本文關(guān)鍵詞：人Irisin基因的克隆、原核表達(dá)及重組蛋白的純化

  更多相關(guān)文章： 鳶尾素(Irisin) 基因克隆 原核表達(dá) 蛋白純化

【摘要】：鳶尾素(Irisin)是新發(fā)現(xiàn)的一種肌肉因子,其前體是Ⅲ型纖連蛋白組件包含蛋白5(fibronectin typeⅢdomain-containing protein 5,FNDC5)。為實(shí)現(xiàn)人(Homo sapiens)Irisin的原核表達(dá),通過反轉(zhuǎn)錄PCR得到人肌肉組織總RNA的c DNA,并以特異性引物擴(kuò)增得到人FNDC5基因的c DNA序列。以特異性引物擴(kuò)增將人Irisin基因序列引入NdeⅠ和XhoⅠ酶切位點(diǎn),經(jīng)雙酶切后插入原核表達(dá)載體p ET-30a中,構(gòu)建重組質(zhì)粒并轉(zhuǎn)化大腸桿菌(Escherichia coli)Rosetta(DE3)p Lys S。通過異丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(isopropylβ-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)誘導(dǎo)表達(dá),進(jìn)行十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳(sodium dodecyl dulfate polyacrylamide gel electropheresis,SDS-PAGE)檢測,用鎳柱純化目的蛋白,并用Western blot方法鑒定。DNA序列分析結(jié)果顯示,克隆的人Irisin基因序列和NCBI公布的序列一致,并成功構(gòu)建了p ET-30a-Irisin重組表達(dá)載體;SDS-PAGE電泳檢測和Western blot結(jié)果表明,表達(dá)蛋白分子量約為14 k D,與預(yù)期大小一致;實(shí)現(xiàn)了人Irisin的可溶性表達(dá),得到了較高純度的目的蛋白,為進(jìn)一步研究人Irisin蛋白的結(jié)構(gòu)、功能及應(yīng)用提供了理論依據(jù)。
【作者單位】： 常熟理工學(xué)院生物與食品工程學(xué)院;中國礦業(yè)大學(xué)化工學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 鳶尾素(Irisin) 基因克隆 原核表達(dá) 蛋白純化
【基金】：國家自然科學(xué)基金(No.31472091) 江蘇省自然科學(xué)基金(No.BK20151257)
【分類號】：Q78
【正文快照】： 鳶尾素(Irisin)是Spiegelman實(shí)驗(yàn)室于2012年在人(Homo sapiens)和小鼠(Mus musculus)的體內(nèi)所發(fā)現(xiàn)的一種新的肌肉因子(Bostr?m et al.,2012),是蛋白水解酶剪切Ⅲ型纖連蛋白組件包含蛋白5(fi-bronectin typeⅢdomain-containing protein 5,FNDC5)之后所形成的可分泌多肽片段(Te

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3 韓鈺;王艷林;;小鼠精胺氧化酶的原核表達(dá)與鑒定[J];生物技術(shù)通訊;2007年01期

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6 謝海燕,郭霄峰;豬α-干擾素的原核表達(dá)[J];華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);2004年04期

7 孫東波;馮力;劉杰;時(shí)洪艷;佟有恩;劉勝旺;童光志;;豬傳染性胃腸炎病毒n基因的原核表達(dá)及重組蛋白的免疫活性分析[J];病毒學(xué)報(bào);2006年02期

8 孫軍;王俊杰;秦波;伏秀青;高倩倩;王興智;朱筱娟;;粘著斑激酶的原核表達(dá)、純化及抗體的制備[J];分子科學(xué)學(xué)報(bào);2007年02期

9 戴華;鄭佳玉;陳俊華;潘志明;焦新安;;雞α干擾素基因的原核表達(dá)及其活性測定[J];中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào);2009年10期

10 湯承;張兆敏;岳華;;雞熱休克蛋白70基因的克隆及原核表達(dá)[J];西南民族大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2011年03期

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1 馬文濤;閆若潛;吳志明;劉光輝;盛敏;謝彩華;;豬白細(xì)胞介素-6的原核表達(dá)及其生物學(xué)活性研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會2010年學(xué)術(shù)年會——第二屆中國獸醫(yī)臨床大會論文集(下冊)[C];2010年

