【摘要】：人參(Panax ginsengC.A.Meyer)是五加科人參屬多年生宿根植物,我國傳統(tǒng)名貴中藥材。我國人參栽培面積居世界首位,吉林省長白山區(qū)是我國人參主產(chǎn)區(qū)。人參栽培周期一般5～6年,長時間的單一種植導(dǎo)致農(nóng)田土壤理化性狀惡化、微生物群落結(jié)構(gòu)變化以及病害高發(fā)等問題。人參病害問題嚴重影響人參的產(chǎn)量及品質(zhì),化學(xué)農(nóng)藥防治常導(dǎo)致農(nóng)藥殘留超標等問題,對環(huán)境、生態(tài)及人畜健康也有較大威脅。生物防治具有環(huán)境友好、效果持久、防效顯著等優(yōu)點,且不存在農(nóng)藥殘留問題。本研究從人參根圍土和商品化微生物菌劑中篩選對人參致病菌具有較好抑菌活性的生防菌株,借助核糖體DNA-ITS序列分析、形態(tài)學(xué)觀察及生理生化指標測定對菌株進行了鑒定;通過田間試驗,探究拮抗菌株在田間應(yīng)用中的防治效果;結(jié)合室內(nèi)研究,對拮抗菌株的抑菌機理進行了初步探究,為生防制劑的開發(fā)和拮抗菌株抑菌機理研究奠定了良好基礎(chǔ)。具體結(jié)果如下:1.從人參栽培土和商品化菌劑產(chǎn)品中分離到菌株83株,其中從人參栽培土中分離到66株,從商品化菌劑中分離到17株。其中拮抗細菌QM、BM2、HZ3、GG和X,拮抗真菌HC和DD對人參根腐菌Fusarium solani、人參銹腐菌Cylindrocarpon destructans、人參黑斑菌Alternariapanax和人參灰霉菌Botrytiscinerea均有較好的抑菌活性。經(jīng)同源性分析、形態(tài)學(xué)觀察及生理指標測定,初步鑒定菌株QM、BM2和HZ3為甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌Bacillus methylorophicus,GG為枯草芽孢桿菌B.subtilis,X為解淀粉芽孢桿菌B.amyloliquefaciens;HC為棘孢木霉Trichoderma asperellum,DD為平展木霉T.effusum。同時,利用BIOLOGOmniLogPlus微生物鑒定儀開展了 5株拮抗細菌的生理生化指標測定。2.田間試驗設(shè)置了單個拮抗菌株、5株拮抗細菌、2株拮抗真菌、7株拮抗菌等共計12種處理。研究發(fā)現(xiàn),除BM2外,施用菌液的人參出苗率均高于施用多菌靈陽性對照組和無菌水陰性對照組;施用菌液的人參存苗率與多菌靈組持平、均高于陰性對照組。7株菌株對人參苗生長無不良影響。3.人參致病菌與7株拮抗菌株對峙培養(yǎng),產(chǎn)生明顯的抑菌帶。通過光學(xué)顯微鏡和電鏡觀察發(fā)現(xiàn),與對照組相比,與生防菌對峙培養(yǎng)的人參根腐菌、人參銹腐菌、人參黑斑菌和人參灰霉菌菌絲生長畸形,由此可以推測,其與拮抗菌株對人參致病菌生長的抑制作用密切相關(guān)。4.拮抗菌株QM、BM2和HZ3的發(fā)酵液和發(fā)酵上清液對人參致病菌有明顯的抑制作用,分別提取上清液中的活性物質(zhì),發(fā)現(xiàn)脂肽粗提物、蛋白粗提物以及水飽和正丁醇萃取物對人參致病菌均有不同程度的抑菌效果,說明3株拮抗細菌胞外分泌液中含有多種抑菌活性成分,它們可能單一或協(xié)同完成對人參致病菌的抑制。
[Abstract]:Ginseng (Panax ginsengC.A.Meyer) is a perennial root plant of Panax ginseng family. The cultivated area of ginseng in China ranks first in the world, and Changbai Mountain area of Jilin Province is the main producing area of Panax ginseng in China. The cultivation period of Panax ginseng is 5 ~ 6 years. The long-term single planting results in the deterioration of soil physical and chemical properties, the change of microbial community structure and the high incidence of diseases. The problem of ginseng disease seriously affects the yield and quality of ginseng, and chemical pesticide control often leads to the problem of pesticide residue exceeding the standard, which is also a great threat to the environment, ecology and human and animal health. Biological control has the advantages of friendly environment, lasting effect and remarkable control effect, and there is no pesticide residue problem. In this study, biocontrol strains with good antibacterial activity against ginseng pathogenic bacteria were screened from rhizosphere and commercial microbial agents. The strains were identified by ribosomal DNA-ITS sequence analysis, morphological observation and physiological and biochemical index determination. Through field experiment, the control effect of antagonistic strain in field application was explored, and the antibacterial mechanism of antagonistic strain was preliminarily explored, which laid a good foundation for the development of biological control agent and the study of bacteriostatic mechanism of antagonistic strain. The results are as follows: 1. 83 strains were isolated from ginseng cultivation soil and commercial bacterial products, among which 66 strains were isolated from ginseng cultivation soil and 17 strains were isolated from commercial fungicides. Among them, antagonistic bacteria QM,BM2,HZ3,GG and X, antagonistic fungi HC and DD had better antibacterial activity against Fusarium solani, Cylindrocarpon destructans, Alternariapanax and Botrytiscinerea. By homology analysis, morphological observation and physiological index determination, the strains QM,BM2 and HZ3 were identified as Bacillus subtilis, B. subtilis X and B. amyloliquefaciens. the results showed that Bacillus subtilis, Bacillus subtilis and Bacillus subtilis X were Bacillus subtilis, B. amyloliquefaciens. HC is Trichoderma spinoides Trichoderma asperellum,DD is T. effusuma. At the same time, the physiological and biochemical indexes of 5 antagonistic bacteria were determined by BIOLOGOmniLogPlus microbiological identification instrument. 2. There were 12 treatments including single antagonistic strain, 5 antagonistic bacteria, 2 antagonistic fungi and 7 antagonistic bacteria. The results showed that, except for BM2, the seedling emergence rate of ginseng treated with bacterial solution was higher than that of carbendazim positive control group and aseptic water negative control group. The survival rate of ginseng seedlings was equal to that of carbendazim group, which was higher than that of negative control group. 7 strains had no adverse effect on the growth of ginseng seedlings. The pathogenic bacteria of ginseng were cultured in confrontation with 7 antagonistic strains to produce obvious bacteriostasis zone. Compared with the control group, the mycelium growth of ginseng root rot, ginseng rust rot, ginseng black spot and ginseng gray fungus were found to be abnormal compared with the control group by optical microscope and electron microscope. Therefore, it can be inferred that the growth of ginseng root rot fungus, ginseng rust rot fungus, ginseng black spot fungus and ginseng gray mold mycelium are abnormal. It is closely related to the inhibitory effect of antagonistic strains on the growth of ginseng pathogenic bacteria. 4. 4. The fermentation broth and fermentation supernatant of antagonistic strains QM,BM2 and HZ3 had obvious inhibitory effects on ginseng pathogenic bacteria. The active substances were extracted from the supernatant respectively and the crude lipopeptide extract was found. The crude protein extract and water-saturated n-butanol extract had different inhibitory effects on ginseng pathogenic bacteria, indicating that the extracellular secretions of three antagonistic bacteria contained a variety of antimicrobial active components. They may be a single or synergistic inhibition of ginseng pathogenic bacteria.
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S435.675;S476.1

