本文關(guān)鍵詞：牛MYOZ1基因啟動子活性分析

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【摘要】：【目的】鑒定牛MYOZ1基因轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn),確定牛MYOZ1基因核心啟動子區(qū)域,為進(jìn)一步研究牛MYOZ1基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制奠定基礎(chǔ)�！痉椒ā恳郧卮ㄅ＜∪�5′RACE準(zhǔn)備cDNA為模板,設(shè)計(jì)5′RACE擴(kuò)增試驗(yàn),確定牛MYOZ1基因轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)。以秦川牛外周血基因組DNA為模板,通過PCR克隆獲得牛MYOZ1基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)-1 628/+61目的片段。通過生物信息學(xué)分析軟件預(yù)測可能包含的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn),設(shè)計(jì)逐段缺失引物,獲得7個(gè)亞克隆,將其分別與pGL3-Basic載體連接,得到牛MYOZ1基因啟動子雙熒光素酶報(bào)告基因重組質(zhì)粒,通過脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染C2C12細(xì)胞系,檢測7個(gè)重組質(zhì)粒的熒光素酶活性,分析啟動子活性�！窘Y(jié)果】確定了牛MYOZ1基因的轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn),成功克隆獲得7個(gè)系列缺失的牛MYOZ1基因啟動子雙熒光素酶報(bào)告基因重組質(zhì)粒:pMYOZ1-1 628/+61、pMYOZ1-1 430/+61、pMYOZ1-1 179/+61、pMYOZ1-932/+61、pMYOZ1-676/+61、pMYOZ1-437/+61和pMYOZ1-116/+61,其中重組質(zhì)粒pMYOZ1-116/+61啟動子活性極顯著高于pGL3-Basic,推測牛MYOZ1基因-116/+61區(qū)域可能包含核心啟動子;重組質(zhì)粒pMYOZ1-1 628/+61啟動子活性極顯著高于pMYOZ1-1 430/+61片段活性(P0.01),表明牛MYOZ1基因啟動子區(qū)域-1 628/-1 430片段可能包含啟動子活性增強(qiáng)元件。生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn),牛MYOZ1基因啟動子-116/+61片段可能包含SP1、GC Box、CAAT等多個(gè)重要轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn);-1 628/-1 430片段可能包含SP1、MyoD等多個(gè)重要轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)。【結(jié)論】成功構(gòu)建了7個(gè)系列缺失的牛MYOZ1基因啟動子雙熒光素酶報(bào)告基因重組質(zhì)粒,且初步確定了牛MYOZ1基因的核心啟動子區(qū)域位于-116/+61。
【關(guān)鍵詞】： 牛 MYOZ ′RACE 啟動子 雙熒光素酶報(bào)告載體
【正文快照】： 第 ４４ 卷 　 第 ９ 期 ２０１６ 年 ９ 月 西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào) （ 自然科學(xué)版 ） Ｊｏｕｒｎａｌ�。铮妗。危铮颍簦瑁鳎澹螅簟。粒Γ啤。眨睿椋觯澹颍螅椋簦� （ Ｎａｔ．Ｓｃｉ．Ｅｄ． ） Ｖｏｌ．４４ Ｎｏ．９ Ｓｅｐ．２０１６ 網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間 ，

本文編號：546061