黑曲霉(Aspergillus niger)是一類常見(jiàn)的曲霉屬真菌,作為一種典型的植物病原微生物,它普遍存在于各種糧食產(chǎn)品、園藝果蔬以及土壤里,可直接導(dǎo)致食物、谷物和果蔬的霉腐變質(zhì),每年對(duì)世界各國(guó)造成難以估量的經(jīng)濟(jì)損失。關(guān)于黑曲霉的致病機(jī)理及防治策略也一直是科研工作者們持續(xù)探尋的問(wèn)題。而近些年,關(guān)于花青苷在抑制病原微生物方面的作用逐漸引起人們的關(guān)注,花青苷是植物中常見(jiàn)的次生代謝物,具有很強(qiáng)的抗氧化能力,與植物的抗逆及各項(xiàng)生理活動(dòng)息息相關(guān),并且對(duì)人類的健康也有著諸多益處;已經(jīng)有相關(guān)研究報(bào)道證明了花青素可以有效抵抗一些病原微生物的侵害,然而,花青苷能否抑制黑曲霉及其機(jī)制,尚不清楚。因此本文探究了紅皮梨中花青素對(duì)黑曲霉侵染的抑制作用,并進(jìn)一步揭示了 WRKY家族轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控紅皮梨果皮中花青苷合成的分子機(jī)制。具體內(nèi)容如下:鑒于黑曲霉是導(dǎo)致水果腐爛的一類主要病原微生物,本文使用了本試驗(yàn)室保存的野生型黑曲霉菌株及其基因缺失突變體(包括ΔcatA、ΔcpefB、ΔsodC,而catA cpeB和sodC基因已被證實(shí)與黑曲霉的抗氧化代謝相關(guān),直接影響黑曲霉的致病力)在梨果實(shí)中進(jìn)行了接種試驗(yàn),發(fā)現(xiàn)在花青苷...

【文章頁(yè)數(shù)】：90 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
摘要
ABSTRACT
第一章: 引言
    1.1. 植物真菌病害研究概述
        1.1.1 病原微生物對(duì)植物的侵害
        1.1.2 國(guó)內(nèi)植物真菌病害研究現(xiàn)狀
        1.1.3 黑曲霉概述
    1.2. 植物的免疫防御及抗病機(jī)制
    1.3 花青苷概述
    1.4 花青苷生物合成和轉(zhuǎn)運(yùn)的分子機(jī)制
        1.4.1. 花青苷生物合成的途徑
        1.4.2 參與花青苷生物合成的相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子
        1.4.3 花青苷的轉(zhuǎn)運(yùn)與儲(chǔ)存
    1.5 課題研究的目的、意義及內(nèi)容
        1.5.1 課題研究的目的和意義
        1.5.2 課題研究的主要內(nèi)容
第二章: 梨果皮中花青苷的抑菌研究
    2.1 試驗(yàn)材料、試劑及儀器
        2.1.1 試驗(yàn)材料
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要儀器設(shè)備
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 不同品種梨果皮花青苷的提取與測(cè)定
        2.2.2 水浸提取法提取梨果皮花青苷
        2.2.3 大腸桿菌和黑曲霉的菌懸液配制
        2.2.4 抑菌率—平板菌落計(jì)數(shù)法
        2.2.5 不同品種梨果實(shí)抗侵染能力的檢測(cè)
        2.2.6 梨果皮侵染部位總RNA的提取及反轉(zhuǎn)錄
        2.2.7 RT-qPCR分析侵染后梨果實(shí)花青苷相關(guān)關(guān)鍵基因的表達(dá)量
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 不同品種間梨果皮花青苷含量測(cè)定結(jié)果分析
        2.3.2 紅茄梨果皮中花青苷的提取
        2.3.3 梨果皮中花青苷的體外平板抑菌試驗(yàn)
        2.3.4 不同品種間梨果實(shí)抗侵染能力的分析
        2.3.5 侵染后梨果皮中花青苷合成相關(guān)基因的表達(dá)量分析
    2.4 本章小結(jié)
第三章: 花青苷合成關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子的功能驗(yàn)證
    3.1 試驗(yàn)材料、試劑及儀器
        3.1.1 試驗(yàn)材料
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 主要儀器設(shè)備
    3.2 試驗(yàn)方法
