本文關(guān)鍵詞：矮牽牛幾個花型相關(guān)基因初步功能鑒定

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【摘要】：隨著人們生活水平的不斷提高,對精神生活的享受也越來越重視。賞花可以作為精神享受的活動之一,使得社會中對花卉的需求量將會越來越大,對花卉質(zhì)量的要求也會越來越高。目前在關(guān)于花卉的研究中,有花香、花色、花期和花型四大方向。然而,在花型的相關(guān)研究中,由于突變體的數(shù)量及類型有限,所以對其認(rèn)識也因此而受到限制。通過調(diào)控高等植物的近遠(yuǎn)軸面的極性可以調(diào)控花型。就目前的研究報道,控制高等植物遠(yuǎn)軸面極性的基因家族主要有KANADI、YABBY和ARF3/4等,控制植物近軸面極性的基因有PHANTASTICA、HD-ZIPIII和AS1/2等。在擬南芥中,HD-ZIPIII(Class III HD ZIP)基因首次在異位葉片及腋芽分生組織中發(fā)現(xiàn)。其基因家族成員都參與控制葉片細(xì)胞分化、單復(fù)葉演化以及花器官發(fā)育等過程。矮牽牛也是研究植物器官發(fā)育的重要模式植物之一,但對矮牽�；ㄐ拖嚓P(guān)基因的研究報道還不多,從而這些基因?qū)Π珷颗８髌鞴侔l(fā)育的影響仍然未知。本研究擬通過VIGS技術(shù)初步探索幾個花型相關(guān)基因在矮牽牛中的功能。本研究首先根據(jù)前期獲得的目的基因PhCNX5、PhPHV1、PhKNX2、PhAS2和PhKAN1的全長序列設(shè)計引物,采用PCR技術(shù)成功克隆出目的基因片段,以PhCHS作為報告基因,pTRV2-PhCHS作為載體,成功構(gòu)建重組載體pTRV2-PhCHS-PhCNX5、pTRV2-PhCHS-PhPHV1、pTRV2-PhCHS-PhKNX2和pTRV2-PhCHS-PhAS2,以pTRV2為載體,成功構(gòu)建pTRV2-PhKAN1重組載體,再利用VIGS技術(shù)獲得PhCNX5、PhPHV1、PhKNX2、PhAS2和PhKAN1沉默植株。最后通過對其進行表型觀察,花和葉衰老情況的觀察,顯微觀察等途徑探索PhCNX5、PhPHV1、PhKNX2、PhAS2和PhKAN1沉默植株表型及細(xì)胞水平上的變化,并對矮牽牛PhCNX5、PhPHV1、PhKNX2、PhAS2和PhKAN1進行初步的功能分析。結(jié)果如下:(1)PhCNX5在矮牽牛中參與生長素的合成來影響花原基細(xì)胞的分化從而影響花型;與矮牽牛葉片衰老有關(guān),葉片更快變黃衰老。(2)PhPHV1與花梗發(fā)育相關(guān),沉默植株花梗長度顯著增加。(3)PhKNX2參與控制矮牽�；ㄔ�(xì)胞分化從而影響花型。(4)PhAS2參與控制矮牽�；ㄔ腿~原基細(xì)胞分化從而影響花型葉型。(5)PhKAN1在矮牽牛中參與植物激素合成或運輸以及花原基細(xì)胞分化從而影響花型。
【關(guān)鍵詞】：矮牽牛 花型 株型 VIGS
【學(xué)位授予單位】：華南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S681.9
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-11
• 1 前言11-22
• 1.1 葉片發(fā)育的演化進展11-12
• 1.2 花型相關(guān)基因研究進展12-20
• 1.2.1 花發(fā)育的ABC模型到A-E模型12-13
• 1.2.2 CNX基因研究進展13-16
• 1.2.3 HD-ZIPIII、AS2基因研究進展16-17
• 1.2.4 KAN基因研究進展17-18
• 1.2.5 KNX基因研究進展18-20
• 1.3 病毒誘導(dǎo)基因沉默研究進展20-21
• 1.3.1 VIGS的原理機制20
• 1.3.2 TRV-VIGS系統(tǒng)20-21
• 1.4 目的意義21-22
• 2 材料與方法22-36
• 2.1 實驗材料22-25
• 2.1.1 植物材料22
• 2.1.2 病毒載體22-23
• 2.1.3 菌種23
• 2.1.4 主要試劑23
• 2.1.5 PCR引物23-24
• 2.1.6 主要儀器設(shè)備24-25
• 2.2 實驗方法25-36
• 2.2.1 矮牽�？俁NA的提取25-26
• 2.2.1.1 實驗器具的處理與藥品配制25
• 2.2.1.2 RNA提取步驟25-26
• 2.2.2 cDNA的合成26-27
