本文關鍵詞：同源重組法構建多功能農(nóng)藥降解基因工程菌研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

同源重組法構建多功能農(nóng)藥降解基因工程菌研究

同源重組法構建多功能農(nóng)藥降解基因工程菌研究

摘　要　構建遺傳穩(wěn)定的多功能農(nóng)藥降解基因工程菌可以為農(nóng)藥污染的生物修復提供良好的菌種資源,然而,構建遺傳穩(wěn)定且不帶入外源抗性的基因工程菌是一個難點。通過以受體菌的16S rDNA 為同源重組指導序列、sacB 基因為雙交換正篩選標記構建同源重組載體,二親結合的方法將甲基對硫磷水解酶基因( mpd) 整合到呋喃丹降解菌Sphingomonas sp. CDS21 染色體的16S rDNA 位點,分別成功構建了含1 個和2 個mpd 基因插入到rDNA 位點且不帶入外源抗性的基因工程菌株CDS2mpd 和CDS22mpd。同源重組單交換的效率為317 ×10 - 7～618 ×10 - 7 。通過PCR 和Southern 雜交的方法驗證了同源重組事件�；蚬こ叹z傳穩(wěn)定,能同時降解甲基對硫磷和呋喃丹。甲基對硫磷水解酶(MPH) 的比活在各生長時期均高于原始出發(fā)菌株,比活最高達6122 muPμg。

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