本文關(guān)鍵詞：枯草芽孢桿菌BS-02降解玉米黃曲霉毒素的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：玉米及其副產(chǎn)品極易被黃曲霉污染,其毒素具有致癌、致突變和致畸等作用,并且給飼料生產(chǎn)企業(yè)和家畜、家禽以及水產(chǎn)業(yè)造成極大的經(jīng)濟損失。然而,如何防控黃曲霉及其毒素對糧食及飼料糧等谷物的污染,避免其對人、家畜、家禽以及水產(chǎn)動物危害是一個迫切需要解決的問題。常用的控制黃曲霉及其毒素的方法是化學藥劑防治,但化學藥劑的長期、大劑量、多頻次運用對環(huán)境產(chǎn)生嚴重污染,進而對人和動物造成危害。采用綠色環(huán)保型生物防治技術(shù)是玉米產(chǎn)前、產(chǎn)后、貯藏過程中預(yù)防黃曲霉發(fā)生和毒素污染的有效方法之一,而枯草芽孢桿菌是一種具有有效抑制抑制黃曲霉及其毒素產(chǎn)生的優(yōu)良益生菌,在預(yù)防黃曲霉毒素方面顯示巨大潛力。本研究采用枯草芽孢桿菌BS-02固態(tài)發(fā)酵被黃曲霉毒素污染的玉米粉,研究枯草芽孢桿菌BS-02對黃曲霉毒素的降解作用及發(fā)酵前后玉米粉主要營養(yǎng)指標的變化。主要結(jié)果如下:利用枯草芽孢桿菌BS-02固態(tài)發(fā)酵被黃曲霉污染的玉米,首先采用單因素試驗,確定各影響因素。結(jié)果顯示,固態(tài)發(fā)酵法酵解黃曲霉毒素最理想的條件為:固態(tài)發(fā)酵溫度為35℃(降解率60.7%);接種量為10%、固態(tài)發(fā)酵時間為60 h,培養(yǎng)基初始最佳pH為7.5和1:1的料與水比。對5個因素進行正交試驗,其最佳條件為溫度40℃,時間48 h,接種量15%,料水比1:0.75,pH8.0,最大降解率81.4%�？莶菅挎邨U菌BS-02對玉米粉固態(tài)發(fā)酵前后的蛋白質(zhì)、糖、脂肪和灰分等成分變化結(jié)果表明:固態(tài)發(fā)酵后玉米粉中粗蛋白含量增加15.95%,總糖含量減少15.3%,灰分和脂肪含量分別增加5.05%和3.5%。從硫酸銨沉淀和乙醇沉淀方法比較中確定80%硫酸銨飽和溶液作為粗提的方法。并通過Sephadex G-25脫鹽柱層析分離純化培養(yǎng)液中的抗菌蛋白,對其降解黃曲霉毒素B1以及生物學特性進行研究,結(jié)果表明:抗菌蛋白的熱穩(wěn)定性較好;pH在中性或偏堿性條件下穩(wěn)定;對堿性和中性蛋白酶抵抗力較弱;對有機溶劑有表現(xiàn)耐受;茚三酮和雙縮脲反應(yīng)均呈陽性。分離純化抗菌蛋白對多種病原真菌具有抑制作用,但對大腸桿菌、金色葡萄球菌和藤黃微球菌無效。紫外分析有3個波峰,第2峰含量較多,其次是第3峰,且具有較強的降解黃曲霉毒素B1的作用。
【關(guān)鍵詞】：玉米 黃曲霉毒素 枯草芽孢桿菌BS-02 固態(tài)發(fā)酵 降解
【學位授予單位】：河南工業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S182
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 1 引言10-27
• 1.1 黃曲霉及其危害10-11
• 1.2 黃曲霉毒素理化性質(zhì)及檢測方法11-16
• 1.2.1 黃曲霉毒素的理化性質(zhì)11-12
• 1.2.2 AFT的產(chǎn)生的適宜條件及合成12-13
• 1.2.3 黃曲霉毒素B1代謝與危害13-14
• 1.2.4 黃曲霉毒素（AFT）常用的檢測方法14-16
• 1.2.4.1 薄層層析色譜法（TLC）檢測：14-15
• 1.2.4.2 高效液相色譜法（HPLC）15
