本文關鍵詞：線粒體COX基因單核苷酸多態(tài)性與肝癌發(fā)病風險的相關性研究

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【摘要】：目的:原發(fā)性肝癌(Hepatocellular Carcinoma,HCC)是一種常見的惡性腫瘤,目前在中國致死性腫瘤中肝癌已躍據第二位,給人民身體素質提升和國民經濟發(fā)展造成了嚴重威脅。近年來,越來越多的研究發(fā)現線粒體DNA(mitochondria DNA,mtDNA)突變及單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphisms,SNP)與腫瘤的發(fā)生相關。但研究范圍多局限于mtDNA非編碼區(qū),少有涉及mtDNA的編碼區(qū)域。COX片段是位于mtDNA編碼區(qū)的基因,主要負責編碼細胞色素氧化酶(cytochrome oxidase,COX)其中的三個亞基,由于細胞色素氧化酶在線粒體氧化磷酸化過程以及致癌機制中的關鍵地位,其對應基因區(qū)域的突變和多態(tài)性也可能與腫瘤發(fā)生存在內在聯系。SNP是基因組DNA序列中單個核苷酸變異引起的多態(tài)性,被廣泛應用于多基因疾病的易感基因研究領域。本研究通過對整段COX基因進行DNA擴增、測序,并結合病例-對照統(tǒng)計學方法,找出與肝細胞癌發(fā)病風險相關的SNP位點,并分析這些位點SNP與患者臨床特征的關系,從而進一步揭示COX基因SNP與肝癌發(fā)生發(fā)展之間的關系,這將對肝癌易患人群的早期篩查和防治工作帶來深遠影響。方法:1研究對象及標本采集:其中病例組130例肝細胞癌患者均為2007年9月~2008年3月期間于河北醫(yī)科大學附屬第四醫(yī)院肝膽外科住院的病人,術前均經免疫學檢查及影像學方法臨床診斷為原發(fā)性肝癌,且術后病理并已被證實為肝細胞癌。健康對照組為2008年10月~2009年4月期間河北醫(yī)科大學附屬第四醫(yī)院采集的正常人抗凝靜脈血標本。2基因組DNA的提取:分離提取肝癌冰凍組織及對照組血樣的基因組DNA(DNA純化試劑盒),提取后置于4℃恒溫冰箱中長期保存?zhèn)溆谩? PCR(polymerase chain reaction)擴增COX基因目的片段:在NCBI數據庫中查找COX基因所包含的基因片段,包含COI、COII和COIII三段,按600bps左右長度將COX基因劃分為9個小基因片段(見Table 2),遵照引物設計原則對每段小基因片段設計PCR上下游引物,后使用PCR預混試劑盒進行擴增,擴增產物經瓊脂糖凝膠電泳后,放入凝膠成像系統(tǒng)(美國Image公司)證實已擴增出DNA條帶,將擴增產物送至生物工程技術有限公司(Shanghai)進行測序。3統(tǒng)計分析:對于計量資料,當n30例時采用t檢驗(Student's t test),n≥30例采用u檢驗(u-test);采用χ2檢驗比較計數資料,并計算P值。實驗數據均采用SPSS21.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析,P0.05被認為有統(tǒng)計學意義。結果:1肝癌組與對照組臨床資料對比:年齡、性別在兩組之間無顯著性差異(P0.05)。2在肝癌組中隨機選出30例標本DNA進行擴增、測序,分析后發(fā)現6962G/A、7196C/A、7853G/A、8701A/G、8584G/A、8414C/T、9180A/G、9540T/C、9545A/G九個高頻率多態(tài)性位點(出現頻率5%)。對以上多態(tài)性位點分布頻率進行統(tǒng)計分析發(fā)現,肝癌組9545 A/G的SNP分布頻率與對照組相比有臨界性差異(χ2=5.455,P=0.052)。以上結果說明,該位點的SNP分布頻率在肝癌發(fā)病風險中具有潛在意義。3對9545A/G所屬基因片段的病例數進一步擴大(130例),發(fā)現該點的SNP在病例組和對照組間的分布頻率有統(tǒng)計學差異(χ2=5.559,P=0.026)。4進一步將9545A/G位點SNP分布和肝癌患者的臨床特征進行比較分析,結果顯示,9545A/G位點SNP與肝癌患者臨床特征,包括性別、年齡、腫瘤長徑、腫瘤數目、Child分期、臨床分期及門脈瘤栓等均無關(P0.05)。結論:1 mtDNA編碼區(qū)COX基因上的9545A/G位點SNP與肝癌發(fā)病風險相關,該位點SNP可能增加了肝癌的發(fā)病風險。2 COX基因的9545A/G多態(tài)性改變與肝癌患者臨床特征沒有相關性,提示COX區(qū)9545A/G多態(tài)性變異可能是肝癌發(fā)生過程中的一個早期事件。
【關鍵詞】：肝癌 mtDNA COX SNPs 發(fā)病風險
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 英文縮寫10-11
• 前言11-13
• 材料與方法13-19
• 結果19-21
• 附圖21-22
• 附表22-25
• 討論25-29
• 結論29-30
• 參考文獻30-33
• 綜述 環(huán)氧合酶與原發(fā)性肝癌關系研究進展33-47
• 參考文獻40-47
• 致謝47-48
• 個人簡歷48

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前4條

1 Melchiorre Cervello;Daniela Foderà;Ada Maria Florena;Maurizio Soresi;Claudio Tripodo;Natale D'Alessandro;Giuseppe Montalto;;Correlation between expression of cyclooxygenase-2 and the presence of inflammatory cells in human primary hepatocellular carcinoma: Possible role in tumor promotion and angiogenesis[J];World Journal of Gastroenterology;2005年30期

2 Terence C.Tang;Ronnie T.Poon;Cecilia P.Lau;Sheung Tat Fan;;Tumor cyclooxygenase-2 levels correlate with tumor invasiveness in human hepatocellular carcinoma[J];World Journal of Gastroenterology;2005年13期

3 ;Specific COX-2 inhibitor NS398 induces apoptosis in human liver cancer cell line HepG2 through BCL-2[J];World Journal of Gastroenterology;2005年02期

4 ;Clinical significance of mrp gene in primary hepatocellular carcinoma[J];Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International;2003年03期

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本文編號：674077