本文關(guān)鍵詞：家蠶C-型凝集素11基因BmCTL11的克隆及表達(dá)分析

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【摘要】：昆蟲(chóng)的C-型凝集素參與先天免疫系統(tǒng)中細(xì)胞間的相互作用,家蠶C-型凝集素11(C-type lectins,CTL11)基因BmCTL11是經(jīng)家蠶微孢子蟲(chóng)(Nb)感染誘導(dǎo)后在蠶體內(nèi)持續(xù)高量表達(dá)的基因。用生物信息學(xué)方法分析BmCTL11基因編碼有307個(gè)氨基酸的多肽,預(yù)測(cè)分子質(zhì)量34.51 kD,等電點(diǎn)4.69,含2個(gè)串聯(lián)的典型C-型凝集素糖識(shí)別結(jié)構(gòu)域,與煙草天蛾的IML-1蛋白進(jìn)化距離最近。RT-PCR檢測(cè)BmCTL11基因在家蠶幼蟲(chóng)時(shí)期的轉(zhuǎn)錄水平較高,并在多個(gè)組織有轉(zhuǎn)錄。將滅活的家蠶病原細(xì)菌、真菌、微孢子蟲(chóng)、病毒等注射家蠶5齡幼蟲(chóng)后的24 h內(nèi),qRT-PCR檢測(cè)BmCTL11基因在幼蟲(chóng)脂肪體和中腸組織內(nèi)的轉(zhuǎn)錄水平均發(fā)生上調(diào),說(shuō)明該基因能夠被多種病原微生物誘導(dǎo)。以家蠶5齡第3天幼蟲(chóng)脂肪體c DNA為模板克隆了BmCTL11基因,連接到p ET-32a載體,誘導(dǎo)表達(dá)后將純化的融合蛋白免疫昆明鼠制備出效價(jià)為1∶102 400的BmCTL11多克隆抗體。Western blot分析結(jié)果顯示,BmCTL11蛋白可能以二聚體形式主要分布于家蠶脂肪體、血漿、中腸、表皮等組織中,推測(cè)BmCTL11在家蠶識(shí)別病原微生物并介導(dǎo)引發(fā)進(jìn)一步的先天免疫反應(yīng)過(guò)程中有重要的作用。
【作者單位】： 家蠶基因組生物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室西南大學(xué);重慶師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 家蠶 C-型凝集素 基因克隆 表達(dá)譜 微生物誘導(dǎo) 多克隆抗體
【基金】：國(guó)家重大基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃“973”項(xiàng)目(No.2012CB1146-04) 國(guó)家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃“863”項(xiàng)目(No.2013AA1-02507) 西南大學(xué)基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)“創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)”項(xiàng)目(No.XDJK2015A010)
【分類號(hào)】：S881.2;Q78
【正文快照】： 昆蟲(chóng)的先天免疫無(wú)論是細(xì)胞免疫還是體液免疫,首先需要對(duì)入侵病原微生物進(jìn)行識(shí)別,在此過(guò)程中機(jī)體的免疫識(shí)別分子/受體能夠識(shí)別并結(jié)合病原表面比較保守的被稱為病原相關(guān)分子模式(PAMPs)的物質(zhì)[1]。免疫識(shí)別分子/受體是昆蟲(chóng)先天免疫系統(tǒng)中的關(guān)鍵因子,由參與先天免疫的細(xì)胞合成與

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