• 1.2.4.3 酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）15-16
• 1.3 AFT的防控方法16-22
• 1.3.1 防控黃曲霉生長的條件16-17
• 1.3.2 黃曲霉毒素的脫毒方法17-22
• 1.4 枯草芽孢桿菌防控黃曲霉污染22-25
• 1.4.1 枯草芽孢桿菌菌株屬性和理化性質(zhì)及拮抗黃曲霉作用22-23
• 1.4.2 枯草芽孢桿菌的非核糖體途徑合成抗菌脂肽23-24
• 1.4.3 枯草芽孢桿菌的核糖體途徑合成的抗菌肽特點24
• 1.4.4 枯草芽孢桿菌分泌的細胞壁降解酶24-25
• 1.4.5 枯草芽孢桿菌分泌的其他抗生素25
• 1.5 立題根據(jù)及意義25-26
• 1.6 研究技術(shù)路線26-27
• 2 材料與方法27-39
• 2.1 實驗材料及儀器27-29
• 2.1.1 主要化學試劑27
• 2.1.2 主要儀器設(shè)備27-28
• 2.1.3 供試菌株28-29
• 2.1.4 培養(yǎng)基29
• 2.1.5 待檢樣品29
• 2.1.6 試劑盒29
• 2.2 實驗方法29-32
• 2.2.1 種子菌液制備29
• 2.2.2 枯草芽孢桿菌BS-02降解AFTB1的效果分析29-30
• 2.2.3 枯草芽孢桿菌BS-02降解AFTB1的 固態(tài)發(fā)酵條件的優(yōu)化30-32
• 2.2.4 正交試驗32
• 2.3 檢測指標及方法32-35
• 2.3.1 ELISA法檢測AFTB132-34
• 2.3.2 玉米粉中營養(yǎng)成分測定34-35
• 2.4 抗菌活性物質(zhì)分離純化35-37
• 2.4.1 抗菌成分粗提35-36
• 2.4.2 層析分離純化36-37
• 2.5 提純蛋白的生物學特性37-38
• 2.5.1 溫度敏感性檢測37
• 2.5.2 pH敏感性檢測37
• 2.5.3 蛋白酶敏感性37
• 2.5.4 有機溶劑敏感性37
• 2.5.5 茚三酮反應(yīng)37
• 2.5.6 雙縮脲反應(yīng)37-38
• 2.5.7 抗菌譜分析38
• 2.6 提純蛋白對黃曲霉毒素降解作用38-39
• 3 結(jié)果與討論39-53
• 3.1 枯草芽孢桿菌BS-02各不同組分對AFTB1的降解率39
• 3.2 單因素實驗結(jié)果39-44
• 3.2.1 確定固態(tài)發(fā)酵溫度39-40
• 3.2.2 確定固態(tài)發(fā)酵時間40-41
• 3.2.3 確定固態(tài)發(fā)酵接種量41-42
• 3.2.4 固態(tài)發(fā)酵初始pH的確定42-43
• 3.2.5 確定固態(tài)發(fā)酵料水比43-44
• 3.3 正交試驗優(yōu)化固態(tài)發(fā)酵條件44-45
• 3.4 發(fā)酵前后玉米粉中營養(yǎng)成分變化45-47
• 3.4.1 發(fā)酵前后玉米粉中粗蛋白含量的變化46
• 3.4.2 發(fā)酵前后玉米粉中總糖含量的變化46
• 3.4.3 發(fā)酵前后玉米粉中灰分含量的變化46-47
• 3.4.4 發(fā)酵前后玉米粉中脂肪含量的變化47
• 3.5 抗菌活性物質(zhì)的分離純化47-52
• 3.5.1 枯草芽孢桿菌活性物質(zhì)粗提方法比較47-48
• 3.5.2 抗菌蛋白生物學特性48-50
• 3.5.3 Sephadex G-25分離與純化及抑菌活性50-52
• 3.6 抗菌活性蛋白在預(yù)防飼糧黃曲霉污染上的應(yīng)用52-53
• 參考文獻53-60
• 致謝60-61
• 個人簡歷61

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