禽流感和新城疫是世界上兩種最重要的禽源的病毒性人獸共患傳染病。這兩種病毒病對養(yǎng)禽業(yè)產(chǎn)生了重大影響。近年來，禽流感和新城疫的不斷發(fā)生和流行不僅嚴(yán)重影響了人民的消費(fèi)信心，也導(dǎo)致國際間的禽類產(chǎn)品貿(mào)易受阻。而且現(xiàn)在困擾家禽產(chǎn)業(yè)最重要的問題是H5、H7、H9亞型流感病毒造成的危害不斷增強(qiáng)且直接感染人的數(shù)量不斷增加。目前常規(guī)診斷禽流感和新城疫的技術(shù)如雞胚病毒分離試驗(yàn)、瓊脂凝膠擴(kuò)散（AGP）、血細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn)（HI）、ELISA方法等在時間和準(zhǔn)確性上無法保證，所以一種快速、準(zhǔn)確、高效的檢測方法應(yīng)運(yùn)而生。實(shí)時熒光定量RT﹣PCR技術(shù)（real-time fluorescent quantitative RT-PCRtechnology）是一種新型的分子核酸檢測技術(shù)。本試驗(yàn)根據(jù)禽流感病毒M基因、HA基因、新城疫病毒M基因的保守序列，分別設(shè)計了特異性的引物與探針，建立了一種能靈敏、特異、快速的檢測通用型、H5、H7、H9亞型禽流感病毒和新城疫病毒的一步熒光定量RT﹣PCR方法。最終開發(fā)出可以在短時間內(nèi)即可完成對待檢樣品的檢測并能成功判定出禽流感與新城疫病毒的存在的快速診斷試劑盒。隨著人民對綠色產(chǎn)品的需求... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

擴(kuò)增曲線基準(zhǔn)線

TaqMan探針法工作原理

AIV-M目的基因PCR產(chǎn)物Fig2.1ThetargetgenePCR

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]體外轉(zhuǎn)錄法制備新城疫病毒熒光定量RT-PCR標(biāo)準(zhǔn)陽性模板[J]. 孫軍峰,劉華雷,張維,王志亮.  中國畜牧獸醫(yī). 2010(04)
[2]實(shí)時熒光定量RT-PCR方法檢測禽流感病毒[J]. 曹軍平,趙國,顧敏,彭宜,張小榮,彭大新,劉秀梵.  中國獸醫(yī)學(xué)報. 2010(01)
[3]實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)的類型、特點(diǎn)與應(yīng)用[J]. 袁亞男,劉文忠.  中國畜牧獸醫(yī). 2008(03)
[4]禽流感病毒4個亞型一步法多重RT-PCR檢測方法研究[J]. 侯義宏,林祥梅,張曉臣,朱中武,賈廣樂,梅琳,呂建強(qiáng),錢永華,韓雪清.  西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2007(08)
[5]一步法多重RT-PCR禽流感病毒分型診斷法的建立與應(yīng)用[J]. 呂長榮,喬海蓮,楊增岐,陳杰,顧節(jié)清,李曉成.  西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2007(04)
[6]一株基因Ⅱ型新城疫強(qiáng)毒株的分子特性[J]. 秦卓明,馬保臣,賈強(qiáng),歐陽文軍,崔治中.  微生物學(xué)報. 2006(06)
[7]禽流感H5、H7、H9亞型多重實(shí)時熒光RT-PCR檢測方法的建立[J]. 秦智鋒,呂建強(qiáng),肖性龍,鐘安清,林鏡中,黃運(yùn)生,林慶燕,陳書琨,金顯忠,林苗,劉勝利.  病毒學(xué)報. 2006(02)
[8]熒光RT-PCR檢測活禽和禽組織中禽流感病毒的研究[J]. 張鶴曉,賴平安,劉環(huán),劉繼紅,郭晉優(yōu),谷強(qiáng),張利峰,汪琳,段生濤,張向東,朱文斯,楊偉,黃茜華,賴少梅,李寧.  檢驗(yàn)檢疫科學(xué). 2004(01)
[9]實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)及其應(yīng)用[J]. 歐陽松應(yīng),楊冬,歐陽紅生,馬鶴雯.  生命的化學(xué). 2004(01)
[10]豬流感病毒研究進(jìn)展[J]. 伍銳,金梅林,陳煥春,蔣增海.  動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2004(01)

碩士論文
[1]禽流感H5、H7、H9亞型多重聯(lián)檢RT-PCR診斷試劑盒的研制[D]. 王鐵峰.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 2008



本文編號：3367063