淡足側(cè)溝繭蜂Microplitis pallidipes Szepligeti是一種重要的害蟲天敵,主要寄生夜蛾科害蟲里的中低齡幼蟲。本研究針對得到的淡足側(cè)溝繭蜂氣味結(jié)合蛋白Mp OBP8和Mp OBP10,運用相關(guān)生物信息學軟件對它們與其他物種的氣味結(jié)合蛋白進行了序列相似性比對及親緣關(guān)系推斷。并成功構(gòu)建了p ET28a(+)-Mp OBP8、p ET32a(+)-Mp OBP8、p ET28a(+)-Mp OBP10及p ET32a(+)-Mp OBP10原核表達載體,通過對Mp OBP8原核表達條件的優(yōu)化調(diào)整,探索出了它的最優(yōu)表達條件,獲得了含量較高的該氣味結(jié)合蛋白;對Mp OBP10基因進行了原核表達研究。為后期研究Mp OBP8和Mp OBP10的對化學物質(zhì)的識別分子機理夯實了基礎(chǔ)。主要結(jié)果如下:1.淡足側(cè)溝繭蜂Mp OBP8與膜翅目昆蟲中紅側(cè)溝繭蜂Mm OBP8的親緣關(guān)系最近。Mp OBP10與毀側(cè)溝繭蜂Microplitis demolitor的Md OBP72的進化關(guān)系最近,其次是中紅側(cè)溝繭蜂的Mm OBP10。Mp OBP8和Mp OBP10與直翅目、鱗翅目、雙翅目、鞘翅...

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 引言
    1.1 文獻綜述
        1.1.1 昆蟲氣味結(jié)合蛋白的基本理化特性
            1.1.1.1 物理特性
            1.1.1.2 化學特性
        1.1.2 昆蟲氣味結(jié)合蛋白的表達特性
            1.1.2.1 表達部位
            1.1.2.2 表達量
        1.1.3 昆蟲氣味結(jié)合蛋白的生理功能
            1.1.3.1 對特異氣味分子的識別和結(jié)合
            1.1.3.2 結(jié)合、運載特定氣味分子
            1.1.3.3 迅速失活氣味分子
    1.2 實用價值與理論意義
第二章 淡足側(cè)溝繭蜂氣味結(jié)合蛋白MPOBP8和MPOBP10的相關(guān)序列比對和進化分析
    2.1 材料與方法
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 淡足側(cè)溝繭蜂氣味結(jié)合蛋白MpOBP8和MpOBP10的氨基酸序列與其他物種OBPs的相似性比對
        2.2.2 淡足側(cè)溝繭蜂氣味結(jié)合蛋白MpOBP8和MpOBP10的進化樹分析
    2.3 討論
第三章 淡足側(cè)溝繭蜂氣味結(jié)合蛋白MPOBP8和MPOBP10的原核表達
    3.1 材料和方法
        3.1.1 試驗材料
            3.1.1.1 甜菜夜蛾和淡足側(cè)溝繭蜂
            3.1.1.2 主要儀器及試劑
        3.1.2 基本方法
        3.1.3 原核表達載體的構(gòu)建
        3.1.4 融合表達載體的鑒定
        3.1.5 陽性重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化BL21(DE3)菌株
        3.1.6 誘導表達目的蛋白
        3.1.7 SDS-PAGE分析
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 pET28a(+)-MpOBP8融合表達載體的構(gòu)建和表達
            3.2.1.1 pET28a(+)-MpOBP8融合表達載體的構(gòu)建
            3.2.1.2 pET28a(+)-MpOBP8融合表達載體的表達
        3.2.2 pET28a(+)-MpOBP10融合表達載體的構(gòu)建和表達
            3.2.2.1 pET28a(+)-MpOBP10融合表達載體的構(gòu)建
            3.2.2.2 pET28a(+)-MpOBP10融合表達載體的表達
        3.2.3 pET32a(+)-MpOBP10融合表達載體的構(gòu)建和表達
            3.2.3.1 pET32a(+)-MpOBP10融合表達載體的構(gòu)建
            3.2.3.2 pET32a(+)-MpOBP10融合表達載體的表達
        3.2.4 pET32a(+)-MpOBP8融合表達載體的構(gòu)建和表達
            3.2.4.1 pET32a(+)-MpOBP8融合表達載體的構(gòu)建
            3.2.4.2 pET32a(+)-MpOBP8融合表達載體的表達
    3.3 討論
第四章 PET32A(+)-MPOBP8原核表達條件優(yōu)化及純化濃縮
    4.1 材料與方法
        4.1.1 材料
        4.1.2 方法
    4.2 結(jié)果與分析
        4.2.1 誘導溫度的優(yōu)化
        4.2.2 誘導時間的優(yōu)化
        4.2.3 IPTG誘導濃度的優(yōu)化
        4.2.4 加入IPTG時機的優(yōu)化
        4.2.5 純化與濃縮
    4.3 討論
第五章 熒光競爭結(jié)合實驗
    5.1 材料與方法
        5.1.1 供試材料
        5.1.2 供試方法
            5.1.2.1 重組氣味結(jié)合蛋白MpOBP8熒光特征
            5.1.2.2 MpOBP8與氣味化合物的結(jié)合試驗
    5.2 結(jié)果與分析
    5.3 討論
結(jié)論與展望
參考文獻
攻讀碩士期間發(fā)表的論文
致謝



本文編號：4011466