本文關(guān)鍵詞：紫花苜蓿MsZIP基因超表達(dá)載體的構(gòu)建及轉(zhuǎn)基因苜蓿檢測，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

１８２－１８９

２月２０１２年１　　　草　業(yè)　學(xué)　報　　　

ＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ　　　　　�。痢　〉冢玻本怼〉冢镀�

Ｖｏｌ．２１，Ｎｏ．６

紫花苜蓿ＭｓＺＩＰ基因超表達(dá)載體的

構(gòu)建及轉(zhuǎn)基因苜蓿檢測

李燕１，孫彥２，楊青川１＊，康俊梅１，張鐵軍１，房鋒３

（中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所，北京１中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，北京１１．００１９３；２．００１９１；

）中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所，北京１３．００１９３

，摘要：根據(jù)已經(jīng)克隆得到的Ｍ擴(kuò)增編碼區(qū)ｃ構(gòu)建植物超表達(dá)載體ｓＺＩＰ基因（ＧｅｎＢａｎｋ序列號：ＨＱ９１１７７８）ＤＮＡ，目的基因已經(jīng)正確的插入到載體中，超表達(dá)載體構(gòu)建成功。采用ＣＰＢＩｓＺＩＰ。酶切鑒定表明，ａＣｌ－Ｍ２凍融法將其轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌菌株中，然后采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法，轉(zhuǎn)化紫花苜蓿，共得到１對其中的４株進(jìn)行卡那霉素基１株抗性苗，因Ｐ均得到了目的條帶。同時對這４株抗性苗進(jìn)行目的基因的Ｒ均得到了目的條帶。說明ＣＲ檢測，Ｔ－ＰＣＲ檢測，／／分別用２ＭｓＺＩＰ基因已經(jīng)成功在苜蓿中超表達(dá)。為了進(jìn)一步驗(yàn)證該基因的功能，００ｍｍｏｌＬＮａＣｌ和２５μｍｏｌＬ�。校牛牵叮埃埃疤幚磙D(zhuǎn)基因苜蓿，３ｄ后進(jìn)行生理指標(biāo)的測定。結(jié)果表明，ＭｓＺＩＰ基因在苜蓿中超表達(dá)可以提高苜蓿的－耐鹽性和耐旱性。

關(guān)鍵詞：紫花苜蓿；超表達(dá)載體；苜蓿轉(zhuǎn)化；轉(zhuǎn)基因苜蓿檢測ＭｓＺＩＰ基因；

＋

（）中圖分類號：Ｓ８１６；Ｓ５４１．１０３；Ｑ９４３．２　　文獻(xiàn)標(biāo)識碼：Ａ　　文章編號：１００４５７５９２０１２０６０１８２０８－－－

＊

對于植物的研究已經(jīng)深入到分子水平，側(cè)重于從分子角度闡明植物各種生理反應(yīng)機(jī)　　隨著生物技術(shù)的發(fā)展，

理，分子機(jī)制，以及基因水平的調(diào)控。在培育植物新品種，提高植物抗逆性方面，植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)已經(jīng)成為近年來

１］

。在目前的植物轉(zhuǎn)基因育種中，研究的重點(diǎn)內(nèi)容之一。轉(zhuǎn)基因育種也成為了苜蓿新品種培育的一項(xiàng)重要手段［

主要采用的技術(shù)有農(nóng)桿菌介導(dǎo)法，微注射法，電擊法和基因槍法。在紫花苜蓿（的育種工作中，Ｍｅｄｉｃａｏｓａｔｉｖａ）�。甾r(nóng)桿菌介導(dǎo)法成為主要的方法，首例農(nóng)桿菌介導(dǎo)的苜蓿轉(zhuǎn)化獲得成功，之后又建立了紫花苜蓿的遺傳轉(zhuǎn)１９８６年，

［］２，３］

，化體系［苜蓿轉(zhuǎn)基因工作獲得了很大的進(jìn)展。在苜蓿中，已經(jīng)有很多抗逆相關(guān)的基因被分離，Ｂｒｏｕｗｅｒ等４將

的Ｍ發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因植物Ｓ煙草（Ｎｉｃｏｔｉａｎａｔａｂａｃｕｍ）ｎＳＯＤｃＤＮＡ導(dǎo)入苜蓿中，ＯＤ活性增強(qiáng)，２輪的田間試驗(yàn)鑒定　－　