2 丁夢蝶;魯?shù)?王紅寧;田浪;陽泰;張毅;樊汶樵;郭自成;;禽傳染性支氣管炎病毒多基因串聯(lián)表位抗原的原核表達(dá)研究[A];四川省動物學(xué)會第九次會員代表大會暨第十屆學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2011年

3 隋桂琴;左玲;王桂云;;人堿性成纖維細(xì)胞生長因子的原核表達(dá)[A];中國眼底病論壇·全國眼底病專題學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2008年

4 黃斯勇;梁英民;韓驊;李國輝;伍艷蘭;康志杰;何飛;張萍;徐恒;劉利;;人Detla-like4ext-93-217原核表達(dá)、純化及蛋白活性檢測[A];第12屆全國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會議論文摘要[C];2009年

5 張紅;劉志國;屈伸;;人源受體相關(guān)蛋白的原核表達(dá)優(yōu)化及功能檢測[A];湖北省暨武漢生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)會第八屆會員代表大會和第十五次學(xué)術(shù)年會論文摘要匯編[C];2004年

6 袁志棟;王志亮;劉雨田;吳曉東;劉海生;;水貂朊蛋白前體基因的克隆與原核表達(dá)[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會畜牧獸醫(yī)生物技術(shù)學(xué)分會暨中國免疫學(xué)會獸醫(yī)免疫分會第六次研討會論文集[C];2005年

7 王士友;張耀洲;;一個(gè)新的家蠶基因的克隆、原核表達(dá)及純化[A];華東六省一市生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)會2006年學(xué)術(shù)交流會論文集[C];2006年

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1 張曉鳴;人IL-16的原核表達(dá)與其功能的初步研究[D];中國科學(xué)院研究生院（上海生命科學(xué)研究院）;2000年

2 曹秀利;楊樹PtCDD基因的原核表達(dá)及酶活分析[D];南京林業(yè)大學(xué);2008年

3 黃新河;小鼠TAp63γ的原核表達(dá)、純化、結(jié)構(gòu)及功能初步研究[D];四川大學(xué);2007年

4 張大鵬;VP60蛋白的原核表達(dá)、抗體制備及VP60基因轉(zhuǎn)化的研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2012年

5 張少斌;豌豆肌動蛋白異型體（PEAc1）的原核表達(dá)及其藻熒光探針的研制[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2004年

6 尹國華;利用Red重組系統(tǒng)構(gòu)建dsRNA原核表達(dá)體系抗煙草花葉病毒的研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

7 于揚(yáng);重組人源GPx4及其模擬物的原核表達(dá)、結(jié)構(gòu)與功能的研究[D];吉林大學(xué);2013年

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1 曹瑩瑩;1型鴨甲肝病毒VP2和VP4蛋白原核表達(dá)及間接ELISA檢測方法的建立[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

2 李鵬;青稞查爾酮異構(gòu)酶基因的克隆及原核表達(dá)分析[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

3 方建;青稞查爾酮合酶基因的克隆與原核表達(dá)[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

4 曹雪蓮;鴨瘟病毒UL41基因原核表達(dá)、轉(zhuǎn)錄時(shí)相及亞細(xì)胞定位[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

5 張濵飛;青稞類黃酮O-甲基轉(zhuǎn)移酶基因的克隆及原核表達(dá)分析[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

6 徐啟玉;文昌魚尾部再生過程中BMPR-I,BMPR-II,Smad1,Smad4,Smad7基因的表達(dá)模式研究和BMP2/4,BMPR-I,BMPR-II的原核表達(dá)、多抗制備和免疫定位[D];中國海洋大學(xué);2015年

7 喬淦;一種文蛤多肽基因的克隆、原核表達(dá)、純化及功能性研究[D];青島科技大學(xué);2016年

8 孫軍;粘著斑激酶的原核表達(dá)、純化及抗體的制備[D];東北師范大學(xué);2007年

9 丁華靜;家蠶內(nèi)皮單核細(xì)胞激活多肽Ⅱ基因的克隆與原核表達(dá)[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

10 唐漫書;豬白細(xì)胞介素-6基因的原核表達(dá)及免疫檢測研究[D];四川大學(xué);2002年

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本文編號：539495