本文關(guān)鍵詞：線粒體COX基因單核苷酸多態(tài)性與肝癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)性研究

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【摘要】：目的:原發(fā)性肝癌(Hepatocellular Carcinoma,HCC)是一種常見的惡性腫瘤,目前在中國致死性腫瘤中肝癌已躍據(jù)第二位,給人民身體素質(zhì)提升和國民經(jīng)濟(jì)發(fā)展造成了嚴(yán)重威脅。近年來,越來越多的研究發(fā)現(xiàn)線粒體DNA(mitochondria DNA,mtDNA)突變及單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphisms,SNP)與腫瘤的發(fā)生相關(guān)。但研究范圍多局限于mtDNA非編碼區(qū),少有涉及mtDNA的編碼區(qū)域。COX片段是位于mtDNA編碼區(qū)的基因,主要負(fù)責(zé)編碼細(xì)胞色素氧化酶(cytochrome oxidase,COX)其中的三個(gè)亞基,由于細(xì)胞色素氧化酶在線粒體氧化磷酸化過程以及致癌機(jī)制中的關(guān)鍵地位,其對(duì)應(yīng)基因區(qū)域的突變和多態(tài)性也可能與腫瘤發(fā)生存在內(nèi)在聯(lián)系。SNP是基因組DNA序列中單個(gè)核苷酸變異引起的多態(tài)性,被廣泛應(yīng)用于多基因疾病的易感基因研究領(lǐng)域。本研究通過對(duì)整段COX基因進(jìn)行DNA擴(kuò)增、測序,并結(jié)合病例-對(duì)照統(tǒng)計(jì)學(xué)方法,找出與肝細(xì)胞癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)的SNP位點(diǎn),并分析這些位點(diǎn)SNP與患者臨床特征的關(guān)系,從而進(jìn)一步揭示COX基因SNP與肝癌發(fā)生發(fā)展之間的關(guān)系,這將對(duì)肝癌易患人群的早期篩查和防治工作帶來深遠(yuǎn)影響。方法:1研究對(duì)象及標(biāo)本采集:其中病例組130例肝細(xì)胞癌患者均為2007年9月~2008年3月期間于河北醫(yī)科大學(xué)附屬第四醫(yī)院肝膽外科住院的病人,術(shù)前均經(jīng)免疫學(xué)檢查及影像學(xué)方法臨床診斷為原發(fā)性肝癌,且術(shù)后病理并已被證實(shí)為肝細(xì)胞癌。健康對(duì)照組為2008年10月~2009年4月期間河北醫(yī)科大學(xué)附屬第四醫(yī)院采集的正常人抗凝靜脈血標(biāo)本。2基因組DNA的提取:分離提取肝癌冰凍組織及對(duì)照組血樣的基因組DNA(DNA純化試劑盒),提取后置于4℃恒溫冰箱中長期保存?zhèn)溆谩? PCR(polymerase chain reaction)擴(kuò)增COX基因目的片段:在NCBI數(shù)據(jù)庫中查找COX基因所包含的基因片段,包含COI、COII和COIII三段,按600bps左右長度將COX基因劃分為9個(gè)小基因片段(見Table 2),遵照引物設(shè)計(jì)原則對(duì)每段小基因片段設(shè)計(jì)PCR上下游引物,后使用PCR預(yù)混試劑盒進(jìn)行擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳后,放入凝膠成像系統(tǒng)(美國Image公司)證實(shí)已擴(kuò)增出DNA條帶,將擴(kuò)增產(chǎn)物送至生物工程技術(shù)有限公司(Shanghai)進(jìn)行測序。3統(tǒng)計(jì)分析:對(duì)于計(jì)量資料,當(dāng)n30例時(shí)采用t檢驗(yàn)(Student's t test),n≥30例采用u檢驗(yàn)(u-test);采用χ2檢驗(yàn)比較計(jì)數(shù)資料,并計(jì)算P值。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,P0.05被認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1肝癌組與對(duì)照組臨床資料對(duì)比:年齡、性別在兩組之間無顯著性差異(P0.05)。2在肝癌組中隨機(jī)選出30例標(biāo)本DNA進(jìn)行擴(kuò)增、測序,分析后發(fā)現(xiàn)6962G/A、7196C/A、7853G/A、8701A/G、8584G/A、8414C/T、9180A/G、9540T/C、9545A/G九個(gè)高頻率多態(tài)性位點(diǎn)(出現(xiàn)頻率5%)。對(duì)以上多態(tài)性位點(diǎn)分布頻率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn),肝癌組9545 A/G的SNP分布頻率與對(duì)照組相比有臨界性差異(χ2=5.455,P=0.052)。以上結(jié)果說明,該位點(diǎn)的SNP分布頻率在肝癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)中具有潛在意義。3對(duì)9545A/G所屬基因片段的病例數(shù)進(jìn)一步擴(kuò)大(130例),發(fā)現(xiàn)該點(diǎn)的SNP在病例組和對(duì)照組間的分布頻率有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(χ2=5.559,P=0.026)。4進(jìn)一步將9545A/G位點(diǎn)SNP分布和肝癌患者的臨床特征進(jìn)行比較分析,結(jié)果顯示,9545A/G位點(diǎn)SNP與肝癌患者臨床特征,包括性別、年齡、腫瘤長徑、腫瘤數(shù)目、Child分期、臨床分期及門脈瘤栓等均無關(guān)(P0.05)。結(jié)論:1 mtDNA編碼區(qū)COX基因上的9545A/G位點(diǎn)SNP與肝癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān),該位點(diǎn)SNP可能增加了肝癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。2 COX基因的9545A/G多態(tài)性改變與肝癌患者臨床特征沒有相關(guān)性,提示COX區(qū)9545A/G多態(tài)性變異可能是肝癌發(fā)生過程中的一個(gè)早期事件。
【關(guān)鍵詞】：肝癌 mtDNA COX SNPs 發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.7
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 英文縮寫10-11
• 前言11-13
• 材料與方法13-19
• 結(jié)果19-21
• 附圖21-22
• 附表22-25
• 討論25-29
• 結(jié)論29-30
• 參考文獻(xiàn)30-33
• 綜述 環(huán)氧合酶與原發(fā)性肝癌關(guān)系研究進(jìn)展33-47
• 參考文獻(xiàn)40-47
• 致謝47-48
• 個(gè)人簡歷48

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 Melchiorre Cervello;Daniela Foderà;Ada Maria Florena;Maurizio Soresi;Claudio Tripodo;Natale D'Alessandro;Giuseppe Montalto;;Correlation between expression of cyclooxygenase-2 and the presence of inflammatory cells in human primary hepatocellular carcinoma: Possible role in tumor promotion and angiogenesis[J];World Journal of Gastroenterology;2005年30期

2 Terence C.Tang;Ronnie T.Poon;Cecilia P.Lau;Sheung Tat Fan;;Tumor cyclooxygenase-2 levels correlate with tumor invasiveness in human hepatocellular carcinoma[J];World Journal of Gastroenterology;2005年13期

3 ;Specific COX-2 inhibitor NS398 induces apoptosis in human liver cancer cell line HepG2 through BCL-2[J];World Journal of Gastroenterology;2005年02期

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本文編號(hào)：674077