本文關(guān)鍵詞：草莓FaUVR8基因的cDNA克隆、生物信息學分析及原核表達條件優(yōu)化

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【摘要】：紫外線B(UV-B)對于植物生長發(fā)育具有重要調(diào)節(jié)作用,其中UV RESISTANCE LOCUS 8蛋白作為UV-B的光受體在植物響應UV-B過程中起關(guān)鍵作用。草莓是一種重要的經(jīng)濟果樹,目前關(guān)于草莓的UV-B光受體報道較少。為研究草莓中UV-B受體蛋白,本研究采用同源克隆的方法獲得‘豐香’草莓中編碼UV-B光受體蛋白的c DNA序列,進行了生物信息學的分析并構(gòu)建了原核生物表達載體p ET32a-UVR8,利用中心點響應面法優(yōu)化了重組蛋白的誘導條件(包括誘導溫度,IPTG濃度,菌液濃度和誘導時間)。結(jié)果表明:克隆得到了編碼草莓UVR8蛋白的全長c DNA序列,命名為Fa UVR8,生物信息學分析表明該序列長1 317 bp,編碼438個氨基酸,預測分子量為47.28 k D,等電點p I為5.85,重建蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)表明該蛋白包含7個β-片狀螺旋結(jié)構(gòu);原核表達得到69.7 k D的融合蛋白,對四個誘導條件優(yōu)化表明將工程菌培養(yǎng)至菌液OD600=0.7,加入濃度為0.55 mmol/L的IPTG,在27.72℃下誘導9 h,可獲得最大量重組蛋白79μg/m L。研究結(jié)果可為后期尋找與Fa UVR8蛋白互作的下游蛋白,以及進一步開展其功能研究提供參考。
【作者單位】： 四川農(nóng)業(yè)大學園藝學院;
【關(guān)鍵詞】： 草莓 FaUVR 生物信息學 原核表達
【基金】：全國大學生創(chuàng)新性實驗計劃(201510626005)資助
【分類號】：S668.4;Q943.2
【正文快照】： *通訊作者,htang@sicau.edu.cnCloning,Bioinformatic Analysis of Strawberry Fa UVR8 Gene and Optimiza-tion of Its Prokaryotic Expression ConditionsLiu Yongqiang Wang Xiran Ye Yuntian Lou Kefei Chen Qing Tang Haoru*College of Horticulture,Sichuan Agricultura

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本文編號：616675