本文關(guān)鍵詞：Peroxiredoxin-1在胃癌腹膜轉(zhuǎn)移中的作用及相關(guān)機制的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：【背景】胃癌是我國目前最常見惡性腫瘤之。腹膜轉(zhuǎn)移是其最常見的轉(zhuǎn)移形式，同時也是胃癌根治術(shù)后最常見的復(fù)發(fā)形式，是影響胃癌治療效果的關(guān)鍵因素之【1-2】，也是導(dǎo)致胃癌患者死亡的主要原因之【3】。目前，胃癌腹膜轉(zhuǎn)移的機制尚不清楚，研究表明可能與多個癌基因、抑癌基因以及氧化還原狀態(tài)等有關(guān)【4】。近年來，隨著胃癌根治術(shù)的開展與成熟，其局部復(fù)發(fā)率有所下降，但是其死亡率任然居于各種惡性腫瘤死亡率的前列。相關(guān)統(tǒng)計表明：約25%的胃癌患者在術(shù)前或者術(shù)中被診斷存在胃癌的腹膜轉(zhuǎn)移，從而失去了手術(shù)治療的最佳機會，進展期胃癌即使行胃癌根治術(shù)治療，術(shù)后任然有大約40%-60%的患者會發(fā)生腹膜轉(zhuǎn)移。因此，有必要對胃癌腹膜轉(zhuǎn)移的相關(guān)因素進行深入研究以揭示其發(fā)生和發(fā)展的機制，進而有效地指導(dǎo)臨床治療和改善預(yù)后。 Peroxiredoxin-1(Prx-1)是新近發(fā)現(xiàn)的類抗氧化物酶Peroxiredoxins家族中的種。以往對Prx-1的研究主要是其在抗氧化方面的作用，表現(xiàn)為Prx-1對活性氧族（activated oxygen species,AOS）的清除，保護細胞免受活性氧造成的損傷。近年來的研究發(fā)現(xiàn)：Prx-1與多種腫瘤細胞的增殖，分化和轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為密切相關(guān)。研究表明：Prx-1在多種腫瘤中高表達，而抑制Prx-1的表達，可導(dǎo)致腫瘤增殖受抑和放療增敏作用，因此，初步推斷Prx-1與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。但Prx-1與人類胃癌的腹膜轉(zhuǎn)移是否相關(guān)目前尚不清楚。 通過比較蛋白組學(xué)對胃癌細胞系（SGC823）和腹膜高轉(zhuǎn)移潛能的胃癌細胞系(SGC7901)進行比較，尋找兩種細胞系之間的差異蛋白。研究發(fā)現(xiàn)：Prx-1為兩種細胞系之間的差異蛋白之，在腹膜高轉(zhuǎn)移潛能胃癌細胞系(SGC7901)中表達上調(diào)。進步通過Western blot免疫印記法和免疫組化法在細胞水平和臨床標本水平進行檢驗，實驗結(jié)果表明：較胃癌細胞系(SGC823)，腹膜高轉(zhuǎn)移潛能的胃癌細胞系(SGC7901)中Prx-1的表達顯著增強；胃癌腹膜轉(zhuǎn)移灶與癌旁正常組織、胃癌原發(fā)灶、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶兩兩比較，其陽性率結(jié)果有差異。因此，初步推斷，Prx-1在胃癌的腹膜轉(zhuǎn)移中可能發(fā)揮重要作用。 【目的】 1、應(yīng)用比較蛋白組學(xué)尋找胃癌細胞系(SGC823)和腹膜高轉(zhuǎn)移潛能胃癌細胞系(SGC7901)之間的差異性蛋白。 2、檢驗胃癌細胞系（SGC823）和腹膜高轉(zhuǎn)移潛能胃癌細胞系(SGC7901)中Prx-1的表達情況。 