        3.2.1 WRKYs轉(zhuǎn)錄因子的生物信息學(xué)分析
        3.2.2 不同品種的梨果皮中花青苷的提取及含量測(cè)定
        3.2.3 梨果皮中總RNA的提取及反轉(zhuǎn)錄
        3.2.4 不同品種的梨果皮中花青苷生物合成轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)基因表達(dá)量分析及其與花青苷含量相關(guān)性分析
        3.2.5 用于驗(yàn)證基因功能的植物材料的培養(yǎng)
        3.2.6 PyWRKY26和PyWRKY31等關(guān)鍵基因的瞬時(shí)表達(dá)載體構(gòu)建及菌株轉(zhuǎn)化
        3.2.7 煙草葉片和草莓果實(shí)的瞬時(shí)轉(zhuǎn)化試驗(yàn)
        3.2.8 煙草葉片與草莓果實(shí)的色差分析
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 通過(guò)轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)和生物信息學(xué)分析篩選候選WRKY基因
        3.3.2 驗(yàn)證梨中青苷合成相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子與花青苷積累的相關(guān)性
        3.3.3 PyWRKY26和PyWRKY31基因的克隆及pSAK277載體的雙酶切
        3.3.4 PyWRKY26和PyWRKY31基因瞬時(shí)表達(dá)載體的菌落鑒定及菌株轉(zhuǎn)化
        3.3.5 PyWRKY26/PyWRKY31等花青苷合成相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子誘導(dǎo)花青苷在煙葉中的積累
        3.3.6 PyWRKY26/PyWRKY31等花青苷合成相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子誘導(dǎo)花青苷在草莓中的積累
    3.4 本章小結(jié)
第四章 PyWRKY26調(diào)節(jié)花青苷生物合成的分子機(jī)制
    4.1 試驗(yàn)材料、試劑及儀器
        4.1.1 試驗(yàn)材料
        4.1.2 主要試劑
        4.1.3 主要儀器設(shè)備
    4.2 試驗(yàn)方法
        4.2.1 用于基因功能分析的植物材料的培養(yǎng)
        4.2.2 草莓果實(shí)中總RNA的提取及反轉(zhuǎn)錄合成cDNA
        4.2.3 熒光定量PCR反應(yīng)及引物的設(shè)計(jì)
        4.2.4 梨果實(shí)基因組DNA的提取
        4.2.5 雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)測(cè)定煙草葉片驗(yàn)證轉(zhuǎn)錄因子激活效應(yīng)
        4.2.6 酵母單雜交系統(tǒng)分析
        4.2.7 熒光素酶互補(bǔ)試驗(yàn)分析
        4.2.8 酵母雙雜交系統(tǒng)分析
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 熒光定量分析草莓果實(shí)中花青苷合成及轉(zhuǎn)運(yùn)基因的表達(dá)量
        4.3.2 雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)驗(yàn)證轉(zhuǎn)錄調(diào)控復(fù)合物的相互作用
        4.3.3 驗(yàn)證PyWRKY26和PybHLH3對(duì)PyMYB114啟動(dòng)子的激活活性
        4.3.4 通過(guò)酵母單雜交系統(tǒng)確認(rèn)PyMYB114啟動(dòng)子的靶向基因
        4.3.5 熒光素酶互補(bǔ)試驗(yàn)驗(yàn)證轉(zhuǎn)錄因子PybHLH3與PyWRKY26的相互作用
        4.3.6 通過(guò)酵母雙雜交系統(tǒng)驗(yàn)證PybHLH3與PyWRKY26的相互作用
    4.4 本章小結(jié)
第五章 結(jié)論與展望
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間的學(xué)術(shù)活動(dòng)及成果情況



本文編號(hào)：4011612