本文關(guān)鍵詞：精子與慢病毒共孵育條件的優(yōu)化以及轉(zhuǎn)基因豬的制備，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)》 2006年

精子載體法制作轉(zhuǎn)基因試管豬胚胎的研究

徐飛良  

【摘要】：本研究共分為4部分對(duì)豬體外受精技術(shù)和精子轉(zhuǎn)染技術(shù)展開了研究，以期建立一個(gè)高效的以豬精子為載體的基因轉(zhuǎn)移技術(shù)平臺(tái)，為轉(zhuǎn)基因豬乳腺生物反應(yīng)器的研制奠定基礎(chǔ)。 第一部分針對(duì)影響豬體外受精的幾個(gè)常見因素設(shè)立五個(gè)實(shí)驗(yàn)：即對(duì)在成熟培養(yǎng)液中添加不同量(0％，10％，20％，30％)的豬卵泡液(PFF)；不同的成熟培養(yǎng)液成分和卵母細(xì)胞的體外成熟培養(yǎng)溫度；不同的卵母細(xì)胞體外成熟培養(yǎng)方法(微滴法與平皿法)以及卵母細(xì)胞的不同采集方法(剖解法，抽吸法，機(jī)械破碎法)對(duì)豬體外受精效果的影響進(jìn)行了一定的研究。 第二部分重點(diǎn)探討了性成熟對(duì)豬卵母細(xì)胞體外成熟及體外受精效果的影響。結(jié)果表明：(1)性成熟前卵母細(xì)胞在成熟率方面與成熟后差異不大，但是在分裂率上要低于性成熟后。(2)適當(dāng)延長(zhǎng)性成熟前卵母細(xì)胞的體外成熟培養(yǎng)時(shí)間，在一定程度上能提高其分裂率，但對(duì)其成熟率無(wú)顯著影響。(3)性成熟后卵母細(xì)胞延長(zhǎng)體外成熟時(shí)間后其分裂率較44h略有下降。(4)性成熟前卵母細(xì)胞作成熟培養(yǎng)時(shí)，適當(dāng)提高FSH和LH濃度有助于提高成熟率。 第三部分探討了外源DNA轉(zhuǎn)染豬精子的影響因素，精子結(jié)合及內(nèi)化轉(zhuǎn)運(yùn)外源DNA的作用機(jī)制。結(jié)果表明：豬精子具有自發(fā)性結(jié)合外源DNA能力。精子與外源DNA孵育的時(shí)間和PH值在一定程度上影響孵育后精子的活率。 第四部分通過熒光顯微鏡與PCR從不同時(shí)期胚胎中檢測(cè)出攜帶外源DNA的陽(yáng)性胚，說(shuō)明精子與外源DNA共孵育能使精子攜帶外源DNA，并通過體外受精技術(shù)使外源DNA進(jìn)入早期胚胎。精子的轉(zhuǎn)染效率受外源DNA的濃度和精漿的影響。精漿的抑制作用可通過反復(fù)離心洗滌得以解除；如果精子不進(jìn)行去精漿處理，其結(jié)合外源DNA的能力將下降。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號(hào)】：Q789
【目錄】：

前言8-20

第一章 不同卵母細(xì)胞采集方法與培養(yǎng)條件對(duì)豬體外受精的影響研究20-28

第二章 性成熟前豬卵母細(xì)胞對(duì)體外受精的影響28-32

第三章 豬精子轉(zhuǎn)染外源DNA的研究32-39

第四章 以精子為載體的轉(zhuǎn)基因試管豬胚胎研究39-46

結(jié)論46-47

參考文獻(xiàn)47-52

英文縮寫一覽表52-53

致謝53-54

作者簡(jiǎn)介54

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【引證文獻(xiàn)】

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1 曹陽(yáng);高華穎;李慶偉;安利佳;;精子載體法在制備轉(zhuǎn)基因兔中的應(yīng)用[A];中國(guó)生物工程學(xué)會(huì)第三次全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)討論會(huì)論文摘要集[C];2001年

2 趙永聚;孫新明;李福兵;魏泓;;山羊精子介導(dǎo)轉(zhuǎn)染外源DNA的特點(diǎn)及影響因素[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)2008年學(xué)術(shù)年會(huì)暨第六屆全國(guó)畜牧獸醫(yī)青年科技工作者學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2008年

3 劉紅波;呂培茹;楊小淦;朱姿英;胡林林;寧淑芳;左二偉;陸陽(yáng)清;盧晟盛;盧克煥;;服務(wù)于精子載體法轉(zhuǎn)基因相關(guān)研究的豬精子人工智能識(shí)別與預(yù)測(cè)平臺(tái)的建立[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物繁殖學(xué)分會(huì)第十五屆學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（上冊(cè)）[C];2010年

4 張冰;王瀟;張居農(nóng);;轉(zhuǎn)基因克隆技術(shù)在羊上應(yīng)用的研究進(jìn)展[A];2010中國(guó)羊業(yè)進(jìn)展[C];2010年

5 張冰;王瀟;張居農(nóng);;轉(zhuǎn)基因克隆技術(shù)在羊上應(yīng)用的研究進(jìn)展[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物繁殖學(xué)分會(huì)第十五屆學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（上冊(cè)）[C];2010年

6 李標(biāo);喬西波;欒新;孫素平;樊新忠;;睪丸注射法獲得轉(zhuǎn)基因肉兔的初步研究[A];第十二次全國(guó)畜禽遺傳標(biāo)記研討會(huì)論文集[C];2010年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 ;[N];科技日?qǐng)?bào);2002年

2 ;[N];科技日?qǐng)?bào);2002年

3 程前;[N];農(nóng)民日?qǐng)?bào);2000年

4 李海燕 韓萍 穆楠;[N];中國(guó)畜牧獸醫(yī)報(bào);2009年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前7條

1 牟紅梅;用精子載體法制備轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型的研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2002年

2 劉榮立;精子載體法介導(dǎo)生產(chǎn)牛轉(zhuǎn)基因胚胎的初步研究[D];廣西大學(xué);2013年

3 崔凱;精子載體法制備FecB轉(zhuǎn)基因太行山羊技術(shù)的研究[D];河北農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

4 董煥聲;利用精子載體法制備轉(zhuǎn)基因小鼠疾病模型的初步研究[D];萊陽(yáng)農(nóng)學(xué)院;2006年

5 黃吳鍵;小鼠精子核內(nèi)轉(zhuǎn)染技術(shù)的建立及其機(jī)理的研究[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2005年

6 嚴(yán)阿勇;小鼠胞漿內(nèi)精子注射的研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué);2004年

7 陳維;慢病毒介導(dǎo)轉(zhuǎn)基因小鼠胚胎的初步研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

相關(guān)機(jī)構(gòu)

>第一軍醫(yī)大學(xué)

>華中農(nóng)業(yè)大學(xué)

>河北農(nóng)業(yè)大學(xué)

>廣西大學(xué)

>萊陽(yáng)農(nóng)學(xué)院

>中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)

>西北農(nóng)林科技大學(xué)

相關(guān)作者

>嚴(yán)阿勇 >董煥聲

>陳維 >黃吳鍵

>牟紅梅 >崔凱

>劉榮立

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  本文關(guān)鍵詞：精子與慢病毒共孵育條件的優(yōu)化以及轉(zhuǎn)基因豬的制備，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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