3、研究Prx-1在人類胃癌腹膜轉(zhuǎn)移灶中的表達情況，，比較Prx-1在胃癌原發(fā)灶，胃癌腹膜轉(zhuǎn)移灶，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶及癌旁正常胃黏膜組織中的表達情況，探究Prx-1在人類胃癌腹膜轉(zhuǎn)移中的機制及其與患者病理參數(shù)之間的關(guān)系。 【方法】 1、細胞總蛋白的制備和雙向電泳： 胃癌細胞系(BGC823)和腹膜高轉(zhuǎn)移潛能胃癌細胞系(SGC7901)在溫度37℃、CO2濃度5%的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時，取對數(shù)生長期細胞制備總蛋白；用Bradford法檢測蛋白質(zhì)濃度；用提取400ug細胞總蛋白行雙向電泳；用24cm、PH值為4-7、固相PH梯度（IPG）膠條泡脹上樣。 2.電泳凝膠圖像分析： 銀染后的電泳凝膠采用ImageScanner圖像掃描儀和Imagemaster圖像分析軟件進行掃描和分析。同等條件下，對兩個細胞系的總蛋白樣品進行3次雙向電泳和圖像分析，在同種細胞系的蛋白質(zhì)電泳圖譜中挑選蛋白質(zhì)點清晰的圖像作為參照，與另外兩次的電泳圖像進行匹配。最后將3次電泳所得的蛋白質(zhì)點圖譜在Imagemaster軟件中創(chuàng)建平均膠。以（BGC823）細胞系的平均膠為參照膠與（SGC7901）細胞系的平均膠行兩兩匹配比較。以蛋白質(zhì)表達水平（相對體積）增加2倍及2倍以上作為差異點，并把這些點從凝膠中切割下來進步分析。 3、蛋白質(zhì)質(zhì)譜分析： 取雙向電泳凝膠上表達差異的蛋白質(zhì)點凝膠塊進行膠內(nèi)酶切，并提取肽段。取α-氰基-4-基肉桂酸（α-CHCA）5mg/ml的基質(zhì)溶解液0.5ul加入到金屬樣品板點樣孔內(nèi)，然后加入含有0.1%三氟乙酸（TFA）的水-乙腈混合液0.5ul溶解肽段提取物。在室溫下干燥樣本。用基質(zhì)輔助激光解析離子化飛行時間串聯(lián)質(zhì)譜儀4700型分析肽質(zhì)量指紋圖譜和串聯(lián)質(zhì)譜（MS/MS）。每個點樣孔每種光譜激光發(fā)射500次，收集相對分子質(zhì)量/電荷比值（質(zhì)荷比）為800-3200的峰譜。然后選取定數(shù)量的肽段進行碰撞誘導(dǎo)解離（CID）串聯(lián)質(zhì)譜分析，激光頻率為200Hz。 4、Western blot蛋白印跡（1）： 將準備好的細胞用4℃預(yù)冷PBS液洗滌，重復(fù)3次，將PBS棄盡。每瓶細胞加入400μ l含PMSF的裂解液，在冰上裂解30分鐘。裂解完成后，用刮棒將細胞刮于培養(yǎng)瓶側(cè)，用槍將細胞碎片和裂解液移至1.5ml離心管內(nèi)。離心后提取上清，Bradford法蛋白定量。樣品上樣于12％PAGE—SDS電泳后轉(zhuǎn)至NC膜上。加入抗室溫雜交3小時后加入HRP標記的二抗作用，最后加入熒光劑暗室曝光顯影。 5、采用免疫組化SP法： 4μ m石蠟切片，常規(guī)脫蠟至水，PBS（PH7.4）洗滌3次，高壓鍋內(nèi)煮沸8分鐘修復(fù)抗原；3%H2O2孵育10分鐘以消除內(nèi)源性過氧化物酶活性。正常山羊血清封閉非特異性抗原10分鐘，傾去血清，滴加Prx-1單抗，4℃條件下放置過夜。滴加二抗室溫孵育30分鐘，PBS洗滌3次，DAB顯色；蘇木精復(fù)染；中性樹脂封片。 7、數(shù)據(jù)分析： 應(yīng)用GPS Explore軟件處理肽質(zhì)量指紋圖譜和串聯(lián)質(zhì)譜數(shù)據(jù)，在搜索引擎（Http://www.matrixscience.com）上進行數(shù)據(jù)解析，使用的數(shù)據(jù)庫為NCBInr蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫。