發(fā)布時(shí)間：2017-08-05 05:24

  本文關(guān)鍵詞：沙門菌sopB基因缺失株的構(gòu)建及其對巨噬細(xì)胞炎性體活化的影響

  更多相關(guān)文章： 沙門菌 SopB 炎性體 AKT信號 抑制

【摘要】：沙門菌是一種革蘭氏陰性兼性細(xì)胞內(nèi)的細(xì)菌病原體,具有廣泛的宿主譜,在全球范圍內(nèi)感染病例中均表現(xiàn)出有較高的發(fā)病率和死亡率。沙門菌的致病性主要依賴于其侵襲細(xì)胞及在細(xì)胞內(nèi)生存的能力。而這又依賴于其兩個(gè)毒力島SPI-1及SPI-2編碼的兩個(gè)III型分泌系統(tǒng)(T3SS)。T3SS具有分泌和轉(zhuǎn)導(dǎo)多種細(xì)菌毒力因子進(jìn)入宿主細(xì)胞的功能。Sop B是SPI-1重要的分泌毒力因子,具有肌醇磷酸酶活性,在沙門菌侵入過程中可誘導(dǎo)多種磷酸肌醇的去磷酸化作用。Sop B已經(jīng)被證明在侵染過程中影響多種細(xì)胞通路,包括細(xì)胞膜褶皺形成及抑制SCV與溶酶體的融合等。目前,對于Sop B功能的研究主要關(guān)注于其在沙門菌侵染及胞內(nèi)存活過程中的作用。雖然有研究表明Sop B能夠影響多種對炎性反應(yīng)有調(diào)控作用的細(xì)胞信號通路,但Sop B是否影響炎性反應(yīng)的報(bào)道仍不多見。炎性體是天然免疫系統(tǒng)的重要組成部分。炎性體是一種多蛋白復(fù)合體,在感染或應(yīng)激條件下,促進(jìn)促炎細(xì)胞因子成熟釋放。炎性體組成包括:受體,接頭蛋白及效應(yīng)因子caspase-1。PRRs,包括NLR家族及ALR家族等都能啟動(dòng)炎性體的組裝�；罨腘LR或ALR促進(jìn)ASC的聚集,而ASC的聚集招募caspase-1進(jìn)入ASC斑點(diǎn),啟動(dòng)caspase-1的自溶性活化,從而誘導(dǎo)的IL-1β及IL-18的蛋白水解過程。作為宿主重要的防御機(jī)制,炎性體的活化受到多種因素的嚴(yán)格調(diào)控,例如:受體的自抑制及修飾作用。病原同樣可以利用毒力因子抑制炎性體功能,從而達(dá)到免疫逃逸的目的。既然,Sop B蛋白在沙門菌侵染及維持胞內(nèi)存活都具有重要的作用,其是否影響沙門菌誘導(dǎo)的炎性體活化。因此,本研究利用λRed重組系統(tǒng)對沙門菌SL1344進(jìn)行Sop B編碼基因的敲除,并以低拷貝的p STV28為表達(dá)載體分別構(gòu)建了全長sop B基因回補(bǔ)質(zhì)粒及sop B突變回補(bǔ)質(zhì)粒。隨后,將回補(bǔ)質(zhì)粒電轉(zhuǎn)至△Sop B菌株中,由此成功獲得三株重組菌株,包括△Sop B::Vect,△Sop B::Sop B及△Sop B::C460S。炎性體活化試驗(yàn)中,為了探究Sop B蛋白是否影響沙門菌誘導(dǎo)的炎性體。應(yīng)用ELISA方法檢測Sop B對沙門菌誘導(dǎo)的IL-1β進(jìn)行測定,LDH的釋放分析細(xì)胞死亡,并應(yīng)用Western blot分析caspase-1、IL-1β、AKT的活化情況及ASC寡聚化水平。免疫熒光分析ASC斑點(diǎn)形成水平等。結(jié)果顯示沙門菌毒力因子Sop B通過誘導(dǎo)AKT信號活化顯著抑制沙門菌誘導(dǎo)的炎性體活化。
【關(guān)鍵詞】：沙門菌 SopB 炎性體 AKT信號 抑制
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S852.61
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-12
• 前言12-13
• 第一篇 文獻(xiàn)綜述13-29
• 第一章 炎性體的研究進(jìn)展13-25
• 1.1 炎性體13-14
• 1.2 炎性體活化14-16
• 1.3 炎性體的信號調(diào)節(jié)16-24
• 1.4 小結(jié)24-25
• 第二章 沙門菌及毒力因子SopB25-29
• 2.1 沙門菌25-26
• 2.2 沙門菌Ⅲ型分泌系統(tǒng)及效應(yīng)因子26-27
• 2.3 毒力因子SopB27-28
• 2.4 小結(jié)28-29
• 第二篇 研究內(nèi)容29-61
• 第一章 鼠傷寒沙門菌sopB基因敲除株及回補(bǔ)株的構(gòu)建29-41
• 1.1 材料與方法29-36
• 1.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果36-40
• 1.3 討論40
• 1.4 小結(jié)40-41
• 第二章 沙門菌毒力因子SopB抑制沙門菌誘導(dǎo)的炎性體活化41-61
• 2.1 材料與方法41-54
• 2.2 結(jié)果54-58
• 2.3 討論58-60
• 2.4 小結(jié)60-61
• 結(jié)論61-62
• 參考文獻(xiàn)62-77
• 導(dǎo)師簡介77-78
• 作者簡介78-79
• 致謝79

【相似文獻(xiàn)】

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 宋佩p，

本文編號：623367