精子與慢病毒共孵育條件的優(yōu)化以及轉(zhuǎn)基因豬的制備.pdf文檔全文免費(fèi)閱讀、在
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中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué) 2013,46 9 : 1903-1914
Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2013.09.018 精子與慢病毒共孵育條件的優(yōu)化以及轉(zhuǎn)基因豬的制備 蔡偉光, 習(xí)欠云, 肖 敏, 關(guān)立增, 孟繁明, 束 剛, 朱曉彤, 江青艷, 吳珍芳, 張永亮 (華南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院/廣東省農(nóng)業(yè)動(dòng)物基因組與分子育種重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廣州 510642 ) 摘要:【目的】探索慢病毒與精子共孵育的方法,并制備轉(zhuǎn)基因豬!痉椒ā坎捎谜辉囼(yàn)分析精子密度、病 毒量、精子與慢病毒共孵育時(shí)間、精子與慢病毒共孵育溫度對(duì)精子活力的影響,采用PCR 和 Southern blotting 5 7 檢測(cè)轉(zhuǎn)基因!窘Y(jié)果】①優(yōu)化慢病毒與精子共孵育條件為:100 μL 慢病毒原液(5×10 cfu)與1.0×10 個(gè)/mL 精 9 子在17℃下孵育30 min;②與病毒孵育后的精子(10 個(gè)/mL)給母豬人工授精時(shí),經(jīng)PCR 檢測(cè)49 頭仔豬中有14 頭呈陽性;③Southern blotting 結(jié)果表明,,8 頭PCR 陽性仔豬中,4 頭融合了外源基因!窘Y(jié)論】?jī)?yōu)化了精子與 5 7 慢病毒共孵育的條件(100 μL 慢病毒原液(5×10 cfu)與1.0×10 個(gè)/mL 精子在17℃下孵育30 min),成功制備 了轉(zhuǎn)基因豬,并檢測(cè)有外源基因的融合。 關(guān)鍵詞:慢病毒; 精子介導(dǎo)轉(zhuǎn)基因; 轉(zhuǎn)基因豬 Optimization of Incubation of Sperm and Lentivirus and Transgenic Pigs Production CAI Wei-guang, XI Qian-yun, XIAO Min, GUAN Li-zeng, MENG Fan-ming, SHU Gang, ZHU Xiao-tong, JIANG Qing-yan, WU Zhen-fang, ZHANG Yong-liang College of Animal Science, South China Agricultural University/ Guangdong Provincial Key Lab of Agoanimal Genomics and Molecular Breeding, Guangzhou 510642 Abstract : 【Objective 】A new method was developed for producing transgenic pig using incubation of lentivirus and sperm. 【Method 】Effects of sperm number, amount of lentivirus, incubation time and incubation temperature on sperm
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