)構(gòu)建一套全新的NMR納米傳感器對(duì)沙門(mén)氏菌進(jìn)行快速檢測(cè)。各章節(jié)內(nèi)容分述如下:第一章:介紹沙門(mén)氏菌的生物學(xué)特性、致病性及其與食品安全相關(guān)的事件,簡(jiǎn)要介紹了納米顆�；窘M成和基于納米技術(shù)、免疫技術(shù)和核磁共振技術(shù)的NMR傳感器在生物樣品快速檢測(cè)中的研究進(jìn)展。第二章:不同種類NMR納米探針制備及其表征。為了比較不同修飾方法制備的NMR納米探針對(duì)NMR傳感器核磁信號(hào)輸出的影響,故采用EDC/NHSS法分別合成Fe_3O_4 MNP-Antibody、Fe_3O_4 MNP-SA和Fe_3O_4 MNPC-SA探針。DLS的數(shù)據(jù)顯示,與裸磁珠相比,Fe_3O_4 MNP-Antibody和Fe_3O_4 MNP-SA探針的水化粒徑分別增加了29 nm和12 nm,表明抗體和SA已經(jīng)成功修飾到納米顆粒表面。利用PLL制備納米粒子簇時(shí),最佳的PLL的添加量為8μg。通過(guò)EDC/NHSS法將SA修飾到納米粒子簇上時(shí),納米粒子簇的水化粒徑增加了118 nm,Zeta電位由-30.57 mV增加到-25.63 mV,表明SA已經(jīng)成功修飾到納米粒子簇表面。通過(guò)對(duì)納米顆粒進(jìn)行弛豫分析,發(fā)現(xiàn)構(gòu)建的納米粒子簇由于粒徑太大而使得通過(guò)的水質(zhì)子存在“擴(kuò)散受限”的現(xiàn)象,即對(duì)水質(zhì)子橫向弛豫時(shí)間的影響能力降低。第三章:基于納米顆粒磁學(xué)信號(hào)的NMR納米傳感器快速檢測(cè)沙門(mén)氏菌。以酶標(biāo)板為固相載體,同時(shí)結(jié)合Elisa中的雙抗夾心法固定目標(biāo)菌和磁性納米探針,然后在洗脫劑的作用下將納米探針洗脫下來(lái),通過(guò)測(cè)定洗脫液的NMR信號(hào)對(duì)目標(biāo)菌進(jìn)行快檢測(cè)。通過(guò)優(yōu)化,得到最佳的參數(shù):包被抗體0.5μg/mL、生物素化抗體0.5μg/mL、磁珠使用量為10μg、孵育時(shí)間30 min、最佳的洗脫劑為甘氨酸-HCl(0.05 M,pH=2.6)。在最優(yōu)的參數(shù)下,該NMR納米傳感器能在150 min對(duì)沙門(mén)氏菌進(jìn)行有效檢測(cè),檢測(cè)限為10~5CFU/mL,有很好的特異性且能應(yīng)用于實(shí)際牛奶樣品中檢測(cè),是一種非常有潛力的快速檢測(cè)方法。
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：TB383.1;TS207.4;TP212
【圖文】：

圖 1.1“核-殼”式納米顆粒結(jié)構(gòu)示意圖 schematic diagram of “nuclear-shell” structure for the na速檢測(cè)技術(shù)簡(jiǎn)介簡(jiǎn)介

圖 2.2 PLL 添加量?jī)?yōu)化Figure 2.2 Optimization of the amounts of PLL羧基化磁性納米顆粒表面含有豐富的羧基官能團(tuán)，在偶聯(lián)劑碳二亞胺（ED作用下，會(huì)生成一種高能態(tài)中間產(chǎn)物，容易與含有氨基的物質(zhì)發(fā)生親核反應(yīng)生產(chǎn)酰胺鍵。PLL 是以 L-賴氨酸為基本單元通過(guò)脫水縮合形成的聚賴氨酸鏈，每

圖 2.3 PLL 用量對(duì)納米粒子簇粒徑分布的影響Figure 2.3 Hydrodynamic size distribution profiles of Fe3O4MNPC with differentamounts of PLL如圖 2.3 所示，未修飾前的羧基化納米顆粒的粒徑分布呈典型的單分散明原始磁珠在溶液中具有很好的分散性。當(dāng) PLL 的添加量從 2 μg 增加到 8

【參考文獻(xiàn)】

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1 姚雪婷;唐振柱;劉展華;李秀桂;黃立嶸;梁玉裕;;2010-2011年廣西食品中沙門(mén)菌監(jiān)測(cè)與分析[J];實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué);2012年12期

2 蘇晨曦;孫曉紅;盧瑛;趙勇;Vivian C H Wu;潘迎捷;;副溶血性弧菌免疫磁珠的制備及其應(yīng)用[J];食品工業(yè)科技;2012年17期

3 李冬陽(yáng);樊凱;吳堅(jiān);應(yīng)義斌;;基于自動(dòng)磁珠轉(zhuǎn)運(yùn)的轉(zhuǎn)基因蛋白Cry1Ab檢測(cè)[J];分析化學(xué);2011年09期

4 徐金亭;李志清;向軍儉;唐勇;楊紅宇;;單增李斯特菌免疫磁珠的制備研究[J];食品工業(yè)科技;2012年05期

5 牛牧;杜美紅;鄧奕;高明遠(yuǎn);;亞微米級(jí)免疫磁球及其在細(xì)菌分離中的應(yīng)用[J];高等學(xué)�；瘜W(xué)學(xué)報(bào);2011年02期

6 王輝;王江紅;朱開(kāi)萍;;禽沙門(mén)氏菌病的研究進(jìn)展[J];中國(guó)畜禽種業(yè);2008年12期

7 謝欣,張旭,高華方,張歡,陳德樸,程京,費(fèi)維揚(yáng);基于多功能納米磁珠的DNA制備與基因分型[J];科學(xué)通報(bào);2004年06期

8 徐輝,張國(guó)亮,張鳳寶;免疫磁性微球的研究進(jìn)展[J];化學(xué)工業(yè)與工程;2003年01期

9 張立德;納米材料技術(shù)的發(fā)展趨勢(shì)和應(yīng)用機(jī)遇[J];世界科技研究與發(fā)展;2002年06期

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1 胡麗君;沙門(mén)氏菌全基因組測(cè)序分析及其DNA等溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)方法的建立和應(yīng)用研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2017年

2 劉斌;沙門(mén)氏菌血清分型分子靶點(diǎn)的發(fā)掘及鑒定體系的建立[D];上海交通大學(xué);2012年

本文編號(hào)：2761852