［］

轉(zhuǎn)基因苜蓿的抗寒性明顯提高。２增強(qiáng)了鹽誘導(dǎo)的表明，０００年Ｗｉｎｉｃｏｖ和Ｂａｓｔｏｌｄ５將Ａｌｉｎｌ基因?qū)胲俎Ｖ�，ｆ［�?/p>

在植株的生長過程中其耐鹽性得到了提高，并且生長速度加快。ＭＭｓＰＲＰ２基因的表達(dá)，ｕｎｎｉｋ等６從紫花苜蓿

）路徑第一個關(guān)鍵酶基因Ｓ中分離出了ＭＡ序列分析結(jié)果表明，它與ＰＫ（ｍｉｔｏｅｎａｃｔｉｖａｔｅｄｋｉｎａｓｅＩＭＫ，ｒｏｔｅｉｎ－　�。纾鹬械模停聋}脅迫下其體內(nèi)的表達(dá)水平上調(diào)。２擬南芥（Ａｒａｂｉｄｏｓｉｓｔｈａｌｉａｎａ）ＰＫ基因具有極大的相似性，０１１年，　ｐ

７］

江藤等［對蒺藜苜蓿（全基因組ＷＲ發(fā)現(xiàn)蒺藜苜蓿中含有２Ｍｅｄｉｃａｏｔｒｕｎｃａｔｕｌａ）ＫＹ轉(zhuǎn)錄因子進(jìn)行了分析，８個�。�

同時將這些基因與水稻（的ＷＲＫＹ基因進(jìn)行了比較分析，為研究苜蓿的ＷＲＷＲＫＹ基因，Ｏｒｚａｓａｔｉｖａ）ＫＹ轉(zhuǎn)�。�

８］

將抗凍基因Ｃ成功得到和田苜錄因子提供了重要的理論依據(jù)。劉曉靜等［ＢＦ２構(gòu)建表達(dá)載體并轉(zhuǎn)化和田苜蓿，９］

蓿的愈傷組織。燕麗萍等［采用分子生物學(xué)檢測和不同濃度的ＮａＣｌ對轉(zhuǎn)ＢＡＤＨ基因苜蓿Ｔ１代２個株系進(jìn)行

遺傳穩(wěn)定性和抗鹽性研究，結(jié)果表明，轉(zhuǎn)入的Ｂ轉(zhuǎn)基因苜蓿耐鹽性明顯高于對照。蔣ＡＤＨ基因可以穩(wěn)定遺傳，

１０］世翠等［將α成功得到了表達(dá)α為苜蓿作為植物生ＦＧＦ基因構(gòu)建表達(dá)載體并轉(zhuǎn)化紫花苜蓿，ＦＧＦ基因的苜蓿，

物反應(yīng)器奠定了理論基礎(chǔ)。

紫花苜蓿是分布最廣的一種牧草，它的適應(yīng)性很強(qiáng)，是世界上種植面積最廣的一種牧草。但是干旱脅迫和高鹽脅迫卻是影響苜蓿生長的主要因素，為了從分子機(jī)理上解決這一問題，越來越多的鹽誘導(dǎo)基因已經(jīng)從苜蓿中分

；改回日期：２０１１１２０５２０１２０１１１＊收稿日期：－－－－

“））基金項(xiàng)目：十二五＂國家科技支撐計(jì)劃課題（和中央級公益性科研院所專項(xiàng)資金項(xiàng)目（資助。２０１１ＢＡＤ１７Ｂ０１０１３２０１１ｃ１４－－－ｊ，：作者簡介：李燕（女，蒙古族，內(nèi)蒙古烏蘭察布人，博士。Ｅ－ｍ１９８４ａｉｌｃａａｓｌｉａｎ＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ－）ｙ

