本文關(guān)鍵詞：關(guān)嶺牛MyoD基因家族對(duì)MyoD1啟動(dòng)子活性的影響

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【摘要】：【目的】生肌決定因子(myogenic determination gene,MyoD)家族是肌肉生成過(guò)程中參與分子調(diào)控作用的一個(gè)重要家族。該家族包括MyoD1,Myf5,Myo G和Myf6,只表達(dá)在成熟的骨骼肌細(xì)胞和其前期細(xì)胞中;在其他的非肌細(xì)胞中,MyoD基因家族會(huì)被抑制。該家族中,MyoD1負(fù)責(zé)早期胚胎成肌祖細(xì)胞的激活并參與胚后骨骼肌的生長(zhǎng)、發(fā)育和修復(fù)等的調(diào)節(jié),以維持個(gè)體骨骼肌的相對(duì)穩(wěn)定,是啟動(dòng)和維持骨骼肌細(xì)胞分化和生長(zhǎng)的重要因素,具有尤為重要的作用,已成為研究熱點(diǎn)。目前MyoD1在多態(tài)性和關(guān)聯(lián)性分析等方面的研究較多,表達(dá)調(diào)控方面主要是研究小鼠、雞和豬肌細(xì)胞生成機(jī)理;在牛上對(duì)它的研究主要在轉(zhuǎn)錄后和翻譯水平的表達(dá),但對(duì)MyoD1在轉(zhuǎn)錄調(diào)控方面的作用機(jī)制還不明確。文章研究關(guān)嶺牛MyoD基因家族對(duì)MyoD1啟動(dòng)子活性的影響,為探討牛MyoD1的表達(dá)調(diào)控機(jī)制奠定基礎(chǔ)�！痉椒ā客ㄟ^(guò)設(shè)計(jì)特異性引物克隆關(guān)嶺牛MyoD基因家族CDS區(qū)和MyoD1啟動(dòng)子片段P1和P2;同時(shí)利用雙酶切的方法分別將CDS區(qū)和克隆的啟動(dòng)子序列連入pcDNA3.1(+)和p GL3-Basic基本骨架,構(gòu)建真核表達(dá)載體pcDNA3.1(+)-Myf5、pcDNA3.1(+)-Myf6、pcDNA3.1(+)-MyoD、pcDNA3.1(+)-Myo G和含螢火蟲(chóng)熒光素酶報(bào)告基因的報(bào)告載體p GL3-P1、p GL3-P2。重組質(zhì)粒經(jīng)酶切和測(cè)序鑒定后,利用共轉(zhuǎn)染的方法將真核表達(dá)載體和報(bào)告載體轉(zhuǎn)染小鼠C2C12細(xì)胞,30 h后裂解細(xì)胞并檢測(cè)細(xì)胞裂解液的雙熒光素酶活性。最后根據(jù)熒光素酶的相對(duì)活性來(lái)分析MyoD基因家族對(duì)MyoD1啟動(dòng)子活性的影響。【結(jié)果】克隆得到的關(guān)嶺牛MyoD基因家族CDS區(qū)和MyoD1啟動(dòng)子序列測(cè)序正確,載體pcDNA3.1(+)-Myf5、pcDNA3.1(+)-Myf6、pcDNA3.1(+)-MyoD、pcDNA3.1(+)-Myo G、p GL3-P1和p GL3-P2經(jīng)酶切和測(cè)序鑒定,證實(shí)載體構(gòu)建成功;與相應(yīng)劑量的對(duì)照組相比,轉(zhuǎn)染pcDNA3.1(+)-Myf5、pcDNA3.1(+)-Myf6、pcDNA3.1(+)-MyoD后,p GL3-P1的相對(duì)熒光素酶活性明顯增強(qiáng),其中,在轉(zhuǎn)染量為200 ng時(shí)增強(qiáng)作用最強(qiáng),差異顯著(P0.05);轉(zhuǎn)染pcDNA3.1(+)-Myo G后,雖然對(duì)p GL3-P1的相對(duì)熒光素酶活性有增強(qiáng)作用,但差異不顯著(P0.05);而轉(zhuǎn)染pcDNA3.1(+)-Myf5、pcDNA3.1(+)-Myf6、pcDNA3.1(+)-MyoD、pcDNA3.1(+)-Myo G后,p GL3-P2的相對(duì)熒光素酶活性變化不明顯(P0.05)�！窘Y(jié)論】在小鼠C2C12細(xì)胞中外源過(guò)表達(dá)轉(zhuǎn)錄因子MyoD、Myf5、Myf6均能顯著提高關(guān)嶺牛MyoD1啟動(dòng)子全長(zhǎng)P1的轉(zhuǎn)錄活性(P0.05);而外源過(guò)表達(dá)轉(zhuǎn)錄因子MyoD基因家族不能顯著提高關(guān)嶺牛MyoD1啟動(dòng)子核心區(qū)P2的轉(zhuǎn)錄活性。說(shuō)明關(guān)嶺牛MyoD、Myf5和Myf6轉(zhuǎn)錄因子與關(guān)嶺牛MyoD1啟動(dòng)子的作用位點(diǎn)不在其核心啟動(dòng)子區(qū)P2上。
【作者單位】： 貴州大學(xué)高原山地動(dòng)物遺傳育種與繁殖省部共建教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/貴州省動(dòng)物遺傳育種與繁殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/貴州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院;貴州大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 關(guān)嶺牛 轉(zhuǎn)錄因子 啟動(dòng)子 MyoD基因家族 報(bào)告基因 熒光素酶活性
【基金】：國(guó)家轉(zhuǎn)基因生物新品種培育重大專(zhuān)項(xiàng)(2013ZX08009-004) 黔科合重大專(zhuān)項(xiàng)(字[2013]6008號(hào)) 貴州省科技廳農(nóng)業(yè)攻關(guān)項(xiàng)目(黔科合NY字[2012]3008號(hào))
【分類(lèi)號(hào)】：S823
【正文快照】： Influence of Myo D1 Promoter Activity by Myo DFamily of Guangling CattleZHANG Wen1,XU Hou-qiang1,CHEN Wei1,2,CHEN Xiang1,ZHAO Jia-fu1,HUAN Cong-cong1,2,XIA Dan1,ZHOU Di10引言【研究意義】轉(zhuǎn)錄因子是一類(lèi)細(xì)胞核蛋白,它通過(guò)結(jié)合順式作用元件(cis-acting element)

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1 安新民,張上隆,徐昌杰;柑桔轉(zhuǎn)化酶基因家族新成員的克隆和序列分析[J];上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)(農(nóng)業(yè)科學(xué)版);2003年01期

2 牛艷梅;沈文濤;周鵬;;Expansin超級(jí)家族的進(jìn)化與命名[J];廣東農(nóng)業(yè)科學(xué);2007年08期

3 魏云虎;張煜s，

本文編號(hào)：751582