發(fā)布時(shí)間：2017-08-13 17:03

  本文關(guān)鍵詞：牛eIF5基因原核表達(dá)與蛋白純化

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【摘要】：研究應(yīng)用PCR方法擴(kuò)增牛e IF5基因編碼序列,通過Eco RⅠ和SalⅠ酶切位點(diǎn)將其定向插入p GEX-4T-1載體,構(gòu)建原核表達(dá)重組質(zhì)粒p GEX-4T-1-e IF5,并轉(zhuǎn)化大腸埃希菌BL21。酶切和測序鑒定正確后,用異丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)大量誘導(dǎo)表達(dá),利用GST-Sepharose 4B親和珠純化,SDS-PAGE和Western Blot鑒定。結(jié)果表明,原核表達(dá)載體p GEX-4T-1-e IF5構(gòu)建成功,Western Blot證實(shí)融合蛋白大量表達(dá),純化后獲得GSTe IF5融合蛋白,為深入研究牛e IF5蛋白功能奠定基礎(chǔ)。
【作者單位】： 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省高校農(nóng)業(yè)生物功能基因重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 牛 eIF 克隆 原核表達(dá) 純化
【基金】：國家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃(863)項(xiàng)目(2013AA102504-03)
【分類號(hào)】：S823;Q78
【正文快照】： Prokaryotic expression and protein purification of gene bovine e IF5/GAO Xuejun,ZANG Yanli,WEI Chengjie,LUO Chaochao(Agricultural Biological Functional GeneLaboratory of Heilongjiang Province,Northeast Agricultural University,Harbin 150030,China)真核生物

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