：ｃｈａｎ６６＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎａｉｌ＊通訊作者。Ｅ－ｍｑｙｇ

［３］１１，１２］

。Ｄ離出來，在煙草中超表達(dá)可以增強(qiáng)煙草的耐鹽性［從耐鹽苜蓿ｃｅｕｔｃｈ和Ｗｉｎｉｃｏｖ１ＤＮＡ文庫篩選到一個

新ｃ稱作ＭＳ研究表明該基因與紫花苜蓿富含脯氨酸的細(xì)胞壁蛋白轉(zhuǎn)錄后鹽調(diào)節(jié)表達(dá)ＤＮＡ克隆，ＰＲＰ２９基因，

［４］

有關(guān)，能夠通過提高耐鹽苜蓿中的脯氨酸含量來提高苜蓿的耐鹽性。Ｂ用差異顯示法從菟絲子ｏｒｓｉｃｓ和Ｌａｄｏｓ１

（，侵染的紫花苜蓿中克隆出一個與鈣調(diào)蛋白相關(guān)的基因Ｐ在高鹽、滲透、低溫以及ＡＣｕｓｃｕｔａｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）ＰＲＧｌＢＡ　

［１５］處理下，ＰＰＲＧｌ轉(zhuǎn)錄水平快速上調(diào)。ＧｉｎｚｂｅｒＤＮＡ文庫中成功克隆出２個編碼ｇ等從鹽脅迫的紫花苜蓿根ｃ

兩者的轉(zhuǎn)錄水平在鹽脅迫下顯著增加。本實(shí)驗(yàn)室Ｐｒｏ關(guān)鍵的合成酶基因ｃＤＮＡ克隆，ＭｓＰ５ＣＳ１和ＭｓＰ５ＣＳ２，－－

１６］

。從耐鹽苜蓿中克隆得到的鋅指蛋白基因Ｍ在鹽誘導(dǎo)下，表達(dá)量也顯著升高［ｓＺＦＮ，

本試驗(yàn)構(gòu)建植物超表達(dá)載體Ｐ并采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法將目的基因ＭＢＩｓＺＩＰ，ｓＺＩＰ轉(zhuǎn)入苜蓿中。成功－Ｍ獲得了轉(zhuǎn)基因苜蓿苗，其后的生理指標(biāo)檢測表明，在苜蓿中超表達(dá)Ｍ可以提高苜蓿的耐鹽性，為研究ｓＺＩＰ基因，該基因的功能以及苜蓿新品種的選育提供依據(jù)。１　材料與方法１．１　試驗(yàn)材料

耐鹽品種紫花苜蓿中苜１號由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所育成，本實(shí)驗(yàn)室保存種子。本試驗(yàn)于，／無菌水洗凈，放置在１２０１１年進(jìn)行。選取飽滿健康的種子用７５％乙醇滅菌１０ｍｉｎ０．１％升汞滅菌７ｍｉｎ后，２于２ＭＳ固體培養(yǎng)基上，５℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

克隆載體ＰＭＤ實(shí)驗(yàn)所需的各種限制性內(nèi)切酶和Ｔ用于構(gòu)建超表達(dá)載１８ＮＡ連接酶購自Ｔａｋａｒａ公司，－Ｔ，４Ｄ體的原始質(zhì)粒ＰＢＩ１２１和農(nóng)桿菌菌株ＬＢＡ４４０４由本實(shí)驗(yàn)室保存。大腸桿菌感受態(tài)ＤＨ５α購自北京全式金生物膠回收試劑盒，技術(shù)公司。質(zhì)粒小提試劑盒，Ｔｒｉｚｏｌ購自北京博邁德生物公司。其他生化試劑均購自北京康博順達(dá)生物有限公司。

１．２�。停螅冢桑芯幋a區(qū)ｃＤＮＡ的獲得

根據(jù)已經(jīng)得到的Ｍ設(shè)計(jì)１對帶有酶切位點(diǎn)的引物：ｓＺＩＰ基因序列，ＭＦ：５′ＣＴＡＧＡＡＴＧＧＧＧＡＣＴＡＡＧＴ－；ＭＲ：。酶切位點(diǎn)用下劃線表示，。提分別為ＸＧＡＧ３′５′ＧＡＴＣＣＴＴＣＡＡＧＧＴＴＡＧＣＡＡＣ３′ｂａＩ和ＢａｍＨＩ－Ｇ－取紫花苜蓿總Ｒ反轉(zhuǎn)錄成ｃ進(jìn)行Ｐ切ＮＡ，ＤＮＡ作為模板，ＣＲ擴(kuò)增。ＰＣＲ產(chǎn)物在１％瓊脂糖凝膠上電泳分析后，膠回收，連接到克隆載體ＰＭＤ命名為ＰＭＤ－Ｍ轉(zhuǎn)化大腸桿菌，挑取陽性單菌落，菌體Ｐ１８ｓＺＩＰ，ＣＲ檢測之－Ｔ上，將含有目的條帶的陽性克隆送到北京華大基因生物技術(shù)有限公司測序。后，

