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基于石墨烯電極的細(xì)胞內(nèi)嘌呤代謝傳感研究

發(fā)布時(shí)間:2018-01-12 09:21

  本文關(guān)鍵詞:基于石墨烯電極的細(xì)胞內(nèi)嘌呤代謝傳感研究 出處:《佳木斯大學(xué)》2016年碩士論文 論文類型:學(xué)位論文


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【摘要】:目的構(gòu)建具有高選擇性、靈敏性和穩(wěn)定性的電化學(xué)生物傳感器,以實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞質(zhì)中鳥嘌呤(G)、黃嘌呤(X)、腺嘌呤(A)和次黃嘌呤(HX)的原位檢測(cè)。通過研究正常細(xì)胞與癌變細(xì)胞電化學(xué)信號(hào)之間的關(guān)系,建立可用于評(píng)估細(xì)胞活性、監(jiān)控細(xì)胞癌變的電化學(xué)方法。方法本文以離子液體與化學(xué)還原石墨烯的雜化材料修飾玻碳電極(RGI-GCE)作為工作電極,以人乳腺癌(MCF-7)細(xì)胞和小鼠胚胎成纖維(BALB/3T3)細(xì)胞作為細(xì)胞模型,采用線性掃描伏安法(LSV)同時(shí)對(duì)細(xì)胞質(zhì)中的腺嘌呤和次黃嘌呤進(jìn)行檢測(cè)。并且以多金屬氧酸鹽與還原石墨烯泡沫復(fù)合修飾電極(POM@3DGF-GCE)作為工作電極,采用循環(huán)伏安法(CV)對(duì)人乳腺癌細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)中鳥嘌呤和黃嘌呤進(jìn)行同時(shí)檢測(cè)。利用掃描電子顯微鏡、透射電子顯微鏡、拉曼光譜儀、X射線粉末衍射等手段對(duì)傳感器的表面形貌和內(nèi)部組成進(jìn)行表征。采用高效液相色譜法(HPLC)對(duì)細(xì)胞電化學(xué)監(jiān)測(cè)細(xì)胞內(nèi)嘌呤代謝進(jìn)行可靠性驗(yàn)證。結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明RGI-GCE和POM@3DGF-GCE電極材料中離子液體及多金屬氧酸鹽被吸附在碳材料表面。RGI-GCE電極在低嘌呤表達(dá)的MCF-7和BALB/3T3細(xì)胞中產(chǎn)生三個(gè)電化學(xué)信號(hào),分別歸屬于鳥嘌呤/黃嘌呤氧化峰(0.7 V),腺嘌呤氧化峰(0.94 V)以及次黃嘌呤氧化峰(1.0 V)。這種電極材料首次實(shí)現(xiàn)了腺嘌呤和次黃嘌呤信號(hào)的同時(shí)檢測(cè)。利用RGI-GCE電極可檢測(cè)到細(xì)胞癌變后細(xì)胞裂解液中腺嘌呤和次黃嘌呤信號(hào)的增長率分別為300%和317%,成功利用電化學(xué)方法對(duì)細(xì)胞癌變過程實(shí)現(xiàn)監(jiān)控。對(duì)于POM@3DGF-GCE電極,附著于石墨烯泡沫表面的多金屬氧酸鹽具有良好的氧化還原活性。利用POM@3DGF-GCE對(duì)MCF-7細(xì)胞原位裂解液進(jìn)行循環(huán)伏安法掃描時(shí),產(chǎn)生兩個(gè)電化學(xué)信號(hào),分別歸屬于鳥嘌呤(1.048 V)和黃嘌呤(1.128 V)的氧化峰信號(hào);在電化學(xué)傳感器領(lǐng)域,首次實(shí)現(xiàn)了鳥嘌呤和黃嘌呤的同時(shí)檢測(cè)。利用高效液相色譜法證實(shí)了上述細(xì)胞電化學(xué)方法的可靠性。結(jié)論本課題采用納米材料與不同種類的碳材料進(jìn)行雜化,成功制備出可以檢測(cè)MCF-7和BALB/3T3細(xì)胞中四種嘌呤的信號(hào)的生物傳感材料。所制備出的電化學(xué)傳感器具有高選擇性、靈敏性和穩(wěn)定性,可監(jiān)測(cè)BALB/3T3細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)化時(shí)其細(xì)胞質(zhì)中嘌呤堿基含量的變化,為細(xì)胞內(nèi)嘌呤代謝的原位檢測(cè)提供了新的電化學(xué)方法。
[Abstract]:Objective to construct an electrochemical biosensor with high selectivity, sensitivity and stability for the determination of guanine guanine in cytoplasm. In situ detection of adenine (A) and Hypoxanthine (HX). By studying the relationship between the electrochemical signals of normal cells and cancerous cells, we established a method for evaluating cell activity. Methods the glassy carbon electrode modified with ionic liquid and chemically reduced graphene was used as the working electrode. Human breast cancer MCF-7 cells and mouse embryonic fibroblast BALB / 3T3) cells were used as cell models. Adenine and Hypoxanthine in cytoplasm were detected simultaneously by linear scanning voltammetry. The composite electrode was modified with polyoxometalate and reduced graphene foam. POM @ 3DGF-GCEs are used as working electrodes. The contents of guanine and xanthine in the cytoplasm of human breast cancer cells were detected simultaneously by cyclic voltammetry. Scanning electron microscopy, transmission electron microscope and Raman spectrometer were used to detect guanine and xanthine in the cytoplasm of human breast cancer cells. The surface morphology and internal composition of the sensor were characterized by X-ray powder diffraction. High performance liquid chromatography (HPLC) was used to characterize the surface morphology and internal composition of the sensor. The reliability of cell electrochemical monitoring of intracellular purine metabolism was verified. Results the results showed that ionic liquids and polyoxometalates were adsorbed in RGI-GCE and POM@3DGF-GCE electrode materials. The RGI-GCE electrode on the surface of carbon materials produced three electrochemical signals in MCF-7 and BALB/3T3 cells with low purine expression. It belongs to the oxidation peak of guanine / xanthine (0.7 V). Adenine oxidation peak 0.94 V) and Hypoxanthine oxidation peak 1.0 V). By using RGI-GCE electrode, we can detect the growth rate of adenine and Hypoxanthine signal in cell lysate after canceration, respectively. 300% and 317%. The electrochemical method was successfully used to monitor the process of cell carcinogenesis. For the POM@3DGF-GCE electrode. Polyoxometalates attached to the surface of graphene foam have good redox activity. POM@3DGF-GCE was used to scan MCF-7 cell in situ by cyclic voltammetry. Two electrochemical signals, assigned to the oxidation peak of guanine (1.048V) and xanthine (1.128V), were produced. In the field of electrochemical sensors. For the first time, the simultaneous detection of guanine and xanthine was realized. The reliability of the electrochemical method was confirmed by HPLC. Conclusion the nanocomposites and different kinds of carbon materials are used for hybrid. The biosensors which can detect the four purine signals in MCF-7 and BALB/3T3 cells were successfully prepared. The electrochemical sensors were highly selective, sensitive and stable. It can be used to monitor the changes of purine base content in the cytoplasm of BALB/3T3 cells during transformation, which provides a new electrochemical method for in situ detection of purine metabolism in cells.
【學(xué)位授予單位】:佳木斯大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2016
【分類號(hào)】:Q2-33;TP212

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本文編號(hào):1413640

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