本文關(guān)鍵詞：耐除草劑轉(zhuǎn)基因大豆對根際土壤固氮微生物nifH基因多樣性的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

中國油料作物學(xué)報

ChineseJournalofOilCropSciences35（6）：703－7112013，

doi：10．7505/j．issn．1007－9084．2013．06．014

耐除草劑轉(zhuǎn)基因大豆對根際土壤固氮

微生物nifH基因多樣性的影響

1，2

王麗娟，李

11

剛，趙建寧，紅

2*1

雨，修偉明，王

11，31*

慧，章秋艷，楊殿林

（1．農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護科研監(jiān)測所，農(nóng)業(yè)部產(chǎn)地環(huán)境質(zhì)量重點實驗室/天津市農(nóng)業(yè)環(huán)境與農(nóng)產(chǎn)品安全重點實驗室，天津300191；2．內(nèi)蒙古師范大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，內(nèi)蒙古呼和浩特，010022；3．山西農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，山西太谷，030801）

ALS）及相應(yīng)非轉(zhuǎn)基因親本大豆（PAT1、ALS1）和當(dāng)?shù)卣和ㄟ^大田試驗，以兩種耐除草劑轉(zhuǎn)基因大豆（PAT、主栽大豆中黃13（CK）為材料，采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)－變性梯度凝膠電泳（PCＲ－DGGE）技術(shù)及擴增產(chǎn)物序列分析ALS與相應(yīng)探討耐除草劑轉(zhuǎn)基因大豆種植對根際土壤固氮微生物nifH基因多樣性的影響。結(jié)果表明，PAT、方法，

ALS1相比，ALS根際土壤固氮微生物親本大豆PAT1、根際土壤固氮微生物群落組成相似度均在60%左右。PAT、nifH基因多樣性指數(shù)（H）和均勻度指數(shù)（EH）與相應(yīng)親本大豆相比差異均不顯著（p＞0．05）。測序結(jié)果表明，PAT、ALS與相應(yīng)親本大豆根際土壤中固氮微生物主要隸屬于藍藻門（Cyanobacteria）、變形菌門（Proteobacteria）和厚壁菌

－

門（Firmicutes）。不同處理下nifH基因與理化因子的典范對應(yīng)分析結(jié)果表明，速效磷（AP）、硝態(tài)氮（NO3－N）對

ALS1相比，與PAT1、兩種耐除草劑轉(zhuǎn)基因大豆固氮微生物區(qū)系的影響達到顯著水平（p＜0．05）。以上結(jié)論表明，對根際土壤固氮微生物nifH基因多樣性的影響不顯著。

關(guān)鍵詞：PCＲ－DGGE；耐除草劑；轉(zhuǎn)基因大豆；nifH基因；群落多樣性中圖分類號：S562．048

文獻標(biāo)識碼：A

文章編號：1007－9084（2013）06－0703－09

Effectsofherbicidetoleranttransgenicsoybeansonthediversityofsoil

nitrogen－fixingbacterialnifHgenesinrhizosphere

2

WANGLi－juan1，，LIGang1，ZHAOJian－ning1，HONGYu2*，

3

XIUWei－ming1，WANGHui1，ZHANGQiu－yan1，，YANGDian－lin1*

（1．KeyLaboratoryofOriginalAgro－environmentQualityofMinistryofAgriculture/TianjinKeyLaboratoryofAgro－environmentandAgro－productSafety，Agro－Environmental

ProtectionInstitute，MinistryofAgriculture，Tianjin300191，China；

2．CollegeofLifeScienceandTechnology，InnerMongoliaNormalUniversity，Hohhot010022，China；

3．CollegeofLifeScience，ShanxiAgriculturalUniversity，Taigu030801，China）

Abstract：Basedonthepolymerasechainreaction－denaturinggradientgelelectrophoresis（PCＲ－DGGE）andsequenceanalysis，twoherbicidetolerantgeneticallymodifiedsoybeans（PAT，ALS）andthecorrespondingnon－transgenicsoybeans（PAT1，ALS1）andthelocalmainnon－transgenicsoybean（Zhonghuang13，CK）wereselectedtoinvestigatetheeffectsofherbicidetoleranttransgenicsoybeancultivationonnitrogen－fixingbacteriainrhizosphereunderfieldexperiment．Theresultsshowedthatthecommunitycompositionsimilarityofsoilnitrogen－fixingbacteriabetweentransgenicsoybean（PAT，ALS）andthecorrespondingnon－transgenicsoybean（PAT1，

