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同源重組法構(gòu)建多功能農(nóng)藥降解基因工程菌研究

同源重組法構(gòu)建多功能農(nóng)藥降解基因工程菌研究

摘　要　構(gòu)建遺傳穩(wěn)定的多功能農(nóng)藥降解基因工程菌可以為農(nóng)藥污染的生物修復(fù)提供良好的菌種資源,然而,構(gòu)建遺傳穩(wěn)定且不帶入外源抗性的基因工程菌是一個(gè)難點(diǎn)。通過(guò)以受體菌的16S rDNA 為同源重組指導(dǎo)序列、sacB 基因?yàn)殡p交換正篩選標(biāo)記構(gòu)建同源重組載體,二親結(jié)合的方法將甲基對(duì)硫磷水解酶基因( mpd) 整合到呋喃丹降解菌Sphingomonas sp. CDS21 染色體的16S rDNA 位點(diǎn),分別成功構(gòu)建了含1 個(gè)和2 個(gè)mpd 基因插入到rDNA 位點(diǎn)且不帶入外源抗性的基因工程菌株CDS2mpd 和CDS22mpd。同源重組單交換的效率為317 ×10 - 7～618 ×10 - 7 。通過(guò)PCR 和Southern 雜交的方法驗(yàn)證了同源重組事件�；蚬こ叹z傳穩(wěn)定,能同時(shí)降解甲基對(duì)硫磷和呋喃丹。甲基對(duì)硫磷水解酶(MPH) 的比活在各生長(zhǎng)時(shí)期均高于原始出發(fā)菌株,比活最高達(dá)6122 muPμg。

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