轉(zhuǎn)基因作物pat蛋白的雙抗體夾心酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法研究.pdf
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第41卷2013年lO月分析化學(xué)(FENXI HUAXUE) 研究報(bào)告Chinese Journal of Analytical Chemistry第10期1555~1560DOI:10.3724/SP.J.1096.2013.30236轉(zhuǎn)基因作物pat蛋白的雙抗體夾心酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法研究王敏1'2 張亮2 張威2 曹振2 譚桂玉2 南鐵貴圯王保民砣1(北京工商大學(xué)理學(xué)院生物技術(shù)系,北京市植物資源重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,北京100048)2(中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)與生物技術(shù)學(xué)院,北京100093)摘要將克隆到的_Dot基因構(gòu)建原核表達(dá)載體pET30(+)-pat并在大腸桿菌中進(jìn)行表達(dá),分離純化得到高純度Pm蛋白。用所得到的Pm蛋白制備了兔多克隆抗體和鼠單抗2F6。多抗效價(jià)>8000,單抗效價(jià)為5x104;單抗為IgGl類,輕鏈為K型;诳筽耐蛋白單克隆抗體和兔多克隆抗體建立了雙抗夾心酶聯(lián)免疫分析方法(Sandwich ELISA)。檢測(cè)范圍為1.6—100¨g/L,線性回歸方程y=0.6914x一2.572,決定系數(shù)為0.995l。用所建立的方法測(cè)定了5個(gè)轉(zhuǎn)基因抗蟲棉和2個(gè)非轉(zhuǎn)基因棉花品種葉片中pat蛋白的含量,其中轉(zhuǎn)基因抗蟲棉中的3個(gè)品種檢測(cè)出pat蛋白,其余均未檢出pat蛋白。關(guān)鍵詞轉(zhuǎn)基因作物;pat基因;pat蛋白;雙抗夾心酶聯(lián)免疫檢測(cè)法1 引言pat基因(Hosphinothricin acethl transferase)由菌株S.viridochromogenes中分離得到,其Bg/11一SsⅡ片段編碼pa...
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