發(fā)布時(shí)間：2017-08-06 06:14

  本文關(guān)鍵詞：心肌肌球特定基因-肌球蛋白輕鏈基因可在人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化為心肌樣細(xì)胞表達(dá)

  更多相關(guān)文章： 人臍帶膠樣組織間充質(zhì)干細(xì)胞 心肌樣細(xì)胞 肌球蛋白輕鏈 熒光素酶 綠色熒光蛋白

【摘要】：目的:探討人心肌肌球蛋白輕鏈(2v)基因啟動(dòng)子(p MLC2v)驅(qū)動(dòng)的綠色熒光蛋白(GFP)和熒光素酶(Luc)報(bào)告基因慢病毒載體在人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(h UCMSC)向心肌樣細(xì)胞分化中的表達(dá)。方法:酶消化法原代分離培養(yǎng)h UCMSC,采用流式細(xì)胞儀鑒定分析其細(xì)胞表面標(biāo)記物及檢測體外向成骨細(xì)胞、成脂細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞誘導(dǎo)分化潛能;經(jīng)5-氮雜胞苷(5-Aza)誘導(dǎo)h UCMSC定向分化成心肌樣細(xì)胞;誘導(dǎo)細(xì)胞并同時(shí)轉(zhuǎn)染p MLC2v-GFP,于d3,d7,d10,d14,d17及d21時(shí)間點(diǎn)在熒光顯微鏡下觀察及流式細(xì)胞儀檢測其陽性率;用生物發(fā)光檢測儀檢測相同時(shí)間點(diǎn)的螢光素酶(p MLC2v-Luc)報(bào)告基因慢病毒載體轉(zhuǎn)染分化細(xì)胞發(fā)光特征;在激光共聚焦顯微鏡下觀察p MLC2v-GFP及紅色熒光蛋白(RFP)共轉(zhuǎn)染誘導(dǎo)21d后分化細(xì)胞蛋白的表達(dá)分布狀況;與鼠心肌細(xì)胞作為對(duì)照,脈沖電流激發(fā)細(xì)胞收縮和細(xì)胞內(nèi)及細(xì)胞間的鈣離子流,以檢測誘導(dǎo)分化細(xì)胞"興奮-收縮"偶聯(lián)功能;Western blot法檢測誘導(dǎo)分化細(xì)胞p MLC2v蛋白的表達(dá)。結(jié)果:原代培養(yǎng)的P3 h UCMSC,經(jīng)FCM檢測CD90、CD105及CD73陽性率均為99%以上為高表達(dá);獲得的細(xì)胞分別經(jīng)體外誘導(dǎo)能夠向成骨細(xì)胞、成脂細(xì)胞、成內(nèi)皮細(xì)胞分化;經(jīng)5-氮雜胞苷(5-Aza)誘導(dǎo)h UCMSC同時(shí)并轉(zhuǎn)染p MLC2v GFP,在熒光顯微鏡下觀察并用流式儀檢測GFP表達(dá)陽性細(xì)胞數(shù)隨誘導(dǎo)時(shí)間的延長而增加(P0.05);生物發(fā)光檢測儀檢測誘導(dǎo)細(xì)胞p MLC2v-Luc表達(dá)同樣呈陽性遞增;p MLC2v GFP及RFPC共轉(zhuǎn)染誘導(dǎo)21d后分化的細(xì)胞,細(xì)胞漿內(nèi)形成較清晰的與細(xì)胞長軸平行的肌束樣結(jié)構(gòu);誘導(dǎo)后的細(xì)胞用共聚焦顯微鏡檢測無細(xì)胞內(nèi)及細(xì)胞間的鈣離子流動(dòng);隨誘導(dǎo)時(shí)間的延長p MLC2v蛋白表達(dá)明顯增加(P0.05)。結(jié)論:在h UCMSC體外誘導(dǎo)形成心肌樣細(xì)胞過程中,p MLC2v基因隨誘導(dǎo)時(shí)間的延長而表達(dá)增加,為監(jiān)測干細(xì)胞的移植在心肌疾病治療中提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
【作者單位】： 首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京安貞醫(yī)院-北京市心肺血管疾病研究所細(xì)胞與分子生物學(xué)研究室;首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京安貞醫(yī)院-北京市心肺血管疾病研究所實(shí)驗(yàn)中心;中國人民解放軍96669部隊(duì);首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京安貞醫(yī)院-北京市心肺血管疾病研究所心內(nèi)科;
【關(guān)鍵詞】： 人臍帶膠樣組織間充質(zhì)干細(xì)胞 心肌樣細(xì)胞 肌球蛋白輕鏈 熒光素酶 綠色熒光蛋白
【基金】：國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(81070077;81370228) 省部共建重點(diǎn)教育部心血管重塑相關(guān)疾病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(110267) 北京市衛(wèi)生系統(tǒng)高層次衛(wèi)生技術(shù)人才培養(yǎng)資助項(xiàng)目(2014-3-045)
【分類號(hào)】：R542.2
【正文快照】： 作者單位:100029首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京安貞醫(yī)院-北京市心肺血管疾病研究所細(xì)胞與分子生物學(xué)研究室(辛毅李娜許秀芳黃益民張穎),實(shí)驗(yàn)中心(崔巍劉颯),心內(nèi)科(周玉杰);中國人民解放軍96669部隊(duì)(王超)目前心肌病是兒童期嚴(yán)重的疾病,患者常伴有持久的心肌細(xì)胞損傷和心力衰竭,目前尚

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：628683