本文選題：Hec + 動(dòng)粒　； 參考：《中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào)》2006年11期

【摘要】：細(xì)胞的分裂是一個(gè)嚴(yán)格調(diào)控,高度有序的過(guò)程.為了將復(fù)制后的染色體均勻、準(zhǔn)確地傳遞給兩個(gè)子細(xì)胞,細(xì)胞在分裂中后期受到紡錘體檢驗(yàn)點(diǎn)的嚴(yán)格監(jiān)控.Hec1定位于動(dòng)粒,是紡錘體檢驗(yàn)點(diǎn)調(diào)控的關(guān)鍵蛋白之一,它通過(guò)螺旋-螺旋結(jié)構(gòu)域與其他動(dòng)粒蛋白相互作用調(diào)節(jié)姐妹染色體的精確分離.為研究Hec1轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控機(jī)理,采用BLAST工具,從GenBank中搜索到了人Hec1基因上游的序列,并利用在線工具h(yuǎn)ttp://mbs.cbrc.jp/research/db/TFSEARCH.html提供的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)搜索引擎,對(duì)其5′啟動(dòng)子調(diào)節(jié)區(qū)段進(jìn)行了分析.分析結(jié)果表明:在Hec1基因上游-200～-1序列內(nèi),存在E2F、ATF4和cAMP應(yīng)答元件結(jié)合蛋白(CREB)等轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控元件.在結(jié)構(gòu)分析的基礎(chǔ)上,提取HeLa細(xì)胞基因組DNA,用PCR方法克隆了Hec1基因啟動(dòng)子,并構(gòu)建了多個(gè)含啟動(dòng)子不同區(qū)段的pGL3熒光素酶報(bào)告基因表達(dá)質(zhì)粒.瞬時(shí)轉(zhuǎn)染HeLa細(xì)胞后的結(jié)果表明,-70～-63以及-155～-144之間的啟動(dòng)子區(qū)對(duì)維持熒光素酶活性最為關(guān)鍵.凝膠遷移實(shí)驗(yàn)證明,這兩個(gè)區(qū)段分別能夠和轉(zhuǎn)錄因子CREB以及ATF4結(jié)合.隨后,采用野生型的以及含有133位磷酸化位點(diǎn)突變的CREB轉(zhuǎn)染HeLa細(xì)胞,通過(guò)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),Hec1的表達(dá)水平分別出現(xiàn)明顯上升和下降.該結(jié)果表明,Hec1表達(dá)的調(diào)控是通過(guò)CREB的活化來(lái)完成的.
[Abstract]:Cell division is a strictly regulated and highly orderly process. In order to transfer the duplicated chromosomes homogeneously and accurately to the two daughter cells, the cells are located in the motilla under the strict monitoring of the spindle test point in the middle and late stage of division, which is one of the key proteins in the regulation of the spindle test point. It regulates the precise separation of sister chromosomes by the interaction of helical-helical domains with other motility proteins. In order to study the regulation mechanism of Hec1 transcription level, the upstream sequence of human Hec1 gene was searched from GenBank by BLAST tool, and the transcription factor binding site search engine provided by http://mbs.cbrc.jp/research/db/TFSEARCH.html was used. The regulation section of its 5 'promoter was analyzed. The results showed that in the upstream sequence of Hec1 gene, there were transcription factor regulatory elements, such as E2FG ATF4 and cAMP response element binding protein (CREB). On the basis of structural analysis, the genomic DNA of HeLa cells was extracted, the promoter of Hec1 gene was cloned by PCR method, and several pGL3 luciferase reporter gene expression plasmids containing different regions of promoter were constructed. The results of transient transfection of HeLa cells showed that the promoter region between -70-63 and -155I-144 was the most important to maintain luciferase activity. Gel migration experiments showed that the two regions could bind to transcription factor CREB and ATF4, respectively. Subsequently, HeLa cells were transfected with wild type CREB containing 133-site phosphorylation site mutation. The expression level of Hec1 was significantly increased and decreased by fluorescence quantitative PCR assay. These results suggest that the regulation of Hec1 expression is mediated by the activation of CREB.
【作者單位】： 中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院細(xì)胞免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)室 中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院細(xì)胞免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)室 中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院細(xì)胞免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)室 中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院細(xì)胞免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)室
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(No.30400078) 國(guó)家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展規(guī)劃(973計(jì)劃,No.2002CB713700) 安徽省自然科學(xué)基金資助課題(No.050430201)~~
【分類號(hào)】：Q75

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1792124