本文關鍵詞：精子與慢病毒共孵育條件的優(yōu)化以及轉基因豬的制備，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《湖南農(nóng)業(yè)大學》 2006年

精子載體法制作轉基因試管豬胚胎的研究

徐飛良  

【摘要】：本研究共分為4部分對豬體外受精技術和精子轉染技術展開了研究，以期建立一個高效的以豬精子為載體的基因轉移技術平臺，為轉基因豬乳腺生物反應器的研制奠定基礎。 第一部分針對影響豬體外受精的幾個常見因素設立五個實驗：即對在成熟培養(yǎng)液中添加不同量(0％，10％，20％，30％)的豬卵泡液(PFF)；不同的成熟培養(yǎng)液成分和卵母細胞的體外成熟培養(yǎng)溫度；不同的卵母細胞體外成熟培養(yǎng)方法(微滴法與平皿法)以及卵母細胞的不同采集方法(剖解法，抽吸法，機械破碎法)對豬體外受精效果的影響進行了一定的研究。 第二部分重點探討了性成熟對豬卵母細胞體外成熟及體外受精效果的影響。結果表明：(1)性成熟前卵母細胞在成熟率方面與成熟后差異不大，但是在分裂率上要低于性成熟后。(2)適當延長性成熟前卵母細胞的體外成熟培養(yǎng)時間，在一定程度上能提高其分裂率，但對其成熟率無顯著影響。(3)性成熟后卵母細胞延長體外成熟時間后其分裂率較44h略有下降。(4)性成熟前卵母細胞作成熟培養(yǎng)時，適當提高FSH和LH濃度有助于提高成熟率。 第三部分探討了外源DNA轉染豬精子的影響因素，精子結合及內化轉運外源DNA的作用機制。結果表明：豬精子具有自發(fā)性結合外源DNA能力。精子與外源DNA孵育的時間和PH值在一定程度上影響孵育后精子的活率。 第四部分通過熒光顯微鏡與PCR從不同時期胚胎中檢測出攜帶外源DNA的陽性胚，說明精子與外源DNA共孵育能使精子攜帶外源DNA，并通過體外受精技術使外源DNA進入早期胚胎。精子的轉染效率受外源DNA的濃度和精漿的影響。精漿的抑制作用可通過反復離心洗滌得以解除；如果精子不進行去精漿處理，其結合外源DNA的能力將下降。

【關鍵詞】：
【學位授予單位】：湖南農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2006
【分類號】：Q789
【目錄】：

前言8-20

第一章 不同卵母細胞采集方法與培養(yǎng)條件對豬體外受精的影響研究20-28

第二章 性成熟前豬卵母細胞對體外受精的影響28-32

第三章 豬精子轉染外源DNA的研究32-39

第四章 以精子為載體的轉基因試管豬胚胎研究39-46

結論46-47

參考文獻47-52

英文縮寫一覽表52-53

致謝53-54

作者簡介54

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相關機構

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