本文關(guān)鍵詞：長(zhǎng)江三角洲白山羊優(yōu)質(zhì)筆料毛性狀差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：長(zhǎng)江三角洲白山羊是世界上生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)筆料毛的山羊品種。而優(yōu)質(zhì)筆料毛是制作高檔毛筆的原材料,由其制成的湖筆,筆峰尖銳整齊,豐滿圓潤(rùn),健勁有力,享有“毛穎之技甲天下”之美譽(yù),與徽墨、宣紙、端硯一起,被共譽(yù)為“文房四寶”。毛筆作為中國(guó)文化的歷史傳承,在漢文化的傳播過(guò)程中起到了重要作用,而長(zhǎng)江三角洲筆料毛山羊作為取材來(lái)源之一,其優(yōu)質(zhì)筆料毛的價(jià)值深受重視。 本研究從蛋白質(zhì)水平上對(duì)長(zhǎng)江三角洲白山羊優(yōu)質(zhì)筆料毛性狀形成的機(jī)理進(jìn)行研究,建立優(yōu)質(zhì)筆料毛型和非優(yōu)質(zhì)筆料毛型山羊皮膚雙向凝膠電泳(2-DE)圖譜,篩選鑒定差異表達(dá)蛋白質(zhì),旨在尋找與山羊皮膚中優(yōu)質(zhì)筆料毛性狀相關(guān)的蛋白,進(jìn)而通過(guò)氨基酸序列預(yù)測(cè)基因序列,為優(yōu)質(zhì)筆料毛基因克隆以及進(jìn)一步的分子育種工作奠定基礎(chǔ)。 本試驗(yàn)采集6-8月齡的優(yōu)質(zhì)筆料毛型和非優(yōu)質(zhì)筆料毛型(對(duì)照組)半同胞公羔頸脊部皮膚,提取總蛋白,蛋白上樣量1000μg,進(jìn)行等點(diǎn)聚焦,平衡后進(jìn)行第二向SDS-PAGE,采用考馬斯亮藍(lán)染色法染色,掃描圖像,PDquest8.0軟件分析,識(shí)別差異表達(dá)蛋白點(diǎn),采用Ultraflex III TOF/TOF串聯(lián)質(zhì)譜儀進(jìn)行質(zhì)譜掃描,Mascot2.3搜索引擎查詢(xún)NCBInr數(shù)據(jù)庫(kù),鑒定差異表達(dá)蛋白質(zhì)。 研究結(jié)果表明：(1)采用雙向電泳技術(shù)獲得了優(yōu)質(zhì)筆料毛型和非優(yōu)質(zhì)筆料毛型長(zhǎng)江三角洲白山羊皮膚2-DE表達(dá)圖譜；(2)通過(guò)PDquest8.0軟件分析出33個(gè)差異表達(dá)蛋白點(diǎn),其中20個(gè)蛋白點(diǎn)在優(yōu)質(zhì)筆料毛型皮膚中上調(diào),13個(gè)蛋白點(diǎn)在非優(yōu)質(zhì)筆料毛型皮膚中上調(diào)；(3)選取符合鑒定標(biāo)準(zhǔn)的10個(gè)差異蛋白點(diǎn)做質(zhì)譜分析,通過(guò)Ultraflex III TOF/TOF串聯(lián)質(zhì)譜儀獲得10張肽指紋圖譜(PMF)；(4)對(duì)質(zhì)譜數(shù)據(jù)進(jìn)行分析鑒定后,最終得到4個(gè)差異表達(dá)蛋白質(zhì),分別為纖維蛋白原p鏈亞型1、ATP合成酶p亞基、琥珀酰輔酶A：3-酮酸-輔酶A轉(zhuǎn)移酶1和p肌動(dòng)蛋白。其中,纖維蛋白原p鏈亞型1和ATP合成酶p亞基在優(yōu)質(zhì)筆料毛型山羊皮膚中上調(diào),琥珀酰輔酶A：3-酮酸-輔酶A轉(zhuǎn)移酶1和p肌動(dòng)蛋白在非優(yōu)質(zhì)筆料毛型山羊皮膚中上調(diào)。 分析結(jié)果表明：(1)纖維蛋白原p鏈亞型1可以通過(guò)影響血液黏度介導(dǎo)細(xì)胞的粘附和增殖,并促進(jìn)細(xì)胞的遷移和侵襲,從血供上影響毛囊生長(zhǎng)與發(fā)育,利于皮質(zhì)層的形成。同時(shí)對(duì)皮質(zhì)細(xì)胞的粘附、增殖等生理功能起到了一定作用,從而促進(jìn)了毛干無(wú)髓段的形成；(2)ATP合成酶p亞基可通過(guò)促進(jìn)ATP合成與水解,為角朊細(xì)胞的合成提供能量,供能較多時(shí)使角朊合成過(guò)剩,為皮質(zhì)層的增多提供可能,從而促進(jìn)了毛干無(wú)髓段的形成；(3)琥珀酰輔酶A：3-酮酸-輔酶A轉(zhuǎn)移酶1可通過(guò)雄激素來(lái)影響毛囊毛球部分對(duì)毛干生成的作用,同時(shí)還可能通過(guò)細(xì)胞增殖促進(jìn)毛干髓質(zhì)層高表達(dá)蛋白的合成,從而促進(jìn)毛干髓質(zhì)層的形成；(4)p肌動(dòng)蛋白和角蛋白相互作用并共同參與促進(jìn)毛囊發(fā)育相關(guān)細(xì)胞的胞內(nèi)運(yùn)輸、細(xì)胞形狀、移動(dòng)和分裂等生理功能,對(duì)于維持髓質(zhì)層中的角質(zhì)骨小梁物理形態(tài)、限制髓質(zhì)層的角質(zhì)細(xì)胞中膜蛋白的移動(dòng)起到一定作用,從而利于多孔結(jié)構(gòu)的髓質(zhì)層的形成。 本研究建立了分辨率高和重復(fù)性好的優(yōu)質(zhì)筆料毛型和非優(yōu)質(zhì)筆料毛型山羊皮膚2-DE圖譜,識(shí)別鑒定出一些與優(yōu)質(zhì)筆料毛形成相關(guān)的差異表達(dá)蛋白質(zhì),為進(jìn)一步研究長(zhǎng)江三角洲白山羊優(yōu)質(zhì)筆料毛形成的分子機(jī)制奠定了良好基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：長(zhǎng)江三角洲白山羊 優(yōu)質(zhì)筆料毛 雙向凝膠電泳 蛋白質(zhì)組學(xué)