01-11收稿日期：2013-基金項目：轉(zhuǎn)基因生物新品種培育重大專項（2011ZX08012－005）；中央級公益性科研院所基本科研業(yè)務(wù)費專項資金；農(nóng)業(yè)部產(chǎn)地環(huán)境質(zhì)量重

點實驗室/天津市農(nóng)業(yè)環(huán)境與農(nóng)產(chǎn)品安全重點實驗室開放基金項目資助

E－mail：hiimnu@163．com；Tel：作者簡介：王麗娟（1987－），女，內(nèi)蒙古包頭人，碩士研究生，主要從事轉(zhuǎn)基因植物生態(tài)環(huán)境安全研究，

18697102030

*通訊作者：紅雨（1969－），E－mail：hongyu@imnu．edu．cn；Tel：0471－女，蒙古族，博士，教授，主要從事植物生態(tài)學(xué)、保護生物學(xué)研究，

4392450；

E－mail：yangdianlin@caas．cn，Tel：022－楊殿林（1965－），男，河北香河人，博士，研究員，主要從事生物多樣性與生態(tài)安全研究，

23611820

ALS1）wasapproximately60%．Comparedtothecorrespondingnon－transgenicsoybeans（PAT1，ALS1），thediversityindex（H）andevennessindex（EH）ofnitrogen－fixingbacterialnifHgenesinrhizoshpereofherbicidetolerantgeneticallymodifiedsoybeans（PAT，ALS）bothshowednosignificantdifference（p＞0．05）．Thesequen-cingandphylogeneticanalysisindicatedthatnitrogen－fixingbacterialnifHgenesinrhizoshpereofherbicidetoler-antgeneticallymodifiedsoybeans（PAT，ALS）andthecorrespondingnon－transgenicsoybeans（PAT1，ALS1）mainlybelongedtocyanobacteria，ProteobacteriaandFirmicutes．Nitrogen－fixingmicrobialcommunitiesweresig-nificantly（p＜0．05）influencedbythelevelsoftheavailablephosphorus（AP）andnitratenitrogen（NO3－－N）whencanonicalcorrespondenceanalysiswasusedtoidentifyrelationshipbetweennifHgeneandsoilphysicochemi-calfactors．Thisresultindicatedthatherbicidetolerantgeneticallymodifiedsoybeanshadnosignificanteffectsonthediversityofsoilnitrogen－fixingbacterialnifHgenesinrhizosphere．

Keywords：PCＲ－DGGE；Herbicidetolerance；Transgenicsoybean；nifHgene；Communitydiversity根據(jù)國際農(nóng)業(yè)生物技術(shù)應(yīng)用服務(wù)組織（ISAAA）

2011年全球轉(zhuǎn)基因作物種植面積達1．6億公報道，頃，較2010年增長8%，在轉(zhuǎn)基因作物商業(yè)化種植

［1］的16年間，轉(zhuǎn)基因作物種植面積增長了近94倍。自1994年美國孟山都公司第一代耐草甘磷轉(zhuǎn)基因

在ＲoundupＲeady（ＲＲ）系列抗草甘膦除草劑的作物田中，由于大量使用草甘膦，有可能引起土壤微生

［13］

物群落和植物健康狀況的改變。因此，原有耐草甘膦轉(zhuǎn)基因大豆GTS40－3－2已停止生產(chǎn)和使用，

ALS）。市場推出了新型耐除草劑轉(zhuǎn)基因大豆（PAT、

轉(zhuǎn)基因大豆種植面積大豆被批準(zhǔn)商業(yè)化生產(chǎn)以來，

2011年轉(zhuǎn)基因大豆達到7540萬公頃，逐年增加，占為種植面積最大全球轉(zhuǎn)基因作物種植面積的47%，

的轉(zhuǎn)基因作物。在轉(zhuǎn)基因作物生產(chǎn)實踐不斷發(fā)展和完善的同時，其安全性問題也越來越引起人們的重視。在植物生長過程中，土壤微生物的生長、繁殖和種群動態(tài)變化與植物根部分泌物和腐殖質(zhì)釋放的各