１．３　超表達(dá)載體的構(gòu)建

選取測序完全正確的陽性菌提取質(zhì)粒，用限制性內(nèi)切酶ＸｂａＩ和ＢａｍＨＩ雙酶切質(zhì)粒ＰＭＤ－ＭｓＺＩＰ和瓊脂糖凝膠檢測后各自回收目的片段，用ＴＰＢＩ１２１，ＮＡ連接酶，１６℃連接６ｈ。連接好的載體命名為ＰＢＩ－４Ｄ轉(zhuǎn)化大腸桿菌，挑取陽性單菌落，提取質(zhì)粒，ＭｓＺＩＰ，ＰＣＲ檢測后送陽性克隆測序。將含有陽性克隆的菌落，ＸｂａＩ和ＢａｍＨＩ雙酶切鑒定。１．４　轉(zhuǎn)基因苜蓿的獲得

將構(gòu)建好的超表達(dá)載體采用Ｃ用于苜蓿的轉(zhuǎn)化。苜蓿種子滅菌后播種在無菌ａＣｌ２凍融法轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌中，／／／切下子葉，轉(zhuǎn)入預(yù)培養(yǎng)培養(yǎng)基（１２ＭＳ培養(yǎng)基，２５℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)７ｄ后，２，４２．０ｍＬ＋ＫＴ０．２５ｍＬ＋－Ｄ　�。纾缰信囵B(yǎng)２ｄ后，將子葉浸泡在Ｏ擺放在共培養(yǎng)培ＵＭ）Ｄ０．５的農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化菌液中１０ｍｉｎ。取出后吸干菌液，６００＝／／，／養(yǎng)基上（黑暗培養(yǎng)４２，４２．０ｍＬ＋ＫＴ０．２５ｍＬ＋ＵＭ）８ｈ。之后轉(zhuǎn)入誘芽培養(yǎng)基（５０ｍＬＫａｎ＋３００－Ｄ　　　ｇｇｇ／／／，直至形成愈傷組織，出現(xiàn)再生芽。當(dāng)再生芽長至１ｃｍＬＣｅｆ＋２．０ｍＬ２，４０．２５ｍＬ＋ＵＭ）ｍ左　�。模耍浴。纾纾纾瘜⒀壳邢�，轉(zhuǎn)入１地上部分長至１轉(zhuǎn)右時，２ＭＳ培養(yǎng)基中生根培養(yǎng)。當(dāng)再生苜蓿苗根長至１０ｃｍ，０ｃｍ左右時，溫室中繼續(xù)培養(yǎng)。入營養(yǎng)土中，１．５　再生植株的檢測

設(shè)計(jì)１對載體ＰＢＩｓＺＩＰ上的引物ＮＰＴ１：５′ＣＣＧＴＡＡＡＧＣＡＣＧＡＧＧＡＡＧ３′和ＮＰＴ２：５′ＣＴ－Ｍ－ＡＴＡ－－－

［７］

，用于擴(kuò)增卡那霉素抗性基因ＮＰ提取轉(zhuǎn)基因抗ＧＡＡＧＣＧＧＧＡＡＧＧＧＡＣＴ３′ＴⅡ。實(shí)驗(yàn)室改進(jìn)的ＣＴＡＢ法１－

性苜蓿苗的基因組Ｄ質(zhì)粒Ｐ進(jìn)行ＰＮＡ作模板，ＢＩ１２１和未轉(zhuǎn)基因苜蓿ＤＮＡ分別作為陽性和陰性對照，ＣＲ擴(kuò)增。

ＰＣＲ產(chǎn)物在１％瓊脂糖凝膠上電泳分析。

，以ＭＦ和ＭＲ為引物，用于擴(kuò)增目的基因。Ｔ參見說明書）反轉(zhuǎn)ｒｉｚｏｌ法提取轉(zhuǎn)基因抗性苜蓿苗的總ＲＮＡ（錄產(chǎn)物作為模板，質(zhì)粒Ｐ進(jìn)行ＲＢＩｓＺＩＰ和ＰＢＩ１２１分別為陽性對照和陰性對照，Ｔ－ＰＣＲ擴(kuò)增。ＰＣＲ產(chǎn)物在１％－Ｍ瓊脂糖凝膠上電泳分析。

