本文關(guān)鍵詞：金釵石斛根際土壤細(xì)菌和放線菌分離及抑菌活性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：植物根際土壤存在大量微生物。植物通過(guò)其根系產(chǎn)生分泌物,向其周?chē)寥乐械奈⑸锾峁┪镔|(zhì)能量和營(yíng)養(yǎng),影響根際微生物的群落結(jié)構(gòu),改變其生物活性。隨著菌種分離、產(chǎn)物檢測(cè)和結(jié)構(gòu)鑒定新技術(shù)的發(fā)展,研究根際微生物及其代謝產(chǎn)物已成為尋找新抗生素和生物活性化合物的重要途徑。金釵石斛為蘭科石斛屬植物,含有生物堿、倍半萜和聯(lián)芐等多種化學(xué)成分,具抗腫瘤、抗氧化和抗白內(nèi)障等生物活性。本研究是對(duì)金釵石斛根際土壤中細(xì)菌和放線菌進(jìn)行分離,篩選具抑菌活性的菌株,分析可培養(yǎng)細(xì)菌、放線菌及具抑菌活性細(xì)菌、放線菌的多樣性,并對(duì)一株具廣譜抑菌活性的放線菌G29的發(fā)酵條件及其抑菌活性物質(zhì)進(jìn)行初步研究。具體研究結(jié)果如下:1.采用稀釋平板法分離,從金釵石斛根際土壤中分離得到604株細(xì)菌和164株放線菌。基于16S r RNA基因序列分析表明,金釵石斛根際土壤細(xì)菌共分為3個(gè)類(lèi)群,即厚壁菌門(mén)(Firmicutes)、變形菌門(mén)(Proteobacteria)、擬桿菌門(mén)(Bacteroidetes),包括16個(gè)屬,其中厚壁菌門(mén)(Firmicutes)包括Bacillus、Lysinibacillus、Paenibacillus、Psychrobacillus等4個(gè)屬;變形菌門(mén)(Proteobacteria)包括Burkholderia、Comamonas、Serratia、Rahnella、Pseudomonas、Acinetobacter、Aeromonas、Leclercia等8個(gè)屬;擬桿菌門(mén)包括Chryseobacterium、Elizabethkingia、Sphingobacterium、Chitinophaga等4個(gè)屬。Bacillus為優(yōu)勢(shì)菌群。金釵石斛根際土壤中分離的菌株在系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系上為放線菌門(mén)(Actinobacteria),包括2個(gè)屬,即Streptomyces和Cellulosimicrobium。其中,Streptomyces為優(yōu)勢(shì)菌群。2.通過(guò)雙層平板打孔法篩選,分別獲得具有抑菌活性的34株細(xì)菌和19株放線菌,具有抑菌活性的細(xì)菌為Bacillus、Pseudomonas、Aeromonas、Psychrobacillus、Leclercia。具有抑菌活性的放線菌為Streptomyces。3.放線菌G29為一株具廣譜抑菌活性菌株,對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、白菜軟腐病菌、白色念珠菌、瓜果腐霉、馬鈴薯晚疫病菌都具有抑菌活性。通過(guò)形態(tài)觀察、生理生化測(cè)定及16S rRNA基因序列分析,初步鑒定為Streptomyces costaricanus。通過(guò)發(fā)酵基礎(chǔ)培養(yǎng)基的篩選、單因子試驗(yàn)、Plackett Burman試驗(yàn)設(shè)計(jì)、最陡爬坡法、響應(yīng)面法等對(duì)G29的發(fā)酵培養(yǎng)基和發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化,獲得發(fā)酵培養(yǎng)的最佳條件:可溶性淀粉4.00 g/L、麥芽浸粉11.27 g/L、酵母浸粉5.83 g/L、CaCO3 3.09 g/L、蒸餾水1000 mL;接種量為5%,初始值6.5,發(fā)酵時(shí)間為120 h,培養(yǎng)溫度28°C,搖瓶轉(zhuǎn)速160 r/min,裝液量100 mL/300 mL。4.采用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取根際土壤放線菌G29發(fā)酵產(chǎn)物的活性成分,其中,乙酸乙酯萃取組分抑菌活性顯著,薄層層析、硅膠柱層析及HPLC對(duì)乙酸乙酯萃取組分活性物質(zhì)進(jìn)行活性跟蹤分離純化,初步得到3個(gè)具有抑菌活性的化合物。其中化合物G-1純度達(dá)99.17%,HPLC-GC初步確定化合物G-1分子量為997。
【關(guān)鍵詞】：根際土壤 鏈霉菌 抑菌活性 多樣性 發(fā)酵條件 分離純化
【學(xué)位授予單位】：貴州師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：S567.239;S154.39
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 第1章 文獻(xiàn)綜述9-17
• 1.1 根際土壤微生物9
• 1.1.1 根際及根際土壤微生物9
• 1.1.2 植物-根際土壤微生物相互作用9
• 1.2 植物根際土壤細(xì)菌和放線菌的多樣性9-10
