發(fā)布時(shí)間：2017-07-15 10:22

  本文關(guān)鍵詞：家蠅GAPDH基因的克隆、表達(dá)及作為內(nèi)參的可靠性分析

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【摘要】：目的探討家蠅甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)基因在不同飼料飼養(yǎng)、不同發(fā)育期及不同組織的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)情況,評(píng)價(jià)其作為家蠅功能基因研究?jī)?nèi)參的穩(wěn)定性。方法運(yùn)用PCR技術(shù)擴(kuò)增GAPDH基因完整編碼序列,生物信息學(xué)方法預(yù)測(cè)該基因及其編碼蛋白功能。構(gòu)建pET-28a(+)-GAPDH重組質(zhì)粒,轉(zhuǎn)化到大腸埃希菌Transetta(DE3)中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),純化重組蛋白制備多克隆抗體。運(yùn)用Real-time PCR和Western blot檢測(cè)家蠅不同發(fā)育期、三齡幼蟲不同組織和不同飼養(yǎng)物處理下GAPDH基因的表達(dá)情況。結(jié)果家蠅GAPDH基因ORF全長(zhǎng)999bp,編碼332個(gè)氨基酸,理論分子質(zhì)量37.3ku,等電點(diǎn)為8.57,具有GAPDH家族的蛋白保守結(jié)構(gòu)域;構(gòu)建的重組質(zhì)粒經(jīng)PCR及測(cè)序鑒定正確;SDS-PAGE分析顯示重組質(zhì)粒在Transetta(DE3)中表達(dá),純化后的表達(dá)產(chǎn)物與目的蛋白大小相符,Western blot顯示該蛋白可被相應(yīng)血清識(shí)別;Real-time PCR分析GAPDH基因在不同飼料飼養(yǎng)3齡幼蟲、不同發(fā)育期均保持較好的轉(zhuǎn)錄穩(wěn)定性,同時(shí),Western blot分析GAPDH分子在家蠅不同發(fā)育期及3齡幼蟲不同組織中均有表達(dá),且表達(dá)量無(wú)明顯差別。結(jié)論 GAPDH基因在不同發(fā)育期、不同組織及不同飼養(yǎng)物飼養(yǎng)的家蠅表達(dá)穩(wěn)定,可作為家蠅可靠性內(nèi)參基因使用。
【作者單位】： 貴州醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院;貴州醫(yī)科大學(xué)生物與工程學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 家蠅 GAPDH基因 克隆表達(dá) 內(nèi)參基因
【基金】：國(guó)家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(No.2011BAC06B12) 國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.81360254) 貴州省高等學(xué)校創(chuàng)新能力提升計(jì)劃項(xiàng)目(No.07060151306) 貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院院基金項(xiàng)目(合同字第009號(hào))
【分類號(hào)】：R384.2;Q78
【正文快照】： ***家蠅(Musca domestica)屬昆蟲綱、雙翅目、家蠅科,為世界性衛(wèi)生害蟲[1]。家蠅對(duì)惡劣環(huán)境具有極強(qiáng)的適應(yīng)力,其先天性免疫系統(tǒng)和調(diào)控機(jī)制是研究的熱點(diǎn),分子生物學(xué)技術(shù)也隨之成為家蠅功能分子和免疫機(jī)制研究的主要手段。家蠅營(yíng)養(yǎng)豐富,含多種活性物質(zhì),這些功能分子已成為農(nóng)業(yè)、

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 楊劍;張大川;梁樹堅(jiān);林政炯;;Crystallographic Studies of Molecular Asymmetry of Activesite Carboxymethylated GAPDH[J];Chinese Science Bulletin;1993年12期

2 李潔;謝文光;沈倍奮;邵寧生;;GAPDH功能多樣性研究進(jìn)展[J];軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院院刊;2006年05期

3 尚海旭;井然;賈弘y，

本文編號(hào)：543474