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顯微鏡快速自動對焦技術(shù)研究

發(fā)布時(shí)間:2018-10-20 08:40
【摘要】:作為顯微成像系統(tǒng)的關(guān)鍵技術(shù)之一,自動對焦對于提升顯微切片掃描技術(shù)的效率具有非常重要的意義。目前,在工業(yè)領(lǐng)域應(yīng)用中,顯微切片掃描技術(shù)主要采用離線對焦方法,該方法無法在任意橫向位置快速獲得離焦量,因此在掃描前需要對整個組織樣品表面進(jìn)行焦面建模,導(dǎo)致掃描效率低。一些在線自動對焦方法雖然解決了在任意橫向位置獲取離焦量,一定程度上提高了掃描效率,但仍存在對焦信號獲取延時(shí)、結(jié)構(gòu)復(fù)雜、成本高等問題。針對這些問題,本文提出一種基于傾斜攝像頭和正置攝像頭的自動對焦方法,該方法具有快速、無延時(shí)、結(jié)構(gòu)簡單等特點(diǎn)。本文主要對傾斜攝像頭對焦的理論分析、對焦系統(tǒng)的模塊化設(shè)計(jì)、對焦系統(tǒng)的實(shí)現(xiàn)等內(nèi)容進(jìn)行深入探索與研究,并測試分析了對焦系統(tǒng)的各項(xiàng)性能。主要研究內(nèi)容如下:首先,從對焦系統(tǒng)的快速性出發(fā),提出了傾斜攝像頭如何獲得特征值的方法,同時(shí)得出了實(shí)現(xiàn)傾斜對焦原理的理論關(guān)系,并分析了傾斜對焦系統(tǒng)的三個關(guān)鍵技術(shù)問題:攝像頭傾斜角度的選取、傾斜攝像頭和正置攝像頭的位置關(guān)系以及特征值與離焦量的映射關(guān)系。深入研究了傾斜角度選取的理論和方法。討論了傾斜對焦系統(tǒng)的影響因素,得出了景深、分辨率以及圖像均勻度等通過改變系統(tǒng)參數(shù)可以減少對系統(tǒng)影響的結(jié)論,設(shè)計(jì)并研制了單透鏡非球面聚光鏡的照明系統(tǒng)。其次,在傾斜自動對焦理論的基礎(chǔ)上,設(shè)計(jì)了傾斜攝像頭的固定結(jié)構(gòu)裝置。分析并選取了評價(jià)特征圖像的清晰度評價(jià)函數(shù),對五種算法進(jìn)行比較,確定了效率、單峰性、靈敏度等性能更優(yōu)的Tenengrad算法。設(shè)計(jì)了合理的ROI區(qū)域,有效的提升了圖像算法的計(jì)算效率。設(shè)計(jì)了以STM32微處理器為核心的運(yùn)動控制系統(tǒng),實(shí)現(xiàn)了載物臺的運(yùn)動控制,設(shè)計(jì)并分析了分段控制算法,減少了電機(jī)震蕩、閾值選取等問題對成像穩(wěn)定性的影響。再次,采用了Motic Calibration Slide樣本對雙攝像頭位置標(biāo)定,實(shí)現(xiàn)了特征圖像的獲取。通過實(shí)驗(yàn)標(biāo)定了特征值與離焦量值的映射關(guān)系曲線,分析了理論曲線和實(shí)測曲線的誤差問題,驗(yàn)證了傾斜對焦系統(tǒng)的可行性。研究并設(shè)計(jì)了人機(jī)交互界面,實(shí)現(xiàn)了一體化的對焦功能。最后,測試了傾斜對焦系統(tǒng)的各項(xiàng)性能。對焦效率方面,實(shí)現(xiàn)了1.08s的快速對焦,顯微切片掃描效率提升一個數(shù)量級;靈敏度方面,實(shí)測的靈敏度為12pixel/μm,略低于理論值;工作范圍方面,在10X、20X物鏡下,實(shí)測的工作范圍分別為105.2μm、48.8μm,均滿足生物組織樣品的測量。
[Abstract]:As one of the key techniques of microscopic imaging system, automatic focusing plays an important role in improving the efficiency of microslice scanning. At present, in the application of industrial field, the technology of microslice scanning mainly adopts off-line focusing method, which can not obtain the defocus quantity quickly at any transverse position, so it is necessary to model the focal plane of the whole tissue surface before scanning. The scanning efficiency is low. Some on-line auto-focusing methods solve the problems of obtaining defocus at any transverse position and improving scanning efficiency to a certain extent, but there are still some problems such as delay of acquisition of focusing signal, complex structure and high cost. Aiming at these problems, this paper presents an automatic focusing method based on tilted camera and forward camera, which has the advantages of fast speed, no delay, simple structure and so on. In this paper, the theoretical analysis of tilted camera focusing, the modular design of focusing system, the realization of focusing system and so on are explored and studied, and the performance of focusing system is tested and analyzed. The main research contents are as follows: firstly, from the point of view of the rapidity of the focusing system, the method of how to obtain the eigenvalue of the tilted camera is proposed, and the theoretical relationship of realizing the tilting focusing principle is obtained. Three key technical problems of tilted focusing system are analyzed, including the selection of tilt angle of camera, the position relationship between tilted camera and positive camera, and the mapping relationship between eigenvalues and defocus. The theory and method of tilt angle selection are studied in depth. This paper discusses the influence factors of tilting focusing system, and draws the conclusion that depth of field, resolution and image uniformity can reduce the influence on system by changing system parameters. The illumination system of single lens aspheric condenser is designed and developed. Secondly, on the basis of tilting auto-focus theory, the fixed structure of tilting camera is designed. This paper analyzes and selects the definition evaluation function of the evaluation feature image, compares the five algorithms, and determines the Tenengrad algorithm with better performance, such as efficiency, single peak, sensitivity and so on. A reasonable ROI region is designed to improve the computational efficiency of the image algorithm. A motion control system based on STM32 microprocessor is designed. The motion control of the platform is realized. The subsection control algorithm is designed and analyzed to reduce the influence of motor oscillation and threshold selection on the imaging stability. Thirdly, Motic Calibration Slide samples are used to calibrate the position of the two cameras, and the feature images are acquired. The mapping curves between eigenvalues and defocus values are calibrated experimentally. The errors between theoretical curves and measured curves are analyzed and the feasibility of tilted focusing system is verified. The man-machine interface is studied and designed, and the integrated focusing function is realized. Finally, the performance of the tilted focusing system is tested. In the aspect of focusing efficiency, the fast focusing of 1.08s is realized, and the scanning efficiency of microslice is increased by an order of magnitude. In sensitivity, the measured sensitivity is 12pixel/ 渭 m, which is slightly lower than the theoretical value. The measured range of work is 105.2 渭 m ~ (48. 8) 渭 m, which can meet the requirements of biological tissue samples.
【學(xué)位授予單位】:華僑大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2017
【分類號】:TP391.41

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本文編號:2282631

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