• 1.2.1 植物根際土壤細(xì)菌多樣性9-10
• 1.2.2 植物根際土壤放線菌多樣性10
• 1.3 土壤微生物多樣性研究方法10-13
• 1.3.1 傳統(tǒng)純培養(yǎng)方法11
• 1.3.2 Biolog法11-12
• 1.3.3 磷脂脂肪酸法12
• 1.3.4 分子生物學(xué)方法12-13
• 1.4 生防細(xì)菌和放線菌的研究13-14
• 1.4.1 生防細(xì)菌13
• 1.4.2 生防放線菌13-14
• 1.5 土壤細(xì)菌和放線菌次級(jí)代謝產(chǎn)物研究14-15
• 1.5.1 土壤細(xì)菌次級(jí)代謝產(chǎn)物研究14
• 1.5.2 土壤放線菌次級(jí)代謝產(chǎn)物研究14-15
• 1.6 研究目的及意義15-16
• 1.7 研究技術(shù)路線16-17
• 第2章 金釵石斛根際土壤可培養(yǎng)細(xì)菌及放線菌多樣性17-27
• 2.1 材料17-18
• 2.1.1 樣品采集17
• 2.1.2 培養(yǎng)基17-18
• 2.1.3 試劑18
• 2.1.4 儀器18
• 2.2 方法18-19
• 2.2.1 根際土壤細(xì)菌和放線菌的分離純化18
• 2.2.2 根際土壤細(xì)菌和放線菌的分子鑒定18-19
• 2.3 結(jié)果與分析19-24
• 2.3.1 金釵石斛根際土壤細(xì)菌和放線菌的分離19-20
• 2.3.2 金釵石斛根際可培養(yǎng)細(xì)菌的鑒定20-23
• 2.3.3 金釵石斛根際可培養(yǎng)放線菌的鑒定23-24
• 2.4 討論24-25
• 2.5 小結(jié)25-27
• 第3章 根際土壤細(xì)菌及放線菌抑菌活性的篩選27-36
• 3.1 材料27-28
• 3.1.1 測(cè)試菌株27
• 3.1.2 指示菌27
• 3.1.3 培養(yǎng)基27-28
• 3.1.4 試劑28
• 3.1.5 儀器28
• 3.2 方法28-29
• 3.2.1 發(fā)酵上清液的制備28
• 3.2.2 指示菌的活化培養(yǎng)28-29
• 3.2.3 具抑菌活性根際土壤細(xì)菌和放線菌的篩選29
• 3.3 結(jié)果與分析29-34
• 3.3.1 具抑菌活性根際土壤細(xì)菌的篩選29-31
• 3.3.2 具抑菌活性根際土壤放線菌的篩選31-33
• 3.3.3 具抑菌活性細(xì)菌和放線菌的初步鑒定33-34
• 3.4 討論34-35
• 3.5 小結(jié)35-36
• 第4章 根際土壤放線菌G29的鑒定及其發(fā)酵條件的優(yōu)化36-54
• 4.1 材料36-37
• 4.1.1 菌株36
• 4.1.2 培養(yǎng)基36
• 4.1.3 試劑36-37
• 4.1.4 儀器37
• 4.2 方法37-39
• 4.2.1 根際土壤放線菌的鑒定37
• 4.2.2 抑菌活性的測(cè)定37
• 4.2.3 發(fā)酵條件的優(yōu)化37-39
• 4.2.4 優(yōu)化條件的驗(yàn)證39
• 4.3 結(jié)果與分析39-51
• 4.3.1 根際土壤放線菌G29的鑒定39-41
• 4.3.2 土壤放線菌G29發(fā)酵液的抑菌活性41
• 4.3.3 發(fā)酵條件的優(yōu)化41-47
• 4.3.4 Plackett-Burman試驗(yàn)設(shè)計(jì)47-48
• 4.3.5 最陡爬坡試驗(yàn)48
• 4.3.6 Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)48-51
• 4.4 討論51-53
• 4.5 小結(jié)53-54
• 4.5.1 放線菌G29的鑒定53
• 4.5.2 放線菌G29發(fā)酵條件優(yōu)化53-54
• 第5章 根際土壤放線菌G29抑菌活性物質(zhì)的初步研究54-61
• 5.1 材料54-55
• 5.1.1 菌株54
• 5.1.2 培養(yǎng)基54
• 5.1.3 試劑54
• 5.1.4 儀器54-55
• 5.2 方法55-56
• 5.2.1 土壤放線菌G29發(fā)酵上清液的制備55
• 5.2.2 抑菌活性的測(cè)定55
• 5.2.3 土壤放線菌G29抑菌活性物質(zhì)的分離純化55-56
• 5.3 結(jié)果與分析56-59
• 5.3.1 根際土壤放線菌G29發(fā)酵產(chǎn)物中抑菌活性成分的極性分析56-57
• 5.3.2 薄層層析展開(kāi)劑的選擇57
• 5.3.3 抑菌活性物質(zhì)的分離57-59
• 5.3.4 抑菌活性物質(zhì)G-1 的純化及分子量測(cè)定59
• 5.4 討論59-60
• 5.5 小結(jié)60-61
• 5.5.1 放線菌G29發(fā)酵產(chǎn)物中抑菌活性成分的極性分析60
• 5.5.2 放線菌G29發(fā)酵產(chǎn)物抑菌活性物質(zhì)初步分離純化60-61
• 參考文獻(xiàn)61-71
• 致謝71-72
• 附錄72-74
• 攻讀碩士研究生期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文74-75

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本文編號(hào)：376558