本文關(guān)鍵詞：桂花C4H基因的克隆與表達(dá)特性分析

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【摘要】：利用轉(zhuǎn)錄組測序獲得的表達(dá)序列信息,結(jié)合RACE技術(shù),從桂花(Osmanthus fragrans)花瓣中克隆到兩個(gè)參與苯丙烷代謝第2步反應(yīng)的肉桂酸 4 羥基化酶(C4H)基因。其ORF全長分別為1 518 bp和1 611 bp,各自編碼505和536個(gè)氨基酸,命名為OfC4H1和Of C4H2(登錄號分別為KR861466、KF254842)。系統(tǒng)進(jìn)化樹表明,OfC4H1與矮牽牛中的PhC4H1、PhC4H2等C4H蛋白聚為一類,屬于ClassⅠ類型;OfC4H2與金銀花中的LjC4H等屬于ClassⅡ類型。進(jìn)一步的C4H蛋白序列多重比較發(fā)現(xiàn),OfC4H1和OfC4H2蛋白具有該基因家族特有的保守結(jié)構(gòu)域,在這些保守結(jié)構(gòu)域中存在區(qū)別兩類C4H蛋白的典型特征。利用Real-time PCR比較分析了OfC4H1和OfC4H2基因的時(shí)空表達(dá)模式,結(jié)果顯示,Of C4H1在花瓣中的表達(dá)量最高;OfC4H2在花瓣中的表達(dá)量較低,在花梗、雌蕊和幼葉等組織中表達(dá)量較高。構(gòu)建原核表達(dá)載體pET6xHN-C4Hs,轉(zhuǎn)化Transetta(DE3)大腸桿菌并誘導(dǎo)表達(dá)的結(jié)果表明,目的蛋白能在原核表達(dá)系統(tǒng)中順利表達(dá),而且與預(yù)期大小一致,但因溶解度較低無法進(jìn)行酶活性分析。
【作者單位】： 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝植物生物學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 桂花 肉桂酸 羥基化酶 黃酮類化合物 原核表達(dá) 基因表達(dá)
【基金】：教育部博士點(diǎn)基金項(xiàng)目(20130146110022) 黃岡師范學(xué)院項(xiàng)目(2015TD02)
【分類號】：S685.13
【正文快照】： 桂花(Osmanthus fragrans)具有很高的觀賞價(jià)值,食用價(jià)值和藥用價(jià)值。根據(jù)花色的不同,桂花被劃分為銀桂品種群、金桂品種群和丹桂品種群(向其柏和劉玉蓮,2008)。類胡蘿卜素的積累導(dǎo)致桂花的花色加深。目前有關(guān)類胡蘿卜素組分及其生物合成分子機(jī)制的研究已有報(bào)道(Han et al.,201，

本文編號：543027