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 張迎君;武崢;黃健;周心智;曾順德;陳元平;;拮抗菌株抑菌活性的保藏試驗研究[J];微生物學(xué)雜志;2009年06期

2 劉月廉;傅德卿;;分離自桉樹枯葉拮抗菌株的鑒定及拮抗性試驗[J];湛江海洋大學(xué)學(xué)報;2005年06期

3 張迎君;曾順德;武崢;漆巨容;黃健;;果實病原真菌拮抗菌株有效活性保藏試驗研究[J];西南園藝;2006年01期

4 梅新蘭;趙青云;譚石勇;徐陽春;沈標;沈其榮;;辣椒疫病拮抗菌株篩選、鑒定及其防效[J];應(yīng)用生態(tài)學(xué)報;2010年10期

5 姜云;尹望;陳長卿;陳光;高潔;;人參內(nèi)生菌的分離及拮抗菌株的篩選[J];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報;2012年05期

6 馬匯泉,唐文華,孫偉萍;甜葉菊斑枯病生物防治拮抗菌株的篩選[J];山東理工大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2003年02期

7 郝華昆;韓俊華;李為民;牛天貴;;棉花黃、枯萎病拮抗菌株B_(110)的鑒定及其抑菌作用方式[J];植物保護;2007年02期

8 高玉朋;姜喜同;王艷春;江蕾;;培植大支頭高檔人參的關(guān)鍵技術(shù)[J];人參研究;2006年02期

9 ;衛(wèi)生部公布人參(人工種植)為新資源食品[J];中國衛(wèi)生標準管理;2012年06期

10 王洪峰;朱凱;田健;周默;邱智東;;人參雙向固體發(fā)酵過程中化學(xué)成分的變化[J];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報;2013年03期

相關(guān)會議論文 前10條

1 傅瑩;肖愛萍;劉任;游春平;;拮抗菌株之間的親和性與抑菌效果的關(guān)系[A];公共植保與綠色防控[C];2010年

2 周志成;尹華群;易有金;羅寬;朱曉湘;;抗青枯病根圍拮抗菌株湘2-3和2-輕-9發(fā)酵條件優(yōu)化研究[A];2005年中南、西南植物病理學(xué)會和中國菌物學(xué)會聯(lián)合學(xué)術(shù)年會論文集[C];2005年