／／分別用２可溶性糖００ｍｍｏｌＬＮａＣｌ和２５μｍｏｌＬＰＥＧ６０００處理轉(zhuǎn)基因苜蓿，３ｄ后測量可溶性蛋白含量，　�。�

１８］

。每個樣品都做３次重復(fù)，含量，相對含水量，丙二醛含量以及脯氨酸含量［測量結(jié)果用ＳＡＳ９．０數(shù)據(jù)分析軟件　

在Ｐ＜０．０５水平進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。２　結(jié)果與分析

２．１　ＭｓＺＩＰ基因ｃＤＮＡ序列的獲得

以紫花苜�？偅疫M(jìn)行ＰＮＡ反轉(zhuǎn)錄得到的ｃＤＮＡ為模板，ＭＦ和ＭＲ為引物，ＣＲ擴(kuò)增。得到１條長約１０００　。將Ｐ圖１）連接到載體ＰＭＤ轉(zhuǎn)化大腸桿菌，將ＰｂＣＲ產(chǎn)物切膠回收后，１８ＣＲ鑒定的陽性克�。陨希鸬臈l帶（

測序，結(jié)果表明序列正確無誤，沒有堿基突變和移碼突變，成功的克隆得到ＭｓＺＩＰ基因。２．２　超表達(dá)載體ＰＢＩｓＺＩＰ構(gòu)建－Ｍ

提取構(gòu)建好的質(zhì)粒Ｐ用限制性內(nèi)切酶ＸＢＩｓＺＩＰ，ｂａＩ和ＢａｍＨＩ雙酶切，１％瓊脂糖凝膠電泳得到１條約－Ｍ），圖２與預(yù)期大小相符，表明植物超表達(dá)載體Ｐ１０００ｂＢＩｓＺＩＰ構(gòu)建成功

�！。停鸬臈l帶（

圖１�。停螅冢桑芯幋a區(qū)ｃＤＮＡ的克隆Ｆｉ．１�。茫欤铮睿椋睿铮妫悖铮洌椋睿颍澹椋铮睿铮妫停螅冢桑小　　。纾纾纾纭　�

；Ａ：目的Ｍ：ＤＮＡ標(biāo)記ＤＮＡ　Ｍａｒｋｅｒ

片段Ｃｏｄｉｎｒｅｉｏｎ

．ｇｇ　

圖２　超表達(dá)載體的酶切鑒定

Ｆｉ．２�。桑洌澹睿簦椋妫椋悖幔簦椋铮睿铮妫铮觯澹颍澹颍澹螅螅澹洌觯澹悖簦铮颍蟆　　　。纾�

；Ｍ：ＤＮＡ標(biāo)記ＤＮＡ　ＭａｒｋｅｒＰ：ＸｂａＩ和ＢａｍＨＩ雙酶切后

的質(zhì)粒ＴｈｅｌａｓｍｉｄｄｉｅｓｔｅｄｂＸｂａＩａｎｄＢａｍＨＩ．　　　　�。穑纾�

２．３　紫花苜蓿再生植株轉(zhuǎn)化

，經(jīng)過農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化的苜蓿子葉，在誘芽培養(yǎng)基上生長３形成愈傷組織（圖３繼續(xù)培養(yǎng)６可見０ｄ后，Ａ）０ｄ之后，，在愈傷組織上出現(xiàn)綠色的出芽點(diǎn)，開始形成再生芽（圖３當(dāng)再生芽長到１ｃ將再生芽切下，，轉(zhuǎn)入生根Ｂ）ｍ左右時，，，培養(yǎng)基中培養(yǎng)（圖３再生植株成苗后，根長１地上部分１圖３即可轉(zhuǎn)入營養(yǎng)土中，在溫室Ｃ）０ｃｍ，０ｃｍ左右時（Ｄ）。中繼續(xù)培養(yǎng)（圖３Ｅ）２．４　再生植株ＰＣＲ鑒定

從獲得的１選取４株進(jìn)行卡那霉素抗性基因的鑒定。Ｐ１株抗性植株中，ＣＲ產(chǎn)物在１％瓊脂糖凝膠電泳上分），圖４與目的大小一致。同時對這４株抗性苗進(jìn)行目的基因的析這幾株再生苗均得到長為４００ｂｐ左右的條帶（），得到了約為１圖５與目的大小一致。證明這４株ＲＴＰＣＲ檢測，１％瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果表明，０００ｂ－�。鸬臈l帶（轉(zhuǎn)基因苜蓿轉(zhuǎn)化成功。

