發(fā)布時(shí)間：2017-08-18 16:43

  本文關(guān)鍵詞：豬MC4R基因突變體真核表達(dá)載體的構(gòu)建及功能研究

  更多相關(guān)文章： 豬 黑素皮質(zhì)素受體- 突變體 表達(dá)

【摘要】：為研究MC4R基因不同突變體的功能差異,本研究從豬肌肉組織中克隆得到MC4R基因的編碼序列,將克隆片段與pcDNA3.1真核表達(dá)載體進(jìn)行KpnⅠ和EcoRⅠ雙酶切,連接形成重組表達(dá)載體MC4R1,將載體轉(zhuǎn)染BHK細(xì)胞后Western blotting檢測(cè)蛋白表達(dá)。通過(guò)點(diǎn)突變法得到MC4R基因在707/892位點(diǎn)的3個(gè)突變載體,將突變載體瞬時(shí)轉(zhuǎn)染到BHK細(xì)胞,采用免疫熒光對(duì)細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記,通過(guò)激光共聚焦顯微鏡和流式細(xì)胞檢測(cè)熒光表達(dá),結(jié)果發(fā)現(xiàn),克隆的MC4R1基因序列長(zhǎng)度大約1 000bp,在707/892位點(diǎn)序列為G/G,將構(gòu)建的真核表達(dá)載體MC4R1轉(zhuǎn)染BHK細(xì)胞,經(jīng)過(guò)Western blotting檢測(cè)發(fā)現(xiàn)MC4R1蛋白正常表達(dá);通過(guò)點(diǎn)突變法得到在707/892位點(diǎn)突變的突變載體MC4R2(G/A)、MC4R3(A/G)、MC4R4(A/A),經(jīng)過(guò)激光共聚焦觀察熒光表達(dá)后發(fā)現(xiàn),突變受體在細(xì)胞膜上均有正常表達(dá),流式檢測(cè)發(fā)現(xiàn)4個(gè)突變受體表達(dá)的熒光平均強(qiáng)度并沒(méi)有顯著差異(P0.05)。通過(guò)構(gòu)建MC4R基因突變載體后發(fā)現(xiàn),707/892位點(diǎn)突變對(duì)于MC4R受體在細(xì)胞膜的表達(dá)沒(méi)有顯著影響,其具體機(jī)制作用還需深入研究。
【作者單位】： 河南農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)業(yè)部動(dòng)物生化與營(yíng)養(yǎng)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;華中農(nóng)業(yè)大學(xué)教育部動(dòng)物遺傳育種與繁殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;河南省現(xiàn)代畜牧業(yè)協(xié)同創(chuàng)新中心;
【關(guān)鍵詞】： 豬 黑素皮質(zhì)素受體- 突變體 表達(dá)
【基金】：農(nóng)業(yè)部“引進(jìn)國(guó)際先進(jìn)農(nóng)業(yè)科學(xué)技術(shù)”(948)重點(diǎn)項(xiàng)目(2011-G35) 國(guó)家轉(zhuǎn)基因重大專(zhuān)項(xiàng)(2014ZX0801015B) 鄭州市科技攻關(guān)項(xiàng)目(141PPTGG430)
【分類(lèi)號(hào)】：S828
【正文快照】： 與繁殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,武漢430070;3.河南省現(xiàn)代畜牧業(yè)協(xié)同創(chuàng)新中心,鄭州450002)隨著分子生物學(xué)技術(shù)的飛速發(fā)展,分子標(biāo)記輔助選擇和全基因選擇育種方式越來(lái)越受關(guān)注,而對(duì)于控制動(dòng)物性狀的功能基因的篩選和深入研究也成為熱點(diǎn),黑素皮質(zhì)素受體-4(MC4R)基因是豬育種的重要候選基因[1]

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 張瑜;馬鳳龍;劉煥珍;喬彥良;趙玉軍;;牛乳素真核表達(dá)載體的構(gòu)建[J];湖北農(nóng)業(yè)科學(xué);2008年05期

2 王小玉;林華;郭萬(wàn)柱;徐志文;王印;朱玲;;豬前胸腺素真核表達(dá)載體的構(gòu)建及表達(dá)[J];西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào);2010年04期

3 付通超;萬(wàn)紅平;程渝;顏其貴;;豬流行性腹瀉病毒E基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建與鑒定[J];畜牧獸醫(yī)雜志;2012年04期

4 張騰業(yè);王珍珍;陳仁金;袁紅花;胡安康;吳連連;朱裕華;冀德君;朱孝榮;;血紅素氧合酶-2基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建[J];家畜生態(tài)學(xué)報(bào);2014年06期

5 樊萍;楊竹;胡接力;崔靜;湯雄文;王露穎;甘勝偉;;Ⅰ型單純皰疹病毒胸苷激酶真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其表達(dá)鑒定[J];生物技術(shù)通報(bào);2009年07期