3 王曉麗;朱宏建;夏花;謝馨;宋瓊;高必達;;從九寨溝國家自然保護區(qū)土樣分離到的拮抗菌株的防病作用研究[A];中國植物病理學(xué)會2009年學(xué)術(shù)年會論文集[C];2009年

4 喻子牛;張吉斌;何進;徐愛章;范明霞;;油菜菌核病拮抗菌株的篩選鑒定及抗菌物質(zhì)的研究[A];中國微生物學(xué)會《第二屆全國農(nóng)業(yè)微生物研究及產(chǎn)業(yè)化研討會》和《第十一屆全國殺蟲微生物學(xué)術(shù)研討會》暨《湖北省暨武漢市微生物學(xué)會和內(nèi)蒙古微生物學(xué)會2008年會》論文摘要[C];2008年

5 王春;王芊;;向日葵菌核病拮抗菌株的篩選[A];中國植物病理學(xué)會2011年學(xué)術(shù)年會論文集[C];2011年

6 楊崇仁;陳可可;王東;鄧德山;張穎君;;西南地區(qū)人參屬植物資源的可持續(xù)利用[A];第九屆全國藥用植物及植物藥學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2010年

7 湯明輝;趙中振;姜志宏;;從人參屬植物中尋找Ginsenoside Rg3的新資源[A];全國第5屆天然藥物資源學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2002年

8 郭云忠;孫廣宇;李振歧;;我國部分省區(qū)毛殼屬真菌分類鑒定及拮抗菌株篩選[A];中國植物病理學(xué)會2006年學(xué)術(shù)年會論文集[C];2006年

9 高曉山;;“人參”名稱試詮釋[A];2002中藥研究論文集[C];2002年

10 陶晶;吳艷;任毓忠;馬桂龍;李春;;新疆加工番茄主要病害拮抗菌株的篩選及其方法研究[A];第一屆全國化學(xué)工程與生物化工年會論文摘要集(下)[C];2004年

相關(guān)重要報紙文章 前8條

1 收集整理 軍野;從學(xué)科的角度認識人參[N];世界報;2008年

2 莊東亮;世界第一枚人參郵票[N];中國集郵報;2011年

3 本報記者 譚娜;人參入食引爭議[N];北京科技報;2011年

4 整理 閆德勝 李曉峰;人參成了新資源食品[N];健康報;2012年

5 民建吉林省委;讓吉林人參占領(lǐng)國際市場[N];人民政協(xié)報;2003年

6 ;人參在中醫(yī)臨床上的應(yīng)用[N];中國醫(yī)藥報;2000年

7 王芳　編譯;難辨梭狀芽孢桿菌快速傳播[N];北京科技報;2013年

8 潘康成邋楊漢博;飼用芽孢菌作用機理的研究應(yīng)用[N];中國畜牧獸醫(yī)報;2008年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前7條

1 殷金龍;人參基因組測序和葉綠體基因組結(jié)構(gòu)研究[D];長春中醫(yī)藥大學(xué);2013年

2 趙云鵬;抗腫瘤中草藥貓人參的種質(zhì)鑒別及其與近緣種的活性比較研究[D];浙江大學(xué);2006年

3 陳躍;海洋源益生芽孢桿菌的篩選、鑒定及應(yīng)用研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

4 侯曉陽;多粘類芽孢桿菌SC2形態(tài)分化的分子機制研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

5 張言周;Bacillus altitudinis SYBC hb4的分離鑒定及其過氧化氫酶性質(zhì)與應(yīng)用研究[D];江南大學(xué);2016年

6 謝珊珊;芽孢桿菌促生抑菌物質(zhì)鑒定及機理研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

7 王偉舵;防治水稻細菌性病害生防芽孢桿菌菌株篩選及芽孢桿菌處理后水稻蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 邵天蔚;7株人參病害生防菌株的篩選、鑒定及抑菌效果評價初步研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2017年

2 呂東明;玉竹葉斑病拮抗菌株的篩選及生防作用研究[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

3 竇桂銘;植物病原真菌拮抗菌株的篩選與幾丁質(zhì)酶基因的克隆[D];海南大學(xué);2013年

4 陶秀娥;黃瓜黑斑病拮抗菌株的篩選和培養(yǎng)條件優(yōu)化[D];河北科技大學(xué);2011年

5 齊鵬;人參發(fā)狀根低聚糖分離及活性初步研究[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

6 王玉;人參葛根配伍前后活性成分及藥效的初步研究[D];吉林大學(xué);2016年

7 史鳳雪;人參屬系統(tǒng)發(fā)育與多倍化研究[D];東北師范大學(xué);2016年

8 何沐陽;干擾人參CS基因的表達對人參三萜成分含量的影響[D];吉林大學(xué);2013年

9 吳天姝;人參SSR及AFLP標記的開發(fā)[D];沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

10 張鑫;人參Cu/Zn-SOD原核表達的載體構(gòu)建、表達及純化[D];長春中醫(yī)藥大學(xué);2012年

，

本文編號：2354628