［2］

轉(zhuǎn)基因植物所攜帶種代謝產(chǎn)物和組分密切相關(guān)，

的耐除草劑、殺蟲等外源基因的表達產(chǎn)物進入土壤

是否對土壤微生物產(chǎn)生影響，對科學(xué)評價轉(zhuǎn)基因植物潛在的生態(tài)風(fēng)險具有重要意義

［3，4］

因此，本試驗以兩種新型耐除草劑轉(zhuǎn)基因大豆

（PAT、ALS）及相應(yīng)非轉(zhuǎn)基因親本大豆（PAT1、ALS1）和當(dāng)?shù)刂髟源蠖怪悬S13為研究對象，采用PCＲ－DGGE技術(shù)及擴增產(chǎn)物序列分析方法研究轉(zhuǎn)基因大豆種植對根際土壤固氮微生物nifH基因多樣性和群落結(jié)構(gòu)的影響，為耐除草劑轉(zhuǎn)基因大豆生物安全性評價提供理論支撐。

1

1．1

材料與方法

試驗地概況

研究地點位于山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院植物保護

。

氮素是農(nóng)作物生長的必需元素，生物固氮在農(nóng)

田生態(tài)系統(tǒng)中具有十分重要的作用。固氮微生物是土壤生態(tài)系統(tǒng)生物固氮的主要執(zhí)行者，其與大豆形成的共生固氮關(guān)系可為農(nóng)作物提供所需的氮營［5］

養(yǎng)。固氮微生物群落結(jié)構(gòu)組成對土壤氮素固定及維持氮素循環(huán)平衡具有重要意義

［6］

研究所試驗基地（36°42'59．32″N；117°05'06．41″E），屬暖溫帶大陸性季風(fēng)氣候。年平均降雨量650～700mm，年平均氣溫14℃，平均有效積溫4500℃。供試土壤為褐土，長期種植作物為普通大豆。

1．2試驗材料

轉(zhuǎn)基因大豆PAT及其親本PAT1，轉(zhuǎn)基因大豆ALS及其親本ALS1，當(dāng)?shù)刂髟源蠖怪悬S13，均由山東省農(nóng)科院植保所提供。其中，轉(zhuǎn)基因大豆PAT是將Pat基因?qū)氲匠Ｒ?guī)大豆PAT1后獲得的具有耐草銨膦銨鹽除草劑特性的轉(zhuǎn)基因材料；轉(zhuǎn)基因大豆ALS是將gm－h(huán)ra基因?qū)氲匠Ｒ?guī)大豆ALS1后獲得具有耐乙酰乳酸合成酶（ALS）抑制劑除草劑特性的轉(zhuǎn)基因材料。中黃13為當(dāng)?shù)胤N植的一種普通非轉(zhuǎn)基因大豆。

1．3試驗設(shè)計與土壤樣品采集

試驗采用隨機區(qū)組設(shè)計，每種大豆各3次重復(fù)，小區(qū)面積3m×20m。大豆于2011年5月23日種

�，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)

所有固氮微生物中均含有編碼鐵蛋白的nifH基因，nifH基因的系統(tǒng)發(fā)育樹與16SrＲNA具有高度的一致性

［7］

。基于nifH基因的分子生物學(xué)分析為固氮

微生物群落結(jié)構(gòu)及多樣性的探索提供了一種比傳統(tǒng)培養(yǎng)更為靈敏和準(zhǔn)確的分析方法。變性梯度凝膠電泳（denaturinggradientgelelectrophoresis，DGGE）則是一種被廣泛使用的微生物群落多樣性和組成分析

［8，9］

。國內(nèi)外對于轉(zhuǎn)基因大的分子生物學(xué)技術(shù)手段

［10～12］

。豆影響的研究多集中在耐草甘膦轉(zhuǎn)基因大豆

但根據(jù)加拿大貿(mào)易與持續(xù)發(fā)展國際中心（IC－TSD）

的一份有關(guān)遺傳修飾作物（GMC）的調(diào)查報告顯示，

植，按行距20cm均勻撒播，大豆生長過程中不施用農(nóng)藥和化肥，其它按常規(guī)管理。2011年9月7日于大豆盛花期采集根際土壤樣品，采集時選擇長勢一

每小區(qū)隨機選取10株大豆。采用“抖落致的植株，

收集根際土，即將大豆植株連同根系從土壤法”

