本文關(guān)鍵詞：獨(dú)行菜LaMCT基因的克隆、序列分析與原核表達(dá)

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【摘要】：強(qiáng)心苷作為藥用植物獨(dú)行菜(Lepidium apetalum)的活性成分,其化學(xué)和藥理學(xué)研究已有良好的基礎(chǔ),但其生物合成途徑目前仍不清楚。該研究以獨(dú)行菜幼苗為材料,通過(guò)分析獨(dú)行菜轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù),設(shè)計(jì)特異性引物,PCR擴(kuò)增得到了強(qiáng)心苷生物合成MEP途徑的關(guān)鍵酶2-C-甲基赤蘚醇-4-磷酸胞苷酰轉(zhuǎn)移酶(MCT)基因的開(kāi)放閱讀框(ORF),命名為L(zhǎng)aMCT(Genbank注冊(cè)號(hào)KT832554),并進(jìn)行序列分析和原核表達(dá)。序列分析結(jié)果表明:LaMCT基因ORF全長(zhǎng)為912 bp,編碼304個(gè)氨基酸。亞細(xì)胞定位和保守結(jié)構(gòu)域分析結(jié)果表明:LaMCT蛋白位于葉綠體中,不含信號(hào)肽,沒(méi)有跨膜區(qū),含有類異戊二烯合成酶保守結(jié)構(gòu)域(isoprenoid synthase domain)。系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)結(jié)果表明:LaMCT蛋白與擬南芥的MCT蛋白具有94%的序列相似性,親緣關(guān)系較近。通過(guò)構(gòu)建pET-32a-LaMCT原核表達(dá)載體,成功在大腸桿菌BL21(DE3)菌株中誘導(dǎo)表達(dá)LaMCT重組蛋白,并得到了純化的LaMCT重組蛋白。該研究首次從獨(dú)行菜中克隆了LaMCT基因,建立其穩(wěn)定的原核表達(dá)體系,為L(zhǎng)aMCT蛋白抗體的制備以及研究LaMCT基因在獨(dú)行菜強(qiáng)心苷類化合物生物合成途徑中的功能奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 河南中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院;呼吸疾病診療與新藥研發(fā)河南省協(xié)同創(chuàng)新中心;
【關(guān)鍵詞】： 獨(dú)行菜 MCT 基因克隆 序列分析 原核表達(dá)
【基金】：國(guó)家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃“973”項(xiàng)目(2013CB531802) 河南中醫(yī)學(xué)院博士科研基金(BSJJ2011-07)~~
【分類號(hào)】：Q943.2;S567.2
【正文快照】： 獨(dú)行菜(Lepidium apetalum)是十字花科獨(dú)行菜4-焦磷酸胞苷-2-C-甲基赤蘚醇(4-diphosphocytidyl-屬植物,其干燥成熟種子是我國(guó)傳統(tǒng)中藥北葶藶子,2C-methylerythritol,CDP-ME),MCT是強(qiáng)心苷類化具有瀉肺平喘、利水消腫的功效(李紅偉等,2013)。合物生物合成MEP途徑的第3個(gè)關(guān)鍵酶(M

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中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

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本文編號(hào)：581819