6 黃海龍;王哲;于國(guó)健;孫佳;;牛脂聯(lián)素基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建及鑒定[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2009年23期

7 石琳;藺帥;周東慶;孫艷君;王志強(qiáng);;豬生長(zhǎng)激素促分泌素受體基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建及鑒定[J];中國(guó)畜牧獸醫(yī);2014年01期

8 陳定虎,王錫鋒,李莉,周廣和;美洲商陸抗病毒蛋白真核表達(dá)載體的構(gòu)建及在畢赤酵母中的表達(dá)[J];農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào);2003年02期

9 黃亞平;郭萬(wàn)柱;李曉琪;;內(nèi)江豬γ干擾素基因的克隆、序列分析及真核表達(dá)載體的構(gòu)建[J];中國(guó)畜牧獸醫(yī);2007年05期

10 劉媛媛;王俊亞;張曉娟;陳禮朋;岳旭龍;高文明;李雙亮;崔保安;李新生;;雞α-2,3-唾液酸轉(zhuǎn)移酶Ⅰ基因的克隆和真核表達(dá)載體的構(gòu)建[J];中國(guó)畜牧獸醫(yī);2013年01期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 張燦;鞠吉雨;馮永堂;李在連;;乙肝病毒反義X基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建[A];山東免疫學(xué)會(huì)、山東微生物學(xué)會(huì)醫(yī)學(xué)微生物學(xué)專(zhuān)業(yè)委員會(huì)、山東省醫(yī)學(xué)會(huì)微生物學(xué)和免疫學(xué)專(zhuān)業(yè)委員會(huì)、山東省醫(yī)藥生物技術(shù)學(xué)會(huì)2001年學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2001年

2 林英;鄭建秋;劉平;葛紅巖;侯麗麗;呂鋒;金迪;馬洪梅;付曉玻;;縫隙連接蛋白50真核表達(dá)載體的構(gòu)建與表達(dá)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十二屆全國(guó)眼科學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2007年

3 李剛;王平;;人膀胱逼尿肌中腎上腺素能β_2受體基因的克隆及反義真核表達(dá)載體的構(gòu)建[A];全面建設(shè)小康社會(huì)：中國(guó)科技工作者的歷史責(zé)任——中國(guó)科協(xié)2003年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集（下）[C];2003年

4 孫立;田曉濱;胡如印;汪雷;陸延盛;;人骨形成蛋白2真核表達(dá)載體的構(gòu)建和體外表達(dá)[A];第六屆西部骨科論壇暨貴州省骨科年會(huì)論文匯編[C];2010年

5 陳治中;王曉蓓;王琳;毛曉露;陳鳳花;劉峰;胡麗華;;人T細(xì)胞免疫球蛋白粘蛋白-3基因及其融合蛋白真核表達(dá)載體的構(gòu)建和生物信息學(xué)分析[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第九次全國(guó)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨中國(guó)醫(yī)院協(xié)會(huì)臨床檢驗(yàn)管理專(zhuān)業(yè)委員會(huì)第六屆全國(guó)臨床檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

6 吳紅聯(lián);;5-脂氧化酶基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建與鑒定[A];第八次全國(guó)醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議(中華醫(yī)學(xué)會(huì)2009年醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)年會(huì))論文摘要匯編[C];2009年

7 劉文文;趙永波;;大鼠GDNF真核表達(dá)載體構(gòu)建[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國(guó)神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2004年

8 張金陽(yáng);耿陽(yáng);顏焰;廖敏;周繼勇;;狂犬病毒磷蛋白真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其在成神經(jīng)瘤細(xì)胞上的表達(dá)[A];第3屆全國(guó)人畜共患病學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2011年

9 劉金朋;崔保安;陳紅英;魏戰(zhàn)勇;王淑娟;鈔安軍;;豬白細(xì)胞介素-2基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物傳染病學(xué)分會(huì)第四次豬病防控學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2010年

10 孫立;田曉濱;楊述華;胡如印;汪雷;陸延盛;張宇坤;傅德皓;;人骨形成蛋白~2真核表達(dá)載體的構(gòu)建和體外表達(dá)[A];2009第一屆貴州骨科論壇論文匯編[C];2009年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 張中橋;可誘導(dǎo)性真核表達(dá)載體構(gòu)建成功[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2004年

2 ;1.3倍乙型肝炎病毒全基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建及在HepG2細(xì)胞中的表達(dá)[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2003年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 張守純;p16真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其轉(zhuǎn)基因的研究[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2004年

2 王小芳;重組腎上腺髓質(zhì)素真核表達(dá)載體的構(gòu)建及實(shí)驗(yàn)研究[D];復(fù)旦大學(xué);2004年

3 張?jiān)?SLC34A2基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其轉(zhuǎn)染人肺泡上皮細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[D];吉林大學(xué);2008年

4 杜德偉;丙型肝炎病毒的受體研究——B族Ⅰ型清道夫受體介導(dǎo)HCV入胞作用的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2004年

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本文編號(hào)：695648