中挖出，將附著在根系的土壤抖落到塑料自封袋中。將10株大豆根際土壤混合均勻作為1個土壤樣品。土壤樣品置于低溫冰盒中帶回實驗室，一部分－70℃保存用于土壤固氮微生物nifH基因多樣性分析，一部分風(fēng)干用于土壤理化性質(zhì)測定。1．4

土壤理化性質(zhì)測定

土壤有機質(zhì)含量測定采用重鉻酸鉀容量法，土壤全氮測定采用凱氏定氮法，土壤硝態(tài)氮測定采用KCl浸提－紫外分光光度法，土壤銨態(tài)氮測定采用KCl浸提－靛酚藍比色法，土壤全磷測定采用硫酸－高氯酸消煮法，土壤速效磷測定采用碳酸氫鈉浸提－鉬銻抗比色法

［15］［14］

1．5

土壤固氮微生物nifH基因多樣性分析

1．5．1土壤樣品DNA的提取稱取0．50g保存于－70℃的土壤樣品，用UltraCleanDNAIsolationKit（MoBioLaboratories，SolanaBeach，CA，USA）試劑按照最大得率方法提取土壤總DNA。土壤DNA盒，

經(jīng)1．0%瓊脂糖凝膠電泳檢測樣品質(zhì)量。

1．5．2PCＲ擴增采用巢式PCＲ（nestedPCＲ）方

［16］

法擴增固氮微生物nifH基因序列，引物及反應(yīng)條件見表1。第一輪PCＲ反應(yīng)：25pmol每種引物，1．25U的ExTaq聚合酶（TaKaＲa），5μL10×Ex

400μmol·L－1dNTP（每種TaqBuffer（withMgCl2），

10μmol·L－1），100ng的模板DNA，終體積為50μL；1．25U的Ex第二輪PCＲ反應(yīng)：25pmol每種引物，

Taq聚合酶（TaKaＲa），5μL10×ExTaqBuffer（with400μmol·L－1dNTP（每種10μmol·L－1），MgCl2），

以3μL第一輪PCＲ產(chǎn)物作為模板，終體積為50μL。

。

表1聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)中的引物及反應(yīng)條件

Table1PrimersandPCＲconditions

引物序列5'－3'反應(yīng)條件產(chǎn)物大小PrimersＲeactionconditionProductsize/bpSequences5'－3'

［17］

TACGGCAAＲGGTGGNATHG94℃5min；94℃1min，55℃1min，F(xiàn)GPH19

450第一輪反應(yīng)Step1

ATSGCCATCATYTCＲCCGGA72℃1min，35個循環(huán)；72℃5minPolＲ

PolF－GC*TGCGAYCCSAAＲGCBGACTC95℃5min；94℃30sec，，48℃30sec，

320第二輪反應(yīng)Step2

AQEＲGACGATGTAGATYTCCTG72℃30sec，35個循環(huán)；72℃5min

注：Note：Ｒ=A/G；N=A/G/C/T；H=T/C/A；Y=C/T；S=G/C．*GC夾子：CGCCCGCCGCGCCCCGCGCCCGGCCCGCCGCCCCCGCCCC

巢式PCＲNestedPCＲ

1．5．3變性梯度凝膠電泳采用Dcode通用突變

TM

典型菌株序列。用Mega5．0中的鄰接法（Neighbor－Joining）建立固氮微生物nifH基因的系統(tǒng)發(fā)育樹。1．7

數(shù)據(jù)分析

USA）對采用QuantityOne軟件（Bio－Ｒad，DGGE圖譜進行數(shù)字化處理。采用UPGMA法對DGGE圖譜各樣品的相似性進行聚類分析，并采用Shannon－Wiener指數(shù)（H）和均勻度（EH）來評價土壤固氮微生物nifH基因多樣性。多樣性指數(shù)和均勻度指數(shù)的計算公式如下：

H=－∑PilnPiEH=H/lnS

EH為均勻度指式中：H為Shannon－Wiener指數(shù)，

S為DGGE膠中條帶數(shù)目，Pi為第i條帶灰度占數(shù)，

該樣品總灰度的比率。

采用SPSS16．0進行方差分析（ANOVA）、相關(guān)分析（CorrelationAnalysis），采用Canoco4．5軟件包對環(huán)境因子與固氮細菌群落結(jié)構(gòu)進行典范對應(yīng)分析（CanonicalCorrespondenceAnalysis，CCA）。

