本文關鍵詞：湖羊多胎性狀候選基因BMPR-IB多態(tài)性研究及檢測技術優(yōu)化

  更多相關文章： BMPR-IB基因 湖羊 多胎 拷貝數(shù)變異 熒光定量PCR

【摘要】：湖羊是世界著名的多胎綿羊品種。已有研究表明BMPR-IB基因與綿羊的排卵數(shù)和高繁殖力有密切關系。FecB基因是由6號染色體上的BMPR-IB基因編碼區(qū)發(fā)生單核苷酸突變(A746G)形成的。為探究湖羊多胎的內在原因,本研究使用PCR-RFLP技術與實時熒光定量PCR的方法分別研究了繁殖力較低湖羊(單羔組)和繁殖力較高湖羊(多羔組)的單核苷酸多態(tài)性與拷貝數(shù)變異情況。本研究深入探討了BMPR-IB基因突變與湖羊多胎性狀之間聯(lián)系,為揭示湖羊高繁多胎機理提供了參考。本研究主要著力于探究BMPR-IB基因與湖羊多胎性狀的關聯(lián)并優(yōu)化已有的FecB基因檢測技術用于推廣。研究結果如下:1.采集51只經產湖羊的血樣,使用酚-氯仿法提取基因組DNA。再以BMPR-IB基因為研究對象,使用PCR-RFLP法進行單核苷酸多態(tài)性(SNP)分析,并結合生產記錄,研究湖羊多胎與BMPR-IB突變的關聯(lián)。研究發(fā)現(xiàn),湖羊為Fec B(BMPR-IB突變)基因高度純合的群體,試驗群體中Fec B基因頻率為90%,未發(fā)現(xiàn)野生型個體,高產湖羊(39頭)均為FecB基因純合個體。研究表明該基因突變可用于湖羊高產個體的早期選擇。2.使用熒光定量PCR的方法分析BMPR-IB基因的拷貝數(shù)變異情況,并結合生產記錄,研究湖羊多胎與BMPR-IB基因拷貝數(shù)變異的聯(lián)系。研究發(fā)現(xiàn),BMPR-IB基因在不同湖羊個體間存在拷貝數(shù)變異,卻未發(fā)現(xiàn)其與湖羊產羔性狀之間的顯著關聯(lián)。但產羔平均數(shù)大于3的湖羊群體中,FecB基因相對拷貝數(shù)均大于0.75。3.采集38只經產湖羊的血樣與羊毛樣品,使用酚-氯仿法提取基因組DNA,使用蛋白酶K制備羊毛毛囊DNA消化液,同上分別進行SNP檢測并對比羊毛與羊血的檢測結果。經優(yōu)化后,采用羊毛毛囊制備的消化液可以快速簡便地進行基因分型,便于推廣。綜上,本研究發(fā)現(xiàn)FecB基因純合可作為湖羊多胎的分子標記。由于采集綿羊的血樣過程繁瑣,不易運輸,導致該技術難以在養(yǎng)羊生產實踐中推廣應用。本研究發(fā)現(xiàn)可使用毛囊樣品替代血樣進行FecB基因檢測,樣品運輸便利,因而本研究成果在生產實踐中容易推廣應用。
【關鍵詞】：BMPR-IB基因 湖羊 多胎 拷貝數(shù)變異 熒光定量PCR
【學位授予單位】：西北農林科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S826
【目錄】：

• 摘要6-7
• abstract7-11
• 文獻綜述11-19
• 第一章 綿羊多胎及BMPR-IB基因研究進展11-19
• 1.1 綿羊多胎性狀研究綜述11-14
• 1.1.1 綿羊多胎現(xiàn)象11-12
• 1.1.2 綿羊多胎研究進展12-13
• 1.1.3 湖羊—我國特有的高繁殖力綿羊品種13
• 1.1.4 湖羊與多胎基因13-14
• 1.2.BMPR-IB基因研究綜述14-18
• 1.2.1 BMP/Smad信號通路14-15
• 1.2.2 BMPR-IB基因的研究進展15-16
• 1.2.3 拷貝數(shù)變異與綿羊多胎16-18
• 1.3 試驗目的及研究意義18-19
• 試驗研究19-39
• 第二章 BMPR-IB基因的單核苷酸突變與湖羊多胎性狀的關聯(lián)分析19-26
• 2.1 材料與方法19-21
• 2.1.1 試驗材料19
• 2.1.2 試驗儀器19-20
• 2.1.3 試驗方法20-21
• 2.2.結果分析21-24
• 2.2.1 目的片段擴增結果21-22
• 2.2.2 PCR產物酶切結果22
• 2.2.3 基因頻率和基因型頻率22-23
• 2.2.4 基因型與湖羊產羔性狀的關聯(lián)分析23
• 2.2.5 不同繁殖力湖羊與其基因型的關聯(lián)23-24
• 2.3 討論24-25
• 2.3.1 湖羊為FecB基因高度純合的綿羊品種24
• 2.3.2 FecB基因是湖羊具有多胎性能的基礎24-25
• 2.4 小結25-26
• 第三章 BMPR-IB基因的拷貝數(shù)變異與湖羊多胎性狀的關聯(lián)分析26-34
• 3.1 材料與方法26-29
• 3.1.1 試驗材料26
• 3.1.2 試驗方法26-29
• 3.2 結果分析29-33
• 3.2.1 標準曲線29-30
• 3.2.2 拷貝數(shù)檢測結果30-31
• 3.2.3 BMPR-IB基因拷貝數(shù)變異分布31
• 3.2.4 不同繁殖力湖羊之間BMPR-IB基因拷貝數(shù)變異情況31-32
• 3.2.5 FecB基因拷貝數(shù)與產羔性狀的關聯(lián)32-33
• 3.3 討論33
• 3.4 小結33-34
• 第四章 FecB基因檢測技術的優(yōu)化34-39
• 4.1 材料與方法34-36
• 4.1.1 試驗材料34
• 4.1.2 試驗方法34-36
• 4.2 結果分析36-38
• 4.2.1 FecB基因基因型檢測結果36-37
• 4.2.2 毛囊消化液為模板進行PCR反應的結果37
• 4.2.3 羊毛毛囊RFLP分析結果37-38
• 4.3 討論38
• 4.4 小結38-39
• 結論與創(chuàng)新點39-40
• 參考文獻40-44
• 附錄44-49
• 致謝49-50
• 作者簡介50

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本文編號：635211