本文關(guān)鍵詞：適于轉(zhuǎn)基因水稻RJ5檢測的質(zhì)粒DNA標準物質(zhì)的研制

  更多相關(guān)文章： 轉(zhuǎn)基因水稻 質(zhì)粒標準分子 熒光定量PCR 數(shù)字PCR 量值測定

【摘要】：標準物質(zhì)對于實時熒光定量PCR進行轉(zhuǎn)基因作物及其產(chǎn)品的定量分析尤為重要,但我國轉(zhuǎn)基因生物的標準物質(zhì)研制還處于初級階段,因此研制新型的標準物質(zhì)對解決轉(zhuǎn)基因標準物質(zhì)匱乏有著重要的意義。本研究針對轉(zhuǎn)基因水稻RJ5構(gòu)建了質(zhì)粒標準分子pRJ5,并對其進行定量適應(yīng)性鑒定、均勻性測試、穩(wěn)定性考察,并利用數(shù)字PCR方法測定其量值。結(jié)果表明,以質(zhì)粒分子pRJ5為標準物質(zhì)構(gòu)建的標準曲線具有良好的反應(yīng)效率和線性相關(guān)性及良好的重復(fù)性和重演性。在定量PCR體系檢測極限(LOD)低至5 copies/μL,定量極限(LOQ)約為10 copies/μL。均勻性測試的數(shù)據(jù)表明,質(zhì)粒標準分子在管間和管內(nèi)無明顯差異,具有良好的均勻性。穩(wěn)定性測試的結(jié)果表明,該質(zhì)粒標準分子至少可以穩(wěn)定地保存半年以上。數(shù)字PCR(3D-d PCR)的量值測定準確度良好。實際樣品的定量分析偏差范圍在1.31%至2.44%,相對標準偏差值在0.98%至10.05%。以上結(jié)果說明了質(zhì)粒標準分子pRJ5適合作為標準物質(zhì)對轉(zhuǎn)基因水稻RJ5進行定量檢測。
【作者單位】： 上海交通大學(xué)生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 轉(zhuǎn)基因水稻 質(zhì)粒標準分子 熒光定量PCR 數(shù)字PCR 量值測定
【基金】：轉(zhuǎn)基因生物重大專項項目(2014ZX08012-003)資助
【分類號】：Q943.2
【正文快照】： Development of Plasmid DNA Reference Material Suitable for Detection ofGenetically Modified Rice RJ5Li Zhuqing Yang Litao*Wang Canhua*School of Life Sciences and Technology,Shanghai Jiao Tong University,Shanghai,200240*Corresponding authors,yylltt@sjtu.e

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