檢測系統(tǒng)（Bio－Ｒad，USA）進行DGGE分析。聚丙變性梯度為40%烯酰胺凝膠（37．5∶1）濃度為8%，

～60%，100%變性劑濃度為7mol/L尿素，40%（V/V）去離子甲酰胺。將20μLPCＲ產(chǎn)物和10μL6×loadingbuffer混勻后用微量進樣器加入膠孔中。60℃、100V條件下電泳15h。電泳結(jié)束后用SYBＲTMGreen（1∶10000稀釋）染色25min，然后于GelDoxXＲ凝膠成像系統(tǒng)（Bio－Ｒad，USA）進行觀察與拍照。1．6

序列測定及比對分析

采用QuantityOne凝膠成像圖像處理軟件（Bio－Ｒad，USA）將DGGE圖譜中條帶的遷移位置進行根據(jù)其遷移率，在紫外燈下切取差異條數(shù)字化處理，

帶。用不含GC夾的PolF和AQEＲ引物擴增。PCＲ產(chǎn)物純化后與pGEMT－easyVector（Promega）連接，轉(zhuǎn)化到感受態(tài)E．coliJM109中，挑取白色菌落。用菌落PCＲ方法檢測陽性克隆

［18］

。陽性克隆送生工

生物工程（上海）股份有限公司進行測序，將測序結(jié)獲取相近果與GenBank數(shù)據(jù)庫進行序列比對分析，

2

2．1

結(jié)果與分析

耐除草劑轉(zhuǎn)基因大豆對根際土壤固氮微生物多樣性的影響DGGE圖譜分析

由圖1可見（每種大豆各

不間多數(shù)為共性條帶。UPGMA聚類分析結(jié)果表明，同耐除草劑轉(zhuǎn)基因大豆分別分成兩個簇，耐除草劑相似度轉(zhuǎn)基因大豆PAT與其親本PAT1聚到一起，為61%；耐除草劑轉(zhuǎn)基因大豆ALS與其親本ALS1聚到一起，相似度為59%。當(dāng)?shù)卮蠖怪悬S13與耐除草劑轉(zhuǎn)基因大豆ALS聚成一簇，相似度為43%。以上結(jié)果表明，不同耐除草劑轉(zhuǎn)基因大豆（PAT、ALS）根際土壤固氮微生物群落結(jié)構(gòu)不同，耐除草劑ALS）與相應(yīng)親本（PAT1、ALS1）轉(zhuǎn)基因大豆（PAT、

相比根際土壤固氮微生物群落結(jié)構(gòu)無明顯差異。

2．1．1

3次重復(fù)），各處理在低變性區(qū)表現(xiàn)出較好的相似性，高變性區(qū)有部分差異條帶，但亮度較小。不同耐ALS）根際土壤固氮微生除草劑轉(zhuǎn)基因大豆（PAT、

條帶位置和亮物nifH基因的DGGE圖譜的條帶數(shù)、

度存在差異，但耐除草劑轉(zhuǎn)基因大豆與相應(yīng)親本之

1－3代表CK，4－6代表PAT，7－9代表PAT1，10－12代表ALS，13－15代表ALS1注：每種處理各3次重復(fù)，

1－3：CK，4－6：PAT，7－9：PAT1，10－12：ALS，13－15：ALS1Note：Eachtreatmenthad3repeats，

Fig．1

圖1土壤固氮微生物nifH基因PCＲ－DGGE電泳圖譜（A）和聚類分析（B）

nifH/PCＲ－DGGEfingerprinting（A）andclusteranalysis（UPGMA）（B）ofsoilnitrogen－fixingmicroorganisms

根據(jù)DGGE圖譜中每條條帶的亮度，對不同耐除草劑轉(zhuǎn)基因大豆根際土壤固氮微生物nifH基因Shannon－Wiener指數(shù)（H）和均勻度（EH）進行分析。從表2可見，根際土壤固氮微生物nifH基因多樣性指數(shù)在1．05～1．45之間，均勻度在0．50左右，耐除草劑ALS）之間及轉(zhuǎn)基因大豆與相應(yīng)親轉(zhuǎn)基因大豆（PAT、