第２１卷第６期草業(yè)學(xué)報２０１２年１８５

圖３　苜蓿轉(zhuǎn)基因苗的再生Ｆｉ．３�。粒欤妫幔欤妫幔颍澹澹睿澹颍幔簦椋铮睿欤幔睿簦蟆　。纾纾�

；；；Ａ：愈傷組織ＣａｌｌｕｓＢ：開始產(chǎn)生再生芽ＲｅｅｎｅｒａｔｉｏｎｂｕｄｓＣ：再生芽Ｒｅｅｎｅｒａｔｉｏｎｂｕｄｓ　�。纾�

；Ｄ：再生根ＲｅｅｎｅｒａｔｉｏｎｒｏｏｔｓＥ：抗性苗Ｒｅｅｎｅｒａｔｉｏｎｓｅｅｄｌｉｎ．　�。纾纾�

圖４　再生植株卡那霉素抗性基因檢測ｅｎｅｌａｎｔｓＦｉ．４　ＮＰＴⅡｇｔｅｓｔｉｎｏｆｒｅｅｎｅｒａｔｉｏｎ　　�。穑纾纾纭�

；；；再生植株Ｒ１～４：ｅｅｎｅｒａｔｉｏｎＣＫ＋：陽性對照ＰｏｓｉｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌＣＫ－：陰性對照Ｎｅａｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌ

．ｌａｎｔｓ　　�。纾纾�

圖５　再生植株ＭｓＺＩＰ目的基因檢測Ｆｉ．５　ＭｓＺＩＰｇｅｎｅｔｅｓｔｉｎｏｆｒｅｅｎｅｒａｔｉｏｎｌａｎｔｓ　　�。纾纾纾稹�

；；；陰性對照Ｎ１～４：再生植株ＲｅｅｎｅｒａｔｉｏｎｌａｎｔｓＣＫ＋：陽性對照ＰｏｓｉｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌＣＫ－：ｅａｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌ．　　�。纾穑�

２．５　再生植株生理指標(biāo)測定

在干旱和高鹽處理之后，可溶性糖含量均增加，轉(zhuǎn)基因苜蓿中高于未轉(zhuǎn)基苜蓿，干旱處理后的增加量高于鹽；；處理（圖６可溶性蛋白的含量也有所增加（圖６相對含水量測定結(jié)果顯示，高鹽處理之后，轉(zhuǎn)基因苜蓿和未Ａ）Ｂ）；轉(zhuǎn)基因苜蓿的差異不大，干旱處理之后，轉(zhuǎn)基因苜蓿中的相對含水量要高于未轉(zhuǎn)基因苜蓿（圖６丙二醛含量均Ｃ）；有顯著的增加，轉(zhuǎn)基因苜蓿的增幅小于未轉(zhuǎn)基因苜蓿，干旱處理之后丙二醛的增加量大于高鹽處理（圖６在轉(zhuǎn)Ｄ）基因和未轉(zhuǎn)基因苜蓿中脯氨酸的含量均大幅增加，轉(zhuǎn)基因苜蓿的增幅大于未轉(zhuǎn)基因苜蓿，高鹽處理之后的增幅大。于干旱處理（圖６Ｅ）３　討論

，堿性亮氨酸拉鏈（蛋白是真核生物的轉(zhuǎn)錄因子和阻抑蛋白中最大而且最保守的類ｂａｓｉｃｌｅｕｃｉｎｅｚｉｅｒｂＺＩＰ）　　ｐｐ

五星文庫wxphp.com包含總結(jié)匯報、外語學(xué)習(xí)、黨團(tuán)工作、行業(yè)論文、人文社科、旅游景點(diǎn)、出國留學(xué)、文檔下載、IT計(jì)算機(jī)以及紫花苜蓿MsZIP基因超表達(dá)載體的構(gòu)建及轉(zhuǎn)基因苜蓿檢測_李燕_圖文等內(nèi)容。

本文共2頁12

  本文關(guān)鍵詞：紫花苜蓿MsZIP基因超表達(dá)載體的構(gòu)建及轉(zhuǎn)基因苜蓿檢測，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。