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：S827
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-9
• 符號(hào)、縮略詞表9-11
• 1 文獻(xiàn)綜述11-21
• 1.1 長(zhǎng)江三角洲白山羊筆料毛的基本概況11-13
• 1.1.1 山羊毛分類(lèi)11
• 1.1.2 筆料毛的研究11
• 1.1.3 長(zhǎng)江三角洲白山羊筆料毛的價(jià)值地位11-12
• 1.1.4 長(zhǎng)江三角洲白山羊的品種保護(hù)現(xiàn)狀12-13
• 1.2 羊毛的研究概況13-17
• 1.2.1 山羊毛囊及羊毛的概況13-15
• 1.2.2 影響羊毛生長(zhǎng)發(fā)育的因素15-17
• 1.3 蛋白質(zhì)組學(xué)的研究概況17-20
• 1.3.1 蛋白質(zhì)組學(xué)的基本概況17-18
• 1.3.2 蛋白質(zhì)組學(xué)在動(dòng)物上的研究進(jìn)展18-20
• 1.3.3 蛋白質(zhì)組學(xué)在皮膚上的研究現(xiàn)狀20
• 1.4 本研究的目的和意義20-21
• 2. 材料與方法21-27
• 2.1 試驗(yàn)材料21-23
• 2.1.1 試驗(yàn)樣品的準(zhǔn)備21
• 2.1.2 主要儀器設(shè)備21
• 2.1.3 主要試劑21-22
• 2.1.4 溶液的配制22-23
• 2.2 試驗(yàn)方法23-27
• 2.2.1 皮膚蛋白的提取23
• 2.2.2 蛋白濃度的測(cè)定23-24
• 2.2.3 雙向電泳24-25
• 2.2.4 凝膠圖像掃描及分析25
• 2.2.5 凝膠塊中蛋白質(zhì)酶解25-26
• 2.2.6 差異蛋白譜分析及數(shù)據(jù)庫(kù)檢索鑒定26-27
• 3 結(jié)果與分析27-41
• 3.1 優(yōu)質(zhì)筆料毛型與非優(yōu)質(zhì)筆料毛型山羊頸脊部皮膚2-DE蛋白質(zhì)圖譜分析27-29
• 3.1.1 雙向電泳體系的分辨率和重復(fù)性27-28
• 3.1.2 山羊皮膚組織雙向凝膠電泳圖譜28-29
• 3.2 差異表達(dá)蛋白點(diǎn)的質(zhì)譜鑒定及數(shù)據(jù)庫(kù)檢索29-32
• 3.3 差異表達(dá)蛋白質(zhì)的鑒定結(jié)果與分析32-41
• 3.3.1 蛋白點(diǎn)6809為纖維蛋白原β鏈亞型132-33
• 3.3.2 蛋白點(diǎn)2702為ATP合成酶β亞基33-34
• 3.3.3 蛋白點(diǎn)8812為琥珀酰輔酶A：3-酮酸-輔酶A轉(zhuǎn)移酶134
• 3.3.4 蛋白點(diǎn)3712和3713為β-肌動(dòng)蛋白34-36
• 3.3.5 蛋白點(diǎn)701、3410、3417、4701和6713為血清白蛋白前體36-41
• 4 討論41-46
• 4.1 樣品采集制備及優(yōu)質(zhì)筆料毛蛋白的差異蛋白質(zhì)組學(xué)41-42
• 4.1.1 樣品采集制備條件41
• 4.1.2 優(yōu)質(zhì)筆料毛蛋白的差異蛋白質(zhì)組學(xué)41-42
• 4.2 筆料毛相關(guān)蛋白分析42-45
• 4.2.1 纖維蛋白原p鏈亞型1與毛纖維生長(zhǎng)的關(guān)系42
• 4.2.2 ATP合成酶β亞基與毛纖維生長(zhǎng)的關(guān)系42-43
• 4.2.3 琥珀酰輔酶A：3-酮酸-輔酶A轉(zhuǎn)移酶1與毛纖維生長(zhǎng)的關(guān)系43-44
• 4.2.4 β肌動(dòng)蛋白與毛纖維生長(zhǎng)的關(guān)系44-45
• 4.3 需要進(jìn)一步研究的內(nèi)容45-46
• 5 結(jié)論46-47
• 參考文獻(xiàn)47-55
• 附錄55-60
• 致謝60-61
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文及獲得專(zhuān)利情況61-62

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：272194