ALS1）之間均無顯著差異（p＞0．05）。本（PAT1、

表2

不同處理土壤固氮菌DGGE圖譜條帶數(shù)、

多樣性指數(shù)和均勻度指數(shù)

Table2NumberofDGGEbands，diversityindexandhomogeneousdegreesindexof

soilnitrogen－fixationbacteria

Shannon－Wiener均勻度指數(shù)條帶數(shù)

BandnumberEH指數(shù)H

814121211

1．05±0．11b1．43±0．05a1．29±0．01ab1．40±0．04a1．25±0．04ab

0．50±0．05a0．54±0．02a0．52±0．01a0．56±0．01a0．52±0．02a

2．1．2構(gòu)建

土壤固氮微生物nifH基因分析與系統(tǒng)發(fā)育

根據(jù)不同耐除草劑轉(zhuǎn)基因大豆根際土壤固氮

微生物nifH基因DGGE圖譜結(jié)果，選取主要條帶割膠，共回收18條差異條帶，對DGGE圖譜切取的條帶進行克隆測序，在NCBI中對序列進行比對分析。結(jié)果表明獲得的條帶序列隸屬于3個門的10個屬（表3），分別為藍藻門（Cyanobacteria）的魚腥藻屬（Anabaena）和鞘絲藻屬（Lyngbya）；變形菌門（Pro-teobacteria）α－變形菌綱（Alphaproteobacteria）的土壤桿菌屬（Agrobacterium）、慢生根瘤菌屬（Bradyrhi-zobium）、甲基孢囊菌屬（Methylocystis），β－變形菌綱（Betaproteobacteria）的伯克氏菌目（Burkholderia-les），γ－變形菌綱（Gammaproteobacteria）的假單胞Azotobacter；厚壁菌門（Fir-菌目（Pseudomonadales）、

micutes）芽孢桿菌目（Bacillales）、Paenibacillaceae、Paenibacillus、梭菌屬（Clostridium）。將獲得的基因序列與GenBank其他相似序列進行系統(tǒng)發(fā)育分析并繪制系統(tǒng)發(fā)育圖（圖2）。

品種VarietiesCKPATPAT1ALSALS1

注：同列不同字母表示差異顯著（p＜0．05）．n=3

Note：Differentletterswithinthesamelineindicatesignificantdiffer-enceatp＜0．05．n=3

Table3

表3DGGE條帶比對結(jié)果及分布

ＲesultsofBLASTanalysisonthesequencesofthe18nifH/DGGEexcisedandsequencedbandsanddistribution

相似度Similarity/%

939199777691918088908283808092979292

CK√√√√√√√√

PAT√√√√√√√√√√

PAT1√√√√√√√√√√√

√√√√

√√√√

ALS√√√√√

ALS1√√√√√√

GenBank登錄號及比對菌描述

GenBankaccessionNo．a(chǎn)ndDiscriptionofclosestrelatives

DQ294218．1AnabaenaazoticaEF634054．1Azotobacterchroococcum

EU693339．1Bacillussp．HQ335457UnculturedbacteriumCP003065．1ClostridiumclariflavumEF158805．1BurkholderiaxenovoransAB188122．1AzohydromonaslataCP002582．1ClostridiumlentocellumAF378719．1Methylocystissp．AB184931．1UnculturedbacteriumDQ776377．1UnculturedsoilbacteriumAF216932Unidentifiednitrogen－fixingbacteria

AF216932Bradyrhizobiumgenosp．HQ259566Bradyrhizobiumsp．DQ294216．1Anabaenasp．EF397815．1LyngbyawolleiCP000117．1AnabaenavariabilisU89346．1Anabaenavariabilis

條帶編號BandNo．

123456789101112131415161718

√

圖2

不同轉(zhuǎn)基因大豆根際土壤nifH基因序列系統(tǒng)發(fā)育樹（Neighbor－joining）Fig．2Neighbour－joiningtreedepictingthephylogeneticrelationships

amongnifHsequencesinrhizosphereoftransgenicsoybeans

耐除草劑轉(zhuǎn)基因大豆ALS及其親本ALS1的根際土壤中固氮微生物群落組成十分相似，在藍藻門（Cyanobacteria）、變形菌門（Proteobacteria）和厚壁菌

門（Firmicutes）均有分布。其中藍藻門（Cyanobacte-

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