本文關(guān)鍵詞：點青霉葡萄糖氧化酶基因的克隆及其酶學(xué)性質(zhì)研究

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【摘要】：旨在克隆點青霉菌(Penicillium notatum)中的葡萄糖氧化酶基因(GOD),在畢赤酵母(Phchia pastoris)中異源表達,純化并研究其酶學(xué)性質(zhì)。利用PCR技術(shù)從點青霉No.8312菌株的基因組DNA中克隆得到GOD基因,將該基因克隆到穿梭載體p MD-AOX上并在畢赤酵母X33中表達,對純化后的葡萄糖氧化酶的酶學(xué)性質(zhì)進行分析。結(jié)果顯示,X33-GOD可高表達具有活性的GOD,在30℃、pH6.5的條件下,其培養(yǎng)液上清GOD酶活可達496 U/mL,比活123.0 U/mg;重組表達的葡萄糖氧化酶最適溫度為40-45℃,最適pH為6.0,酶的穩(wěn)定性研究表明,該酶在pH3.5-7.0區(qū)間和溫度低于50℃下穩(wěn)定。1 mmol/L Zn~(2+)對其有激活作用;Ag~+對該酶活性有較大抑制作用。構(gòu)建出GOD的高產(chǎn)畢赤酵母工程菌株,與點青霉GOD相比,具有更高的發(fā)酵酶活和比活。
【作者單位】： 河北省微生物研究所;中國科學(xué)院微生物研究所;
【關(guān)鍵詞】： 葡萄糖氧化酶 點青霉菌 重組表達
【基金】：河北省科技計劃項目(14292804D) 河北省科學(xué)院科技計劃項目(20150503 LR62-3)
【分類號】：Q78;Q55
【正文快照】： 葡萄糖氧化酶(Glucose oxidase,EC 1.1.3.4,簡氧化氫。因其氧化反應(yīng)生成過氧化氫,在實際應(yīng)用稱GOD)是氧化-還原酶類的典型代表,能夠在中葡萄糖氧化酶被用作抗菌劑。另外,葡萄糖氧化氧氣存在時專一催化β-D-葡萄糖生成葡萄糖酸和過酶作為生物催化劑常用于臨床診斷、食品和飲料

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