搜索條件如下：數(shù)據(jù)分析類型為MS聯(lián)合MS/MS；搜索物種為人；肽質(zhì)量偏差范圍為2000；串聯(lián)質(zhì)譜偏差范圍為4000。對數(shù)據(jù)庫搜索的結(jié)果根據(jù)蛋白評分、總離子評分、序列覆蓋率及直接測序等進行綜合評價，從而鑒定出蛋白質(zhì)（每個差異表達蛋白質(zhì)點鑒定出個蛋白質(zhì)），并計算出可信度。 【結(jié)果】 1、雙向凝膠電泳分析和質(zhì)譜分析鑒定結(jié)果：通過2-DE PAGE分離技術(shù)發(fā)現(xiàn)，(BGC823)圖譜平均檢測到(1130+60)個蛋白點，(SGC7901)圖譜平均檢測到(1030+53)個蛋白點。進行兩組問的匹配分析，篩選出大于或等于兩例以上的顯著差異點有30個。使用Mascot軟件搜索NCBI蛋白質(zhì)序列數(shù)據(jù)庫后，進行綜合分析，共成功鑒定出20個有意義的蛋白質(zhì)。11個蛋白僅在SCG7901細胞株表達明顯增高，同時我們發(fā)現(xiàn)9個蛋白僅BGC823中高表達，其中Prx-1在SCG7901中表達增高。 2、Western blot蛋白印跡研究結(jié)果表明，胃癌細胞系（BGC823）和腹膜高轉(zhuǎn)移潛能細胞系（SGC7901）中Prx-1的表達呈差異性，Prx-1在(SCG7901）中表達明顯增高，覆蓋率達64%。 3、免疫組化結(jié)果顯示:胃癌原發(fā)灶，腹膜轉(zhuǎn)移灶，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶和癌旁正常胃黏膜組織中Prx-1的陽性率比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，總的卡方值為61.038，(P0.01);腹膜，轉(zhuǎn)移灶和胃癌原發(fā)灶，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶，癌旁正常胃黏膜行兩兩比較，應(yīng)用卡方分割法，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.017)。 【結(jié)論】： 我們的研究結(jié)果表明Prx-1與胃癌的腹膜轉(zhuǎn)移可能相關(guān)，Prx-l可能是胃癌腹膜轉(zhuǎn)移的個分子標記物和預(yù)后指標，但是其內(nèi)在機理尚需進步研究。
【關(guān)鍵詞】：胃癌 胃癌腹膜轉(zhuǎn)移 Prx-1
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R735.2
【目錄】：

• 中英文縮略詞5-6
• 摘要6-10
• Abstract10-12
• 前言12-13
• 材料與方法13-20
• 結(jié)果20-24
• 討論24-27
• 參考文獻27-29
• 綜述29-34
• 綜述參考文獻32-34
• 致謝34-35
• 個人簡歷35

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 曾躍平;劉潔;王寶璽;;過氧化物酶Peroxiredoxin家族與腫瘤關(guān)系研究進展[J];癌癥進展;2010年02期

2 章波,向渝梅,白云;抗氧化蛋白Peroxiredoxin家族研究進展[J];生理科學(xué)進展;2004年04期

3 李正榮;詹文華;;胃癌腹膜轉(zhuǎn)移的治療進展[J];中華胃腸外科雜志;2006年05期

  本文關(guān)鍵詞：Peroxiredoxin-1在胃癌腹膜轉(zhuǎn)移中的作用及相關(guān)機制的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：413306