• 2.2.3 目的基因片段的克隆27-29
• 2.2.3.1 引物的設(shè)計27
• 2.2.3.2 引物工作液的稀釋27
• 2.2.3.3 PCR擴增與檢測27-28
• 2.2.3.4 PCR產(chǎn)物的回收28-29
• 2.2.4 載體質(zhì)粒的提取29-30
• 2.2.5 構(gòu)建重組載體30-32
• 2.2.5.1 目的片段與載體連接30-31
• 2.2.5.2 大腸桿菌DH5α 感受態(tài)的制備31
• 2.2.5.3 連接產(chǎn)物導(dǎo)入大腸桿菌31-32
• 2.2.5.4 陽性克隆的鑒定32
• 2.2.5.5 重組質(zhì)粒的抽提32
• 2.2.6 重組載體導(dǎo)入農(nóng)桿菌32-33
• 2.2.6.1 農(nóng)桿菌感受態(tài)的制備32-33
• 2.2.6.2 重組質(zhì)粒導(dǎo)入農(nóng)桿菌33
• 2.2.7 農(nóng)桿菌侵染矮牽牛植株33
• 2.2.7.1 侵染液的配制33
• 2.2.7.2 侵染方法33
• 2.2.8 表型觀察及材料處理33-35
• 2.2.8.1 表型觀察及拍照33-34
• 2.2.8.2 觀察花、葉衰老情況34
• 2.2.8.3 臺盼藍染色觀察34
• 2.2.8.4 顯微鏡觀察34-35
• 2.2.8.5 掃描電鏡觀察35
• 2.2.9 實時熒光定量PCR35-36
• 2.2.9.1 熒光引物設(shè)計35
• 2.2.9.2 熒光定量PCR方法35-36
• 2.2.9.3 實驗數(shù)據(jù)分析36
• 3 結(jié)果與分析36-48
• 3.1 PhCNX5、PhPHV1、PhKNX2、PhAS2和PhKAN1基因片段的克隆36-38
• 3.1.1 PhCNX5、PhPHV1、PhKNX2、PhAS2和PhKAN1特異片段序列的獲得36-37
• 3.1.2 PhCNX5、PhPHV1、PhKNX2、PhAS2和PhKAN1目的片段的擴增37
• 3.1.3 pTRV2和pTRV2-PhCHS載體質(zhì)粒的提取37-38
• 3.2 VIGS載體構(gòu)建38-39
• 3.3 重組載體導(dǎo)入農(nóng)桿菌39-40
• 3.4 VIGS沉默后表型觀察40-48
• 3.4.1 PhCNX5、PhPHV1、PhKNX2、PhAS2和PhKAN1沉默對矮牽牛的影響40-44
• 3.4.1.1 PhCNX5沉默對花型的影響40-41
• 3.4.1.2 PhCNX5沉默對葉的影響41-42
• 3.4.1.3 PhCNX5沉默對整體植株的影響42-43
• 3.4.1.4 PhCNX5沉默對生長素相關(guān)基因的影響43-44
• 3.4.2 PhPHV1沉默對矮牽牛的影響44-45
• 3.4.3 PhKNX2沉默對矮牽牛的影響45-46
• 3.4.4 PhAS2沉默對矮牽牛的影響46-47
• 3.4.4.1 PhAS2沉默對花型的影響46-47
• 3.4.4.2 PhAS2沉默對葉的影響47
• 3.4.5 PhKAN1沉默對矮牽牛的影響47-48
• 3.4.5.1 PhKAN1沉默對花型的影響47-48
• 3.4.5.2 PhKAN1沉默對植株長勢的影響48
• 4 討論與結(jié)論48-53
• 4.1 討論48-52
• 4.1.1 PhCNX5、PhPHV1、PhKNX2、PhAS2和PhKAN1沉默對植株各器官變化的影響48-51
• 4.1.2 PhCNX5、PhPHV1、PhKNX2、PhAS2和PhKAN1研究結(jié)果的新穎之處51
• 4.1.3 下階段工作51-52
• 4.2 結(jié)論52-53
• 致謝53-54
• 參考文獻54-61
• 附錄61-63

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 ;Ectopic expression of soybean GmKNT1 in Arabidopsis results in altered leaf morphology and flower identity[J];遺傳學(xué)報;2008年07期

2 丁偉喬;徐全樂;蒲帆;高清祥;王崇英;;Pttkn1基因異位表達對煙草葉片形態(tài)的影響[J];西北植物學(xué)報;2008年03期

3 黃亦工;魏娜;孫宜;;觀賞植物花期催延技術(shù)的研究進展[J];寧夏農(nóng)林科技;2006年03期

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本文編號：532472