本文關(guān)鍵詞：人類巨細(xì)胞病毒感染的血清蛋白質(zhì)生物標(biāo)志物篩選與分析研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:人類巨細(xì)胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)是人類皰疹病毒組中最大的一種病毒,人類是HCMV的唯一宿主,HCMV感染者多數(shù)為無癥狀的隱性感染者,而且一旦感染即成為長期的病毒攜帶者,在免疫力低下(如器官移植后,艾滋病等)時(shí),病毒可再活化而導(dǎo)致嚴(yán)重感染。HCMV感染已經(jīng)遍布全球,感染率非常高,不同種族和不同地區(qū)的感染率都不同,其中社會(huì)與經(jīng)濟(jì)狀況較發(fā)達(dá)的地區(qū),成年人的感染率相對較低。要想從人體內(nèi)徹底清除人類巨細(xì)胞病毒是十分困難的,并且目前來說,其對于此類感染的治療具有一定的難度且其費(fèi)用又十分昂貴,因此建立HCMV感染的特異性早期實(shí)驗(yàn)室的診斷是預(yù)防和治療此病的基礎(chǔ)與關(guān)鍵,而HCMV感染的致病機(jī)理與蛋白質(zhì)密切相關(guān)。本研究應(yīng)用i TRAQ多重標(biāo)記技術(shù)對人類巨細(xì)胞病毒(HCMV)感染者的血清蛋白進(jìn)行鑒定和定量分析,獲得HCMV感染者與正常人的蛋白質(zhì)組差異表達(dá)圖譜并鑒定HCMV的標(biāo)志性蛋白,為研究HCMV感染的致病機(jī)理進(jìn)而在未來研究中快速準(zhǔn)確地進(jìn)行HCMV感染早期診斷、監(jiān)測、治療成效評價(jià)等,也為將來研發(fā)快速特異的血清學(xué)診斷試劑提供科學(xué)的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:收集HCMV感染者血清10例與正常對照組血清10例,提取蛋白質(zhì)后去除高豐度蛋白,通過胰蛋白酶對所得蛋白質(zhì)進(jìn)行消化后得到肽段。應(yīng)用基于i TRAQ-8標(biāo)穩(wěn)定同位素標(biāo)記相對定量蛋白質(zhì)組分析對HCMV感染者與正常人的血清總蛋白進(jìn)行標(biāo)記,將標(biāo)記的肽段混合后利用液相色譜分離和質(zhì)譜分析,使用二級(jí)質(zhì)譜圖譜以及數(shù)據(jù)庫檢索鑒定蛋白質(zhì)并且比較蛋白的表達(dá)差異。通過NCBI搜索引擎,以實(shí)驗(yàn)得出的差異蛋白為關(guān)鍵詞進(jìn)行搜索相關(guān)文獻(xiàn),再通過查閱所搜索到得相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行分析總結(jié)找出與HCMV感染具有較高的相關(guān)性的差異表達(dá)蛋白。結(jié)果:將正常人的血清蛋白與HCMV感染者的血清蛋白進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)分析,進(jìn)行蛋白鑒定、比較和相對定量分析,總共鑒定出362種蛋白質(zhì),通過將HCMV感染組與正常組進(jìn)行對比,一共有49種蛋白的表達(dá)差異超過兩倍,其中上調(diào)的有19種,下調(diào)的有30種。通過NCBI搜索引擎,以實(shí)驗(yàn)得出的差異蛋白為關(guān)鍵詞進(jìn)行搜索相關(guān)文獻(xiàn),再通過查閱相關(guān)文獻(xiàn)并進(jìn)行分析得出,脂聯(lián)素(Adiponectin,ADPN)、α-1抗胰蛋白酶(Alpha-1-antitrypsin,α1-AT)、載脂蛋白E(Apolipoprotein E,Apo E)、C反應(yīng)蛋白(C-reactive protein,CRP)、結(jié)合珠蛋白(Haptoglobin,HP)和血清淀粉樣蛋白A1(Serum amyloid A-1 protein,SAA1)這六種差異蛋白與HCMV感染具有明顯的相關(guān)性。結(jié)論:通過定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)可有效地鑒定和相對定量人類血清蛋白從而獲得HCMV感染者與正常人的血清蛋白質(zhì)組差異表達(dá)圖譜,分析研究差異表達(dá)的蛋白,得出C-反應(yīng)蛋白、血清淀粉樣蛋白A1、脂聯(lián)素和載脂蛋白此四種蛋白質(zhì)與HCMV感染以及動(dòng)脈粥樣硬化之間的具有聯(lián)系;而α-1抗胰蛋白酶、結(jié)合珠蛋白與HCMV感染以及相關(guān)腫瘤的發(fā)生存在聯(lián)系,并初步鑒定此六種蛋白質(zhì)為HCMV感染的標(biāo)志性蛋白,為研究HCMV感染的致病機(jī)理提供科學(xué)的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：人類巨細(xì)胞病毒 蛋白質(zhì)組學(xué) iTRAQ 標(biāo)志性蛋白
【學(xué)位授予單位】：深圳大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R511
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 第一章：研究背景10-26
• 1.人類巨細(xì)胞病毒簡述10-12
• 1.1 人類巨細(xì)胞病毒的結(jié)構(gòu)和形態(tài)11
• 1.2 人類巨細(xì)胞病毒的致病機(jī)制11-12
• 1.3 HCMV感染的臨床表現(xiàn)12
• 2 .HCMV感染的常用檢測方法及其研究現(xiàn)狀12-14
• 3 .國內(nèi)外關(guān)于HCMV感染的蛋白組學(xué)及其研究進(jìn)展14-15
• 4.蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)15-19
• 4.1 蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)的簡介15-17
• 4.2 血清蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)與HCMV感染17-18
• 4.3 i TRAQ技術(shù)在蛋白質(zhì)組學(xué)中的應(yīng)用18-19
• 5. i TRAQ技術(shù)19-24
• 5.1 i TRAQ技術(shù)簡介19-21
• 5.2 i TRAQ技術(shù)原理21-23
• 5.3 i TRAQ技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)23-24
• 5.4 i TRAQ標(biāo)記技術(shù)展望24
• 6.本實(shí)驗(yàn)研究目的和意義24-26
• 第二章：材料與方法26-38
• 1. 實(shí)驗(yàn)材料26-29
• 1.1 實(shí)驗(yàn)試劑26-28
• 1.2 實(shí)驗(yàn)儀器28-29
• 1.3 實(shí)驗(yàn)主要試劑的配制29
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法29-38
• 2.1 樣品收集29
• 2.2 去高豐度蛋白29-30
• 2.3 SDS-PAGE30-32
• 2.4 i TRAQ實(shí)驗(yàn)32-38
• 第三章：實(shí)驗(yàn)結(jié)果38-52
• 1.超微量分光光度計(jì)的蛋白質(zhì)定量結(jié)果38-39
• 2.SDS-PAGE檢測去高豐度結(jié)果39
• 3.液相色譜-四極桿飛行時(shí)間質(zhì)譜結(jié)果39-48
• 4.HCMV感染組與正常人組的蛋白質(zhì)組差異表達(dá)圖譜48-52
• 第四章：討論52-58
• 第五章：結(jié)論58-59
• 參考文獻(xiàn)59-69
• 附錄69-84
• 致謝84-86
• 攻讀碩士學(xué)位期間的研究成果86-90

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：人類巨細(xì)胞病毒感染的血清蛋白質(zhì)生物標(biāo)志物篩選與分析研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：334787