本文關(guān)鍵詞：沉默ESRP1基因表達對卵巢癌OVCAR5細胞中FGFR2亞型轉(zhuǎn)化的影響

  更多相關(guān)文章： 卵巢腫瘤 上皮剪接調(diào)節(jié)蛋白 受體 成纖維細胞生長因子 型 上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化

【摘要】：目的 :研究沉默上皮剪接調(diào)節(jié)蛋白(1epithelial splicing regulatory protein 1,ESRP1)基因表達對卵巢癌OVCAR5細胞中成纖維細胞生長因子受體2(fibroblast growth factor receptor 2,FGFR2)亞型轉(zhuǎn)換的影響。方法:構(gòu)建靶向ESRP1基因的ESRP1-sh RNA慢病毒表達載體(p LVTHM/ESRP1-sh RNA1和p LVTHM/ESRP1-sh RNA2),同時設(shè)置陰性對照(negative control,NC)質(zhì)粒(p LVTHM/NC-sh RNA);將3種質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染到293T細胞中制備慢病毒。慢病毒感染卵巢癌OVCAR5細胞后,分別采用實時熒光定量PCR及蛋白質(zhì)印跡法檢測ESRP1 m RNA及蛋白的表達水平;采用限制性內(nèi)切酶AvaⅠ和Hin CⅡ檢測沉默ESRP1基因后對FGFR2亞型轉(zhuǎn)換的影響;MTT法檢測沉默ESRP1基因后對OVCAR5細胞增殖的影響;蛋白質(zhì)印跡法檢測上皮標志物E-鈣黏蛋白(E-cadherin)、間質(zhì)標志物N-鈣黏蛋白(N-cadherin)及β-鏈蛋白(β-catenin)表達的變化。結(jié)果:成功構(gòu)建靶向ESRP1基因的sh RNA慢病毒表達載體并包裝獲得慢病毒;與陰性對照組比較,靶向ESRP1基因的sh RNA能明顯抑制OVCAR5細胞中ESRP1 m RNA及蛋白的表達(P值均0.05);沉默ESRP1基因的表達能誘導(dǎo)OVCAR5細胞中FGFR2由上皮亞型(FGFR2b)向間質(zhì)亞型(FGFR2c)的轉(zhuǎn)換,并促進OVCAR5細胞的增殖(P0.05);同時,下調(diào)E-cadherin的表達水平而上調(diào)N-cadherin的表達水平,并激活β-catenin(P值均0.05)。結(jié)論:沉默ESRP1基因表達能誘導(dǎo)OVCAR5細胞中FGFR2亞型的轉(zhuǎn)換,促進OVCAR5細胞增殖,并誘導(dǎo)OVCAR5細胞發(fā)生上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition,EMT),該過程可能涉及Wnt/β-catenin信號通路。
【作者單位】： 三峽大學(xué)醫(yī)學(xué)院生物化學(xué)教研室;
【關(guān)鍵詞】： 卵巢腫瘤 上皮剪接調(diào)節(jié)蛋白 受體 成纖維細胞生長因子 型 上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項目(編號:81550029) 三峽大學(xué)人才啟動基金(編號:KJ2014B064) 湖北省自然科學(xué)基金(編號:2015CFB198) 腫瘤微環(huán)境與免疫治療湖北省重點實驗室(三峽大學(xué))開放基金課題(編號:2015KZL02) 宜昌市科學(xué)技術(shù)局項目(編號:A16-301-31)~~
【分類號】：R737.31
【正文快照】： 結(jié)論:沉默ESRP1基因表達能誘導(dǎo)OVCAR5細胞中FGFR2亞型的轉(zhuǎn)換,促進OVCAR5細胞增殖,并誘導(dǎo)OVCAR5細胞發(fā)生上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition,EMT),該過程可能涉及Wnt/β-catenin信號通路。4.腫瘤微環(huán)境與免疫治療湖北省重點實驗室(三峽大學(xué))開放基金課題(編號:20

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本文編號：729885