發(fā)布時間：2017-08-12 20:14

  本文關(guān)鍵詞：EB病毒編碼miR-BART5作用于PUMA基因抑制肺癌細胞凋亡

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【摘要】：目的探討肺癌組織中EB病毒(EBV)感染情況、EBV編碼miR-BART5在肺癌組織中表達及對肺癌細胞凋亡的影響。方法采用實時熒光定量PCR技術(shù)檢測非小細胞肺癌組織和肺良性病變組織中EBV DNA載量及EBV編碼miR-BART5的表達情況;在宣威肺腺癌細胞系中構(gòu)建PUMA基因和miR-BART5表達載體,利用熒光素酶報告系統(tǒng)驗證PUMA與miR-BART5關(guān)系。使用噻唑藍比色法(MTT)分析轉(zhuǎn)染后不同時間段細胞增殖情況。通過caspase3/7、9活性檢測研究miR-BART5、PUMA基因在肺癌細胞凋亡中的作用。結(jié)果 30例肺癌組織中EBV DNA陽性11例(36.67%),30例肺良性病變組織中均陰性。miRNA-BART5在EBV陽性肺癌組織中表達量(3.46±0.54)明顯高于EBV陰性肺癌組織(1.98±0.46)和EBV陰性肺良性病變組織(1.12±0.32),差異有統(tǒng)計學意義(P均0.05);EBV陰性肺癌組織與EBV陰性肺良性病變組織中miRNA-BART5表達差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。熒光素酶報告基因分析顯示,miR-BART5能夠作用于PUMA基因3'UTR端。MTT結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染0、24、48、72 h后,miR-BART5組吸光度(A)值分別為0.8、0.93、1.18、1.2,細胞正常增殖;無意義序列(scrambled siRNA)轉(zhuǎn)染組A值分別為0.71、0.80、0.90、0.99,生長未受到明顯抑制;miR-BART5過表達(Over-miR-BART5)載體轉(zhuǎn)染組A值為0.90、0.99、1.57、2.20,與miR-BART5組相比均增加;miR-BART5抑制表達(In-miR-BART5)載體轉(zhuǎn)染組A值為0.70、0.67、0.56、0.48,與miR-BART5組相比,在轉(zhuǎn)染24 h后出現(xiàn)明顯抑制,且隨時間的推移,抑制程度越明顯;miR-BART5過表達載體轉(zhuǎn)染組中caspase3/7、9活性(3 646±334、5 533±112)相對于miR-BART5抑制表達載體轉(zhuǎn)染組中caspase3/7、9活性(10 145±398、10 576±915)顯著降低。結(jié)論肺癌組織中EBV呈現(xiàn)較高的感染率;在EBV DNA陽性肺癌細胞中,miR-BART5可能通過抑制PUMA基因的表達進而抑制肺癌細胞凋亡。
【作者單位】： 昆明醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院檢驗科;昆明醫(yī)科大學第二附屬醫(yī)院檢驗科;昆明市盤龍區(qū)疾病預防控制中心檢驗科;
【關(guān)鍵詞】： 肺癌 PUMA基因 miR-BART 熒光素酶
【分類號】：R734.2;R730.43
【正文快照】： to miR-BART5 group after 24 hour of transfection,and the degree of inhibition was more obvious with the extension of time.The activi-ties of caspase 3/7 and caspase 9 were decreased(3 646±334 and 5 533±112)